内皮型一氧化氮合成酶基因rs3918188位点多态性与汉族原发性高血压的相关性

刘玲 林杰 李建民 王如珠

(泰州市人民医院，江苏 泰州 225300)

原发性高血压(EH)是常见的慢性病，大量研究证实此类疾病与多种心脑血管疾病的发生有密切相关性〔1～3〕，随着社会老龄化的加剧此类疾病的发病率也有所增加。EH的发病机制尚未阐明，目前主要认为受到遗传、环境、生活习惯等因素的共同影响〔4〕。近年来随着分子生物学研究的进步，EH的基因水平研究也取得了一定进展，研究显示内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因是EH的重要候选基因〔5，6〕，但关于eNOS基因rs3918188位点的多态性与汉族EH患者的相关性尚未见报道。本文就eNOS基因rs3918188位点的多态性与汉族EH的相关性进行研究。

1 资料与方法

1.1临床资料 研究对象选取2013年1月至2017年4月泰州市人民医院收治的262例EH患者作为高血压组、同期的260例健康体检者作为对照组。高血压组男140例、女122例，平均年龄(54.9±11.2)岁，均为汉族；对照组男139例、女121例，平均年龄(55.6±10.8)岁，均为汉族。EH患者符合2010年中国高血压防治指南中的相关诊断标准〔7〕。两组年龄、性别、民族等构成对比上差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2纳入和排除标准 纳入标准：①民族为汉族；②符合EH诊断(高血压组)；③正在使用降压药物(高血压组)；④知情同意并签署知情同意书。排除标准：①继发性高血压；②先天性心脏病、心瓣膜病、心肌病及肝肾功能不全者；③有内分泌病史者(对照组)。

1.3方法

1.3.1DNA提取 两组受检者均禁食12 h，次日清晨空腹取外肘静脉血3 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝，采用上海研生公司产DNA提取试剂盒提取DNA，采用美国Biotek公司产蛋白质核酸定量分析仪对DNA浓度进行测定，标化至30 ng/μl。

1.3.2基因分型 采用TaqMan法进行基因分型，仪器为ABI7300实时荧光定量PCR仪(美国Biotek公司)，建立10 μl反应体系，反应条件为：60℃下30 s，95℃下预变性10 min，95℃下15 s、60℃下60 s循环55次，60℃下30 s结束。采用SOS2.1软件包处理基因分型结果，随机抽取5%样本进行复测。复测结果一致率100%。

1.3.3测序验证 检测美国生物技术信息数据库中的单核苷酸多态性位点序列，采用Premier5.0软件设计引物，由金斯瑞生物科技公司合成。eNOS测序引物上游序列：5′-CACGTAGA-GGATCTCAACTTCGTCC-3′，下游序列为5′-GTGAACTCCCAAGATA-GTCCTACT-3′。

1.4统计学方法 采用SPSS16.0软件行χ2检验，Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验样本代表性。

2 结 果

2.1eNOS基因rs3918188位点基因型检验结果 eNOS基因rs3918188位点的扩增曲线见图1。随机从检测结果中选取5%样本进行复测，测序结果与PCR结果完全一致，见图2。

2.2eNOS基因rs3918188位点基因型分布结果 高血压组和对照组A/G基因型和等位基因频率，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

图1 eNOS基因rs3918188位点RCR扩增图

a：AA纯合子，b：GG纯合子，c：AG杂合子图2 eNOS基因rs3918188位点测序结果

表1 两组eNOS基因rs3918188位点基因型及等位基因频率对比〔n(%)〕

3 讨 论

EH是导致多种心脑血管疾病的病理基础，近年来统计显示成人高血压发病率在25%以上〔8〕，EH的防治已经成为重点问题。汉族是我国最大的民族，人群遗传背景相对复杂，但就同一个地区的人群进行研究，可一定程度上缩小环境、生活方式等因素的影响，将遗传异质性控制在较小的范围。eNOS基因与EH的相关性近年来被临床重视，eNOS基因位于7号染色体q35～36区域，包含26个外显子、26个内含子，对应mRNA可生成1 203个氨基酸产物，eNOS属于一氧化氮限速酶，而一氧化氮在血压调节和循环功能维持中有着重要的意义，如果eNOS基因发生改变，一氧化氮(NO)的合成就会出现障碍，导致患者血压出现降低或升高，因此临床认为eNOS基因属于EH的重要候选基因〔9,10〕。

从目前国内外研究情况来看〔11〕，对于eNOS基因的研究主要集中于启动子区的786位点、894位点及第4内含子的多态性上，且结论颇有争议。本次研究选取的rs3918188位点基因位于第14内含子上。内含子在基因组中有着重要的基因调控作用，能够通过自身剪接对基因表达产生影响，目前关于同属于第14内含子的rs3918181位点研究较多，闫雪等〔12〕认为EH患者的rs3918181位点基因型频率改变是导致发病的主要原因；方玲等〔13〕研究也显示rs3918181位点上EH患者与健康体检者的基因、等位基因频率有显著差异；但张旺德等〔14〕的研究显示EH患者的rs3918181位点基因、等位基因频率与健康体检者对比无显著差异。这说明目前关于EH基因多态性的研究尚存在争议，考虑原因一方面与遗传异质性有关，一方面则受到环境、生活方式等因素的影响。目前国内关于rs3918188位点的报道尚少，卢贤贵等〔15〕对新疆哈萨克族人群的eNOS基因rs3918188位点基因多态性进行了研究，结果显示EH患者和健康体检者对比eNOS基因rs3918188位点基因、等位基因频率分布无显著差异，且对eNOS基因rs3918188位点和rs7830位点的多态性进行了连锁不平衡分析，结果显示两个位点间不存在连锁不平衡，与本研究结论相符。本研究显示汉族EH的发生可能与eNOS基因rs3918188位点多态性无明显相关。本次仅选取汉族人群作为对象进行了研究，对于其他人群eNOS基因rs3918188位点多态性分布特点的研究尚存在空缺。此外，本研究样本量相对较小，易产生统计偏差，尚需扩大样本进一步证实。综上所述，本次研究初步表明eNOS基因rs3918188位点多态性可能与汉族EH无明显相关性。