子宫内膜异位症血清miR-494-5p/miR-1304-3p水平及不孕

赵喜艳 崔美英 范丽丝 冯惠芳

中国人民解放军第一五三中心医院(郑州 ，450007)

子宫内膜异位症是女性不孕常见因素，引发原因较多[1]。微小RNA(miRNA)是近年发现的可调控基因表达的一种RNA，在子宫内膜异位症患者血清中表达差异显著，甚至能通过调节靶基因来改善子宫内膜的生理、生物学特性[2]。以该理论为基础，本研究对子宫内膜异位症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平进行检测，观察其表达与患者不孕的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年5月—2017年8月本院收治的子宫内膜异位症患者52例(观察组)及同期正常体检健康女性52例(对照组)。向参与对象详细讲解本研究内容，均同意签署知情同意书。

1.2 诊断及纳入和排除标准

①诊断标准：参照参考文献[3]，患者具有宫骶韧带触痛结节、后穹窿触痛结节及附件包块等阳性体征，超声检查包块内部为无回声区并有散在或密集的光点，血清CA125≥35μ/L。②纳入标准：子宫内膜异位症患者符合上述诊断标准；未伴有其他严重免疫、代谢性疾病及其他严重脏器功能、凝血功能障碍及恶性肿瘤疾病。③排除标准：不符合子宫内膜异位症诊断标准的患者；并发其他严重免疫、代谢性疾病；伴有其他严重脏器、凝血功能障碍及恶性肿瘤疾病。

1.3 标本收集与检测

①设备与仪器：美国ABI公司生产的miRNA分析试剂盒、兔抗人CRK单克隆抗体及Prism 7500型RT-PCR仪；DYY-7C型电泳仪，DU640紫外分光光度计以及玻璃板、电泳槽等常规仪器。②标本采集：取参与者清晨空腹静脉血离取上清，低温保存备用。③检测：采用实时荧光定量法检测血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平，使用Trizol LS试剂提取血液中RNA备用；miR-494-5p和miR-1304-3p表达量采用TaqMan miRNA试剂盒检测，以U6为内参，分别计算目的基因相对表达量。

1.4 观察指标

记录两组观察对象血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平及观察组不同病理分期表达水平差异。使用视觉模拟评分法(VAS)评估子宫内膜异位症患者痛经程度，分为无疼痛、轻度疼痛、中度疼痛、重度疼痛。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 纳入对象一般资料

两组对象一般资料比较无差异(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组血清指标水平比较

血清miR-494-5p和miR-1304-3p观察组表达量高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 两组血清指标比较

2.3 观察组内膜异位症不同分期者血清水平比较

子宫内膜异位症Ⅳ期患者血清miR-494-5p、miR-1304-3p水平高于Ⅰ～Ⅲ期(P<0.001)，且表达量随分期增加而增加，见表3。

表3 不同内膜异位分期患者血清指标比较

*与其他3期相比P<0.001

2.4 观察组不同痛经程度患者血清指标比较

比较发现，重度疼痛患者血清miR-494-5p、miR-1304-3p水平高于中度、轻度及无疼痛组患者(P<0.001)，表达量随痛经程度增加而增加，见表4。

表4 痛经不同程度患者血清指标水平比较

*与其他3组相比P<0.001

2.5 观察组血清指标水平与不孕关系

52例子宫内膜异位症患者中有28例并发不孕症，并发不孕组血清miR-494-5p、miR-1304-3p表达高于不孕症组(P<0.001)，见表5。

表5 不孕分组与血清指标表达

3 讨论

子宫内膜异位症是一种常见妇科疾病[4-5]。异位的子宫内膜引起的输卵管障碍还可能导致异位妊娠概率增加[6-7]。寻找一种敏感性、特异性较高的诊断标志物已成为研究重点。很多学者试图从患者体液中寻找子宫内膜异位症诊断标志物，但往往因敏感度较差无法在临床上广泛应用，CA125仍是当前最可靠的子宫内膜异位症诊断标志物[8]。

子宫内膜异位症的发病原因多且复杂[9]。miRNA主要由21个核苷酸构成，为mRNA的降解或翻译抑制[10]。作用机制分两类，其一是成熟的miRNA与靶细胞mRNA非翻译区结合互补，抑制靶细胞的翻译和复制，这一过程不对靶细胞mRNA稳定性造成影响；第二种是成熟的miRNA直接与靶细胞mRNA结合，被RISC完全降解，mRNA的翻译复制随之受到抑制[11]。纪娜[16]等研究表明，miRNA在子宫内膜异位症病灶形成过程中起到了重要的调控作用。

内膜异位症的恶变是循序渐进发展的。刘寒梢[12]等对7例直肠癌患者血清和10例健康志愿者血清中差异表达的miRNA进行检测，结果结直肠癌特异性血清miRNA生物标志物敏感性和特异较高，认为miRNA生物标志物组合对结直肠癌早期筛查和诊断具有重要意义。汪雁君[13]等对40例子宫内膜异位症患者和20例输卵管积水患者，分别检测血清miR-199a-5p和MMP-9表达，与输卵管积水患者相比子宫内膜异位症患者血清miR-199a-5p表达量减少，MMP-9表达量升高，且子宫内膜异位症患者随r-AFS分期增加血清miR-199a-5p表达量减少，MMP-9表达量增加，认为血清miR-199a-5p、MMP-9与子宫内膜异位症发病密切相关，miRNA调控异常可能与发病机制有关。本次研究发现，随着子宫内膜异位症分期的增加以及疼痛加重，患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p表达水平均增加，但需要注意的是患者疼痛程度并不能代表疾病的严重程度，疼痛程度不能作为异位症临床分期及是否伴不孕症的诊断参考依据。

本次研究发现，子宫内膜异位症伴不孕症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平明显升高，可能与患者患病有一定相关性[14]。有学者研究发现，子宫内膜异位症患者病灶中内膜基质细胞miR-135表达量高于正常人，同时还会引起内膜基质细胞同源框A10(HOXA10)的表达受限，这是引起胚胎植入失败的主要原因。对比观察发现，子宫内膜异位症患者HOXA10表达量低于正常水平，miR-29c在异位内膜组织中的表达量升高，分析认为miR-29c可能参与了患者HOXA10表达调控，造成胚胎植入受限，引发不孕症。目前尚未有确切的研究表明miRNA参与了子宫内膜异位症的起病，修复或重塑，但随着不断研究，miRNA有望取代传统指标，成为子宫内膜异位症患者诊断、进展、治疗及预后评估的新指标；抑制miRNA的表达甚至能成为子宫内膜异位症治疗方法[15]。

综上，子宫内膜异位症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p表达量随病情进展而增加，且伴不孕症患者表达量相对高，该指标对子宫内膜异位症患者病情进展评估有重要意义，值得进一步研究。