青娘虫炮制前后不同部位斑蝥素含量的变化

王倬晅，姚 晓

常州市食品药品监督检验中心，常州 213000

青娘虫为芫菁科昆虫绿芫青Lytta caragane Pallas的干燥虫体，主产于江苏、安徽、浙江等省。为国家28个毒性药品管理品种之一，具有攻毒、破瘀、逐水的功效，主治瘰疬、狂犬咬伤、血瘀经闭、水肿尿少等病症。抗肿瘤活性成分斑蝥素[1-3]既是主要有效成分，又是毒性成分。准确测定青娘虫中斑蝥素的含量，对监控其质量，指导临床用药安全有非常重要意义。各省的饮片炮制规范多有收载，且炮制要求各有不同。在江苏、浙江、湖南等省的中药饮片炮制规范中，生品青娘虫饮片需去除头足翅，而《上海市中药饮片炮制规范》生品青娘虫饮片只需将原药除去杂质，筛去灰屑，而不需去除头足翅。米炒青娘虫则需去除头足翅。本试验采用气相色谱法（GC）测定青娘虫药材、生青娘虫、米炒青娘虫以及青娘虫炮制前后头足翅中斑蝥素的含量，对青娘虫炮制前后各样品斑蝥素的含量进行比较分析，以探究炮制对斑蝥素的影响。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 7890B气相色谱仪，配置FID检测器、CTC自动进样器（美国安捷伦公司）；Mettler Toledo XP105DR电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；GA-380A空气发生器；HGL-300H纯水式氢气发生器；超声清洗器KQ-5200DE（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料

斑蝥素对照品（批号110783-200604，中国食品药品检定研究院）； 青娘虫 （批号 20150308、20150825，常州市泰和国药制品有限公司；批号20150926，国药控股常州医药物流中心有限公司，且由该公司代加工）炮制成米炒青娘虫（取米置锅内加热，喷水少许，使米贴锅上，待冒烟时，加入净青娘虫，轻轻拌炒，至米呈黄棕色，取出，筛去米，放凉，去除头、翅、足。每100 kg青娘虫用米 20 kg）；甲醇（色谱纯）；二氯甲烷（化学纯）；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4]

HP－5毛细管柱（0.530mm×30m，2.65μm），检测器：FID；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；柱温：165℃；载气：氮气；流速：1.5mL·min-1；进样方式：分流进样，分流比：20∶1；进样量：1μL。

理论塔板数以斑蝥素计为62 145，斑蝥素与前后杂质分离度均大于1.5，符合实验要求。见图1。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取斑蝥素对照品19.26mg，置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度作为对照品贮备液。精密量取1mL对照品贮备液置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

2.2.2 供试品溶液[4]取样品粉末约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷超声处理2次（50mL、50mL），每次15min，合并二氯甲烷液，滤过，用二氯甲烷少量分次洗涤容器，洗液与滤液合并，回收溶剂至干，固体物加甲醇溶解转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。

图1 气相色谱图

2.3 标准曲线及线性范围

分别精密吸取对照品储备液配制成斑蝥素浓度分别为 0.03852、0.09630、0.1926、0.3852、0.9630mg·mL-1的对照品溶液，分别进样1μL，记录峰面积，以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为 A=7.03×10-3C-16.6（r=0.999 9），结果表明，斑蝥素对照品浓度在0.03852～0.9630mg·mL-1范围内呈现良好的线性关系。

2.4 检测限和定量限

将对照品储备液用甲醇进行多次稀释，信噪比S/N为10时，斑蝥素定量限为2.5 ng；信噪比S/N为3时，斑蝥素检测限为1.1ng。

2.5 进样精密度试验

精密吸取同一供试品溶液（批号20150926）1μL，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录斑蝥素峰面积，其相对标准偏差（RSD）为0.81%。表明精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一样品6份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。结果斑蝥素含量平均值为0.076%，RSD为1.2%，说明在此色谱条件下重复性良好。

2.7 稳定性实验

取同一供试品溶液（批号20150926）分别于0 h、0.5、3、20、32 h 进样， 结果峰面积的 RSD 为1.4%，表明样品在32h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取样品（批号20150926，含量0.076%）约1.5 g，精密加入“2.2.1”项下斑蝥素对照品溶液（1.002mg·mL-1） 1mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”色谱条件测定，结果见表1。

表1 斑蝥素加样回收率（n=6）

2.9 样品测定

取样品（批号20150926）炮制前后不同部位，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，用外标法分别计算含量，结果见表2。表明米炒青娘虫的头足翅中斑蝥素低于检测限。

表2 同一批次青娘虫不同部位炮制前后斑蝥素的含量测定（n=3）

分取3批青娘虫（去头足翅）及其米炒品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件分别测定，结果见表3。

表3 不同批次青娘虫（去头足翅）炮制前后斑蝥素的含量测定（n=3）

3 讨 论

青娘虫中斑蝥素的测定曾参考《中国药典》[5]斑蝥中斑蝥素HPLC法，但由于青娘虫中斑蝥素含量低，接近定量限，因此采用GC法[4]测定，考虑到配备了全自动进样器的气相色谱仪精密度良好，为了减少操作步骤、简化计算，进行外标法测定，通过方法学验证，该方法可行，重复性好，检测灵敏，能较好地控制青娘虫饮片及药材的质量。

由表2显示，青娘虫及其不同部位炮制后斑蝥素均下降。其中，生青娘虫中斑蝥素含量为0.076%，米炒后含量下降到43.42%；去头足翅生青娘虫中斑蝥素含量为0.094%，米炒后为0.076%；青娘虫头足翅中斑蝥素含0.034%，米炒后未检出。同等重量下炮制前后的青娘虫中斑蝥素的含量均低于去头足翅的青娘虫中斑蝥素含量。

米炒青娘虫炮制减毒原理与米炒斑蝥相类似，斑蝥素在84℃开始升华，其升华点为110℃，米炒时锅温为128℃，适合于斑蝥素的升华，又不至于温度太高致使斑蝥焦化[1]。当青娘虫与米同炒时，由于青娘虫均匀受热，使斑蝥素部分升华而含量降低，从而使其毒性降低。因此青娘虫内服用其炮制品，而米炒后青娘虫的头足翅中未检出斑蝥素，故可以认为其为非药用部位；表2显示，生青娘虫中头足翅含只有少量斑蝥素，因此认为，外用生品可以整虫入药。