结核性胸膜炎患者胸腔积液中TLR2、TLR4水平变化及临床意义

叶涛生　张娇红　张培泽　曾旋　徐宇翔　李敏

[摘要] 目的 探討结核性胸膜炎患者胸腔积液中Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）水平变化及临床意义。 方法 选取2016年1月～2018年12月深圳市第三人民医院（以下简称“我院”）收治的102例结核性胸膜炎患者（A组），另选取80例恶性胸腔积液患者（B组）、62例细菌性肺炎患者（C组），采用酶联免疫吸附试验检测TLR2、TLR4、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-2（MCP-2）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）水平，采用Pearson相关性分析TLR2、TLR4与TNF-α、MCP-2、MMP-1的相关性，采用受试者工作特征曲线（ROC）分析TLR2、TLR4的诊断价值。 结果 A组TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平均高于B组、C组（P < 0.05）。Pearson相关系数分析可知，结核性胸膜炎患者TLR2与TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈正相关（P < 0.05），而TLR4与TNF-α、MCP-2、MMP-1均无相关性（P > 0.05）。结核性胸膜炎患者TLR2与TLR4呈显著正相关（P < 0.05）。TLR2诊断结核性胸膜炎的曲线下面积为0.724，显著高于TLR4的曲线下面积0.518（P < 0.05）。结论 结核性胸膜炎患者TLR2水平呈现明显升高趋势，且与胸腔积液中TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈显著正相关，提示其可能参与着结核性胸膜炎病情的发生发展，对结核性胸膜炎有较好的诊断价值。

[关键词] 结核性胸膜炎;胸腔积液;TLR2;TLR4;临床意义

[中图分类号] R52          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）06（b）-0117-04

Changes and clinical significance of TLR2 and TLR4 levels in pleural effusion of patients with tuberculous pleurisy

YE Taosheng   ZHANG Jiaohong   ZHANG Peize   ZENG Xuan   XU Yuxiang   LI Min

Respiratory Endoscopy Room， the Third People′s Hospital of Shenzhen， Guangdong Province， Shenzhen   518000， China

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of Toll-like receptor 2 （TLR2） and Toll-like receptor 4 （TLR4） levels in pleural effusion of patients with tuberculous pleurisy. Methods From January 2016 to December 2018， 102 patients with tuberculous pleurisy who were admitted to the Third People′s Hospital of Shenzhen （"our hospital" for short） were selected（group A）， and 80 patients with malignant pleural effusion （group B） and 62 patients with bacterial pneumonia（group C）. The enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect all the TLR2 and TLR4， tumor necrosis factor alpha （TNF-α）， monocyte chemotactic protein-2 （MCP-2）， matrix metalloproteinase 1 （MMP-1） levels， Pearson correlation coefficient method was used to analyze correlation of  TLR2， TLR4 and TNF-α， MCP-2， MMP 1; the receiver-operating characteristic curve （ROC） analysis was adopted to assess the diagnostic value of TLR2 and TLR4. Results The levels of TLR2， TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in group A were higher than those in group B and group C （P < 0.05）. Pearson correlation coefficient analysis showed that TLR2 was positively correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in tuberculous pleurisy （P < 0.05）， while TLR4 was not correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 （P > 0.05）. TLR2 was positively correlated with TLR4 in patients with tuberculous pleurisy （P < 0.05）. The area under the curve of TLR2 in diagnosis of tuberculous pleurisy was 0.724， which was significantly higher than that under the curve of TLR4 （P < 0.05）. Conclusion TLR2 levels in tuberculous pleurisy patients show a significant upward trend， and are significantly positively correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in pleural effusion， which may be involved in the occurrence and development of tuberculous pleurisy and have a better diagnostic value for tuberculous pleurisy.

[Key words] Tuberculous pleurisy; Pleural effusion; TLR2; TLR4; Clinical significance

结核性胸膜炎主要是由于结核分枝杆菌及其代谢产物、自溶产物进入超敏感机体的胸膜腔而引起的胸膜炎症[1]。该病临床主要表现为畏寒、盗汗、呼吸困难等症状[2-3]。通过检测胸腔积液中的结核分枝杆菌是诊断结核性胸膜炎的金标准，但由于胸腔积液结核分枝杆菌培养技术存在敏感度低等缺点，使其临床应用有一定的局限性[4-5]。随着对疾病研究机制的深入，分子生物学、免疫学等逐渐应用于结核性胸膜炎的检测中，Toll样受体（TLR）是天然免疫类蛋白分子，可介导先天免疫和病原体配体的免疫应答，迄今为止，已发现11种人类Toll样受体，可识别源于病毒、细菌、真菌以及寄生虫的多种分子[6-7]。其中TLR2可识别大部分已发现的PAMP结构，包括分支杆菌、革兰阳性菌以及多种微生物等，TLR4可识别多数细菌的脂多糖、革兰阴性菌外模的成分[8-9]。可见TLR2、TLR4与细菌感染关系密切，现临床有关TLR2、TLR4水平变化与结核性胸膜炎的关系报道尚不多见，就此展开分析，以期为临床结核性胸膜炎早期诊断提供数据支撑。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取广东省深圳市第三人民医院（以下简称“我院”）于2016年1月～2018年12月间接收的102例结核性胸膜炎患者作为A组，纳入标准：①均符合《现代结核学》[10]中的相关诊断标准;②胸腔积液样本和/或痰样本中培养到结核分枝杆菌;③年龄18～70岁;④知情次研究且已签署同意书。排除标准：①合并严重心肝肾等功能异常者;②妊娠及哺乳期妇女;③近期进行过胸部侵入性检查或胸部手术者;④病毒、真菌等引起的胸膜感染者;⑤近期接受过糖皮质激素、免疫抑制剂及抗肿瘤治疗者。其中A组男66例，女36例;年龄18～70岁，平均（41.68±5.34）岁。另选取同期我院收治的恶性胸腔积液患者80例为B组和62例细菌性肺炎患者作为C组。B组男52例，女28例;年龄19～69岁，平均（41.73±6.25）岁。C组男41例，女21例;年龄20～70岁，平均（42.06±5.31）岁。三组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性，本研究已获取我院医学伦理学委员会批准。

1.2方法

入院后均通过胸腔穿刺术采集胸腔积液4 mL，加入肝素抗凝，经1200 r/min离心6 min，离心半径7 cm，取上清液，置于-80℃冰箱中待测。采用酶联免疫吸附试验检测TLR2、TLR4、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-2（MCP-2）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）水平，试剂盒购自武汉华美生物科技有限公司，严格遵守说明书进行操作。

1.3 统计学方法

所有数据采用SPSS 25.0对所得数据进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，多组比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验;计数资料采用百分率表示，组间比较采用χ2检验。采用Pearson相关系数法分析指标间的相关性，采用受试者工作特征曲线（ROC）分析TLR2、TLR4的诊断价值。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组TLR2、TLR4、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平比较

三组TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平整体比较，差异有统计学意义（P < 0.05），而三组TLR4整体比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。A组TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平均高于B组、C组（P < 0.05），而B组、C组TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 结核性胸膜炎患者TLR2、TLR4与TNF-α、MCP-2、MMP-1的关系

Pearson相关性分析可知，结核性胸膜炎患者TLR2与TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈顯著正相关（P < 0.05），而TLR4与TNF-α、MCP-2、MMP-1均无相关性（P > 0.05）。见表2。

2.3 结核性胸膜炎患者TLR2与TLR4的关系

Pearson相关性分析可知，结核性胸膜炎患者TLR2与TLR4呈正相关（r = 0.547，P = 0.000）。

2.4 TLR2、TLR4对结核性胸膜炎患者的诊断价值

将TLR2、TLR4指标数据划分成若干组段，建立对结核性胸膜炎的诊断价值的ROC分析模型。ROC曲线分析显示，TLR2诊断结核性胸膜炎的曲线下面积为0.724（95%CI：0.627～0.821，P < 0.05），约登指数最大值为0.507，此时其预测患者结核性胸膜炎的特异性、敏感度分别为52.17%、79.43%。TLR4诊断结核性胸膜炎的曲线下面积为0.518（95%CI：0.406～0.613，P < 0.05），约登指数最大值为0.203，此时其预测患者结核性胸膜炎的特异性、敏感度分别为81.13%、26.49%。TLR2诊断结核性胸膜炎患者的诊断价值明显大于TLR4（Z = 2.646，P = 0.008）。见图1。

TLR2：Toll样受体2;TLR4：Toll样受体4

3 讨论

胸膜腔是胸壁与肺之间的一个腔隙，正常情况下腔隙之间存在少量液体，且处于动态平衡。当胸膜腔内液体失衡时，易产生胸腔积液[11-12]。临床胸腔积液较为常见，但是有关胸腔积液的病因诊断，特别是结核性胸腔积液，由于缺乏特异性的临床表现、实验室检查以及影响学特征等，较难作出诊断结果[13]。此外，胸腔镜胸膜活检术费用高，创伤大，临床应用受限，多方面原因导致结核性胸膜炎早期临床诊断困难，易延误最佳治疗时机[14]。发病过程中，可导致胸膜通透性增加，导致淋巴细胞的局部募集、富含蛋白的液体的累积并形成渗出性胸腔积液[15]。通常情况下，恶性及结核性胸腔积液以淋巴细胞为主，而细菌性胸腔积液（如肺炎、脓胸等）则以中性粒细胞为主[16]。故而笔者认为通过测定这些免疫因子，并进一步分析结核性胸膜炎的发病机制，可能有助于结核性胸膜炎的早期快速诊断。

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