注射用盐酸罗沙替丁醋酸酯与注射用卡络磺钠体外配伍的稳定性研究

周 灿，王林海，余世荣，陈富超，于慧斌，胡 晓*

0 引言

盐酸罗沙替丁醋酸酯(Roxatidine acetate hydr-ochloride，ROX)属于第4代H2受体拮抗剂，可有效治疗消化性溃疡或急性胃黏膜病变引起的上消化道出血[1]。卡络磺钠(Carbazochrome sodium sulfonate，CSS)属于肾上腺素腙衍生物止血药，常用于上消化道、呼吸道、泌尿系统和妇产科出血[2]，有较好的安全性[3]。临床上对于消化内科和重症医学科的患者，常将两药以三通或多通管的形式进入同一静脉通道，在此过程中药物相互混合，其配伍禁忌需严格注意，但《400 种常见药物配伍禁忌表》并未收录其配伍情况，配伍后药物的成分和含量是否改变，如何维持其稳定性均有待于研究。因此，本文参照临床常用剂量，采用聚丙烯离心管在体外模拟两药在三通管中的配伍过程，在室温和高温下，以药物含量、pH值、不溶性微粒和外观变化为指标，对ROX与CSS在0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液中的稳定性进行考察，为临床安全有效用药提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津)，STARTER2100 pH计(奥豪斯仪器上海有限公司)，CP214电子天平(奥豪斯仪器上海有限公司)，聚丙烯离心管(江苏南通理能实验器材有限公司)，GWJ-4型智能微粒检测仪(天津天大天发科技有限公司)。

1.2 试药 ROX对照品(四川维克奇生物科技有限公司，批号：wkq17010901，纯度：99.5%)，CSS对照品(中国食品药品检定研究所，批号：100366-200702，纯度：98.6%)，注射用ROX(哈药集团三精加滨药业有限公司，批号：20151003，规格：75 mg)，注射用CSS(湖南五洲通药业有限责任公司，批号：1702231，规格：40 mg)，0.9%氯化钠注射液(湖北华仁同济药业有限责任公司，批号：WA1611001，规格：250 ml)，5%葡萄糖注射液(湖北华仁同济药业有限责任公司，批号：WA1612001，规格：250 ml)，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，去离子水(十堰市人民医院制剂室自制)。

2 方法与结果

2.1 配伍溶液的制备 模拟临床用药浓度，精密称取注射用ROX 10 mg和注射用CSS 4.8 mg 4份于聚丙烯离心管中，分别加入0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液各20 ml溶解，稀释，摇匀，得ROX质量浓度为0.5 mg/ml和CSS质量浓度为0.24 mg/ml的配伍溶液，贴上标签备用，作为试验组。

2.2 考察指标与判定标准 在室温(25±1)℃和高温(40±1)℃，操作间相对湿度55%±5%，自然光照条件下放置，在0 h(混合即刻)、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h观察溶液外观变化，测定不溶性微粒数及pH值，用高效液相色谱法测定ROX和CSS含量变化，以0 h含量为100%参照。凡符合以下情况之一者即判断为不能配伍[4]：出现变色、气泡、沉淀、浑浊等明显外观变化；混合后pH值RSD>2%；含量变化至少10%；每1 ml静脉注射液中10 μm及10 μm以上(粒径≥10 μm)的微粒数超过25粒，25 μm及25 μm以上(粒径≥25 μm)的微粒数超过3粒。

2.3 含量测定

2.3.1 对照品溶液的配制 精密称取ROX对照品5.16 mg置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为516 μg/ml的对照品溶液；精密称取CSS对照品1.92 mg置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为1.92 mg/ml的对照品溶液，置4 ℃保存备用。

2.3.2 色谱条件 色谱柱：Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；ROX流动相：乙腈-0.02%磷酸缓冲液(0.1 ml的磷酸溶液，溶于500 ml的蒸馏水中，用三乙胺调节pH值为5.84)=18∶82；CSS流动相：乙腈-0.15 mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH值至3.6)=11∶89；流速：1.0 ml/min；柱温：35 ℃；检测波长：ROX与CSS分别为230、363 nm；进样量：20 μl。

2.3.3 色谱专属性 取“2.3.1”项下2种药物的对照品溶液、“2.1”项下配伍溶液(0 h)适量，按“2.3.2”项下色谱条件，进样，记录色谱图，在此条件下，得出ROX、CSS保留时间分别为11.2、7.6 min，二者色谱峰理论塔板数均>4 000，两主峰与相邻杂质峰的分离度>1.5，表明专属性均良好。见图1。

2.3.4 标准曲线的建立 分别配制ROX浓度为3.25、6.5、13、26、52、104、208 μg/ml及CSS浓度为1.5、3、6、12、24、48、96 μg/ml的对照品溶液。按“2.1.3”项下色谱条件，以质量浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线。结果，两药标准曲线方程分别为A1=26.5 C1-186(r=0.999 5，n=7)，A2=379 C2+ 572.4(r=0.999 7，n=7)。线性范围分别为3.25～208、1.5～96 μg/ml。

2.3.5 精密度试验 取“2.3.4”项下ROX浓度为104、26、6.5 μg/ml及CSS浓度为48、12、3 μg/ml的溶液，按“2.1.3”项下色谱条件测定峰面积，1 d内每个浓度平行操作5次，得ROX和CSS平均日内精密度RSD分别为0.83%、1.06%，结果表明，仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

2.3.6 重复性试验 取“2.1”项下的配伍液适量，用适量流动相稀释得质量浓度为25 μg/ml的ROX溶液和12 μg/ml CSS溶液，重复配制6份，按“2.3.2”项下色谱条件，进样，记录峰面积，得两药峰面积RSD分别为0.95%、0.71%(n=6)，表明该方法重复性良好。

2.3.7 加样回收试验 精密吸取已知含量的配伍溶液9份，置10 ml量瓶中，再分别加入浓度为20、25、30 μg/ml的ROX对照品溶液和浓度为9.6、12、14.4 μg/ml CSS对照品溶液适量各3份，用流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.3.2”项下色谱条件，记录峰面积，计算加样回收率。结果ROX和CSS平均回收率分别为98.99%和99.28%，RSD分别为0.89%和1.11%，结果见表1。

2.3.8 含量测定 分别于0、1、2、4、6、8 h精密吸取配伍液1.0 ml至20 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.3.2”项下色谱条件测定峰面积，以0 h含量为100%，计算各时间点两药的相对百分含量，结果表明，在上述条件下，8 h ROX含量呈下降趋势，在5%葡萄糖注射液中，分别降低了4.76%、3.59%，在0.9%氯化钠注射液中，分别降低了1.74%、2.45%；CSS含量相对稳定，结果见表2。

2.4 外观及pH值变化 配伍液置聚丙烯离心管中，于0、1、2、4、6、8 h分别取适量，加入具塞比色管中，在黑色、白色背景下观察6 s，记录溶液外观，参照《中国药典》2015版四部pH值测定法测定溶液pH值[5]。结果显示，在上述条件下，配伍液的外观均橙红色澄明，无气泡及沉淀产生，8 h内各组配伍液pH值均保持稳定，RSD<2%，结果见表3。

2.5 不溶性微粒数 取配伍液适量，参照《中国药典》(2015版)四部通则中“不溶性微粒检查法”[5]，采用光阻法测定上述条件下不同时间点配伍液的不溶性微粒数，各配伍液重复测定4次，弃去第1次测定数据，取后续3组数据的平均值作为测定结果。结果表明，在24 h内配伍液的不溶性微粒未明显增加，均符合规定，见表4。

2.6 对照组溶液的制备与测定 取0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液各20 ml置于聚丙烯离心管中，作为对照组。分别观察对照组溶液的外观，测定其pH值及不溶性微粒数。结果显示，对照组中0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液的外观、pH值及不溶性微粒数均符合《中国药典》2015版的相关规定。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

表2 ROX和CSS在5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液中的含量变化(n=6)

表3 各配伍液pH值变化(n=6)

表4 各配伍液不溶性微粒变化(n=3)

3 讨论

笔者曾考虑筛选理想的流动相同时测定ROX和CSS的含量，但是，在预试验发现流动相的pH变化对ROX的洗脱影响较大，当pH值小于5.2时，该药在30 min内无色谱峰出现，而结合相关文献[6-8]，CSS流动相最佳pH为3.0左右。同时，由于两药最大吸收波长分别为230、363 nm，相差较大，在相应检测波长处，另一药物几乎无吸收峰，两药含量无法同时测定，因此，采用平行实验分别测定两药含量。

输液中的不溶性颗粒容易引起不良反应[9]，对人体造成危害。在实际操作量取液体时，注射器的抽吸会产生一些小气泡，影响不溶性微粒测定结果，因此，在操作过程中先用去离子水洗净容器外壁，取部分配伍液冲洗开启口及取样杯，将剩余溶液倒入取样杯中，静置2 min，以减少气泡对测定结果的干扰。试验结果显示，24 h内配伍液不溶性微粒数符合药典规定。

本实验结果显示两药与5%葡萄糖注射液配伍pH值在4.14左右，8 h时ROX含量呈下降趋势，但含量变化小于10%；而与0.9%氯化钠注射液配伍pH值在4.96左右，其含量基本保持稳定。可能的原因为ROX对pH值较敏感，酸性条件下其结构中哌啶环上的胺基给出电子，易被氧化聚合反应产生杂质，造成药物含量降低，对杂质的定性及该药在更长时间内的含量变化有待进一步研究。本研究说明注射用ROX与注射用CSS在5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液中配伍8 h内稳定。