Ki67蛋白水平与膀胱癌临床病理特征及预后的相关性

邢红英 付玉环 常慧敏 周 娜

膀胱癌为泌尿系统恶性肿瘤，好发于老年男性，在男性泌尿系恶性肿瘤中占首位。据报道，膀胱癌在我国的发病率达到8.05/10万，死亡率达到3.29/10万[1]。按国际抗癌协会标准，Ta～T1期膀胱癌为非肌层浸润型膀胱癌、T2～T4期膀胱癌为肌层浸润型膀胱癌。临床上绝大多数患者属于非肌层浸润性膀胱癌，不过相当一部分的患者术后会复发，而复发患者中有10%～15%会进展为肌层浸润性膀胱癌，而肌层浸润型膀胱癌患者即使行根治性手术与各项辅助治疗，5年生存率也不足50%[2]。目前国外常采用EORTC 评分系统预测非肌层浸润性膀胱癌的复发及进展风险，但存在一定的局限。近些年，肿瘤标志物的预后预测价值越来越得到人们的重视。Ki67为细胞增殖相关的核抗原，是反映细胞增殖活性的指标。研究表明，Ki67表达水平可能与肿瘤的性质、侵袭、转移及生存预后有关[3]。为此，本研究分析了Ki67蛋白水平与膀胱癌临床病理特征及预后的相关性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2011年3月至2016年7月我院收治的73例经病理证实的膀胱癌患者的组织标本，其中32例有癌旁组织标本(距癌灶2 cm以上)。同时收集同期44例男性开放前列腺摘除手术患者的膀胱黏膜组织作为正常膀胱标本。所有患者均有完整的临床资料，术前均未接受过放、化疗及免疫治疗，标本一经离体，即经福尔马林固定，并包埋入石蜡，4 μm连续切片，备用。

1.2 检测方法

采用免疫组化SP法检测标本中Ki67蛋白的表达。SP试剂盒为北京中衫金桥生物技术有限公司产品；鼠抗人Ki67 单抗为Santa Cruz 公司产品，以1∶1 000稀释。操作按试剂盒说明进行，包括脱蜡、水化，高压抗原修复，3%H2O2孵育，山羊血清封闭，滴加一抗室温孵育1 h，二抗室温孵育0.5 h，DAB显色，苏木精复染，盐酸乙醇分化，脱水、二甲苯透明、封片等操作。

1.3 结果判定

由两位观察者采用双盲法对结果进行判定，显微镜400倍视野下，20个视野，Ki67为细胞核染色，计数500～1 000个细胞中的阳性细胞，阳性细胞数所占的比例为0～5%为(-)，占>5%～25%为(+)，占>25%～50%为(++)，>50%为(+++)；按 Fromowitz标准，(-)、(+)为低表达，(++)、(+++)为高表达。

1.4 随访

膀胱癌患者术后随访，术后第1年每月进行1次随访，之后每3个月进行1次随访。无进展生存时间(PFS)定义为手术日至疾病复发的时间，本研究随访15～24个月，平均(18.63±2.16)个月。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 Ki67蛋白在不同组织中的表达情况比较

Ki67蛋白在46例膀胱癌组织中呈高表达，在27例膀胱癌组织中呈低表达，在癌旁组织与正常组织中均呈低表达，组间比较具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 Ki67蛋白在不同组织中的表达/例

2.2 Ki67蛋白与膀胱癌临床病理特征的关系

Ki67蛋白在膀胱癌组织中的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数量无关(P>0.05)，与临床分期有关(P<0.05)，见表2。

表2 Ki67蛋白与膀胱癌临床病理特征的关系(例，%)

2.3 Ki67蛋白不同表达水平的无进展生存率比较

本次随访截止时间为2018年8月，随访终点为复发或进展，本次随访15～24个月，平均(18.63±2.16)个月。Ki67蛋白高表达组的无进展生存率为45.65%(21/46)，低表达组的无进展生存率为55.56%(15/27)，比较差异无统计学意义(χ2=0.668，P=0.414)。

2.4 Ki67蛋白在预测膀胱癌预后中的价值

选取性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数量、临床分期、Ki67蛋白表达水平作为可能影响膀胱癌预后的因素，采用COX比例风险模型进行分析，结果表明，Ki67蛋白表达水平与膀胱癌患者的预后无关，而临床分期与膀胱癌患者的预后有关，见表3。

表3 Cox比例风险模型分析结果

3 讨论

目前，膀胱癌术后主要依靠膀胱镜、液基细胞学等检查手段进行随访监测，但具有一定的局限性，而一些肿瘤标志物，如可溶性Fas因子、趋化因子1、核基质蛋白-22等，虽然被证明可用于膀胱癌的预后监测，但其敏感性与特异性均不是很理想。

细胞的增殖与分裂是肿瘤发生进展的先决条件之一。Ki67最初是由L428细胞系中获得的位于10号染色体上的单克隆抗体，被认为是目前反映细胞增殖活性最为准确可靠的抗原，其表达水平与细胞增殖呈正相关[4]。研究发现，Ki67在细胞周期的G0期不表达，而在G1后期、S期、G2期、M期中表达，特别是高度表达于G2期。Ki67标记于细胞核，能促进肿瘤细胞有丝分裂，随着恶性肿瘤细胞的快速增殖，Ki67阳性细胞增加，而随着肿瘤分期的增高，分化程度降低，细胞增殖更快，Ki67的表达更高。既往多项研究表明，Ki67蛋白在多种恶性肿瘤中的表达阳性率较高，在判断肿瘤的发展、转移风险及预后预测方面显示出了一定的价值[5-6]。

膀胱癌组织代谢旺盛，细胞增殖较正常组织快，Ki67的表达相应提高。本研究结果显示，Ki67蛋白在癌旁组织与正常组织中均呈阴性或弱阳性表达，而在膀胱癌组织中大部分呈强阳性表达，与目前的研究结论相符。目前国内对于Ki67蛋白表达与膀胱癌临床病理特征的关系尚存在争议，陈雪磊等[7]研究表明，Ki67蛋白的表达与膀胱癌的临床分期、病理学分级、肿瘤大小有关，与性别、年龄无关。杨国良等[8]研究表明，Ki67蛋白表达与膀胱癌的病理分级、复发及进展有关，与年龄、性别、肿瘤数目及肿瘤大小无关。本研究结果显示，Ki67蛋白的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数量无关，与临床分期有关。但无论如何，Ki67在膀胱癌的发生、发展中有着重要作用，Ki67表达能够促进肿瘤细胞增殖、分裂，从而加速膀胱癌浸润，其表达水平越高，反映肿瘤恶性程度越高。

国外一些研究认为，增殖细胞的数量、增殖程度对肿瘤预后具有预测价值。一项有关上皮性卵巢癌的研究表明，Ki67蛋白增殖指数对预测生存预后有良好的效用，然而另有研究却显示，在卵巢透明细胞癌患者中，Ki67高表达组的生存率却较低表达组高[9]。故Ki67对肿瘤预后预测的价值尚待更多的证明。既往有研究表明，Ki67可作为膀胱癌的预后判断因子，但本研究结果显示，Ki67蛋白高表达组的无进展生存率为45.2%，低表达组的无进展生存率为57.3%，比较差异尚未达到统计学意义。COX比例风险模型分析显示，Ki67蛋白表达水平与膀胱癌患者的预后并无明显关系，提示单独依靠Ki67蛋白对预测膀胱癌预后的价值有限，应结合临床分期、病理分级及其它肿瘤标志物等综合预测膀胱癌患者的生存预后，以提高预后判断的准确性。