液相色谱-串联质谱法测定山药中10种杀菌剂残留

朱丽婷，王华珍，王峰，陈志民，卢军，黄梅英，章舒祺

(丽水蓝城农科检测技术有限公司，浙江 丽水 323000)

山药又叫薯蓣、土薯、薯药等，是人类很常用的食材之一。现代药理研究表明，山药中含有人体需要的多种氨基酸、维生素和粘液质等，具有提高免疫功能、改善消化功能、降血糖、降血脂、抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤、抗突变、促进肾脏再生修复、调节酸碱平衡等药理作用[1]。不少人会用山药进行煲汤或烹饪，煲汤软糯，炒菜酥脆，深受人们喜爱。山药含有大量的粘液和淀粉，若受潮则易变软发粘，2周左右就会发霉，皮色变黄，并极易生虫，因此，不便于长时间的运输和贮藏。近年来发现，一些不法商贩为了在山药贮藏和运输过程中保持其新鲜和不易腐烂，违规对其喷洒了杀菌剂。杀菌剂虽具有高效、广谱、低毒等优点，但长期摄入，会对人体健康造成潜在的危害[2]。目前，美国、欧盟等许多国家和组织均制定了杀菌剂在农产品和食品中的最高残留限量(MRL)[3]。因此，随着食品安全日益受到重视，为保障农产品的质量安全，迫切需要建立一种简单、快速、高效且可用于山药中多种杀菌剂同时检测的试验方法对农产品中农药残留进行有效监控。

目前国内杀菌剂的残留检测主要以草莓、杨梅、黄瓜等单种水果蔬菜为主[2-8]，对山药的检测研究基本以化学成分及营养价值为主[9-15]，对山药中杀菌剂的测定未见报导。本文利用液相色谱串联质谱仪抗干扰能力强且快速、准确等特点，建立了同时测定山药中多菌灵、嘧霉胺等10种典型杀菌剂的分析方法，并应用于实际的样品分析中。结果表明，该方法简单、快速，完全满足日常检测的需求。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

安捷伦液相色谱串联质谱仪(G6460C系列)配1290液相、SORVALL高速冷冻离心机(美国Thermo公司)；PSA、C18、炭黑等净化材料(上海安谱科学仪器有限公司)；霜霉威、多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鲜胺、肟菌酯标准品(均为液体标准品，浓度为1 000 mg·L-1，天津农业部环境保护科研监测所)；乙腈色谱级、氯化钠和无水硫酸镁均为分析纯，水为超纯水。

1.2 标准溶液的配置

准确吸取霜霉威、多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鲜胺、肟菌酯标准溶液各1.0 mL于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀释定容到100 mL，配置成10.0 mg·L-1的标准工作溶液，于0～4 ℃保存。

1.3 检测条件

色谱柱为Agilent Eslipse Plus C18RRHD(2.1 m×50 mm，1.8 μm)，流动相A为甲醇，B为2 mmol·L-1醋酸铵水溶液(含0.1%甲酸)，柱温30 ℃。洗脱模式见表1。

表1 检测中梯度洗脱比例

电喷雾正离子扫描(ESI+)。毛细管电压4 500 V，干燥气温320 ℃，流速10 L·min-1，碰撞气为氮气，雾化器压力40 psi，多反应监测(MRM)模式。多菌灵、嘧霉胺等10种杀菌剂的母离子、子离子和碰撞能量见表2。

1.4 样品前处理

称取匀浆后的山药5.0 g样品于50 mL离心管中，加入乙腈10 mL，涡旋混匀0.5 min，然后加入1.5 g氯化钠和4.0 g无水硫酸镁，涡旋混匀2 min，超声提取3.0 min，以6 000 r·min-1离心3 min，准确吸取1.0 mL上清液置于1.5 mL离心管中，加入50 mg C18，混匀，于10 000 r·min-1离心3 min，准确吸取0.2 mL上清液，加入0.8 mL纯水，混匀，过0.22 μm有机滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

表2 10种杀菌剂的定性定量离子对、碎裂电压、 碰撞能量和保留时间

注：*表示定量离子对，未标的为定性离子对。

2 结果与分析

2.1 图谱分析

在本试验条件下，多菌灵等10种杀菌剂在9.0 min内能得到较好的分离，标准液的总离子流图(TIC)如图1所示。

图1 10种杀菌剂的TIC图谱

2.2 净化材料的选择

山药中含有黏蛋白、淀粉酶、皂苷、游离氨基酸、多酚氧化酶等化合物及矿物质，且含量较为丰富。为减少液相色谱串联质谱测定时的基质效应，分别选取PSA(N-丙基乙二胺)、C18、炭黑等3种常用于农药残留分析过程中使用的吸附剂用于净化条件优化。首先考察3种粉末对10种化合物的吸附作用。分别称取50 mg净化粉末，加入0.1 mg·L-1的混合标准溶液，每种材料平行操作3次，离心后取上清液经水稀释1倍后进样分析。结果发现，加入炭黑后，其粉末对10种化合物均产生不同程度的吸附；而加入PSA和C18后，两种化合物响应值与标样相当。故选取PSA和C18为试验净化材料。

采用分别经PSA和C18净化后的提取液配制基质标准曲线，通过基质标准曲线斜率a与溶剂标准曲线斜率b比值研究其基质效应。表3表明，经C18净化的提取液中10种杀菌剂的基质效应均较大，说明C18的去杂质能力较弱；而经PSA净化的提取液中，仅甲基硫菌灵的基质效应较大，其他目标物基质效应0.85～1.09，因此，选用PAS作为净化材料。

表3 不同稀释倍数的基质效应(a/b)

2.3 稀释倍数的选择

参照前处理的步骤对山药样品进行前处理，加入PSA净化后，对提取液采用不同稀释比例(1、5、10倍)进行稀释以研究其基质效应。结果发现，提取液稀释后，甲基硫菌灵的基质效应明显降低。当提取液稀释10倍时，基质效应与5倍稀释时的基质效应相差不大。为兼顾仪器灵敏度，本方法选取提取液5倍稀释进行试验。

2.4 方法的标准曲线

分别配置0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg·L-1的混合标准溶液。以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线形回归。结果表明，10种杀菌剂的线性关系良好，相关系数(r)不低于0.993。本方法符合试验要求，可用于实际样品的定量分析。回归方程见表4。并在该试验条件下，分别以3倍信噪比(S/N=3)和10倍信噪比(S/N=10)来计算方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)。

表4 不同杀菌剂的线性和灵敏度

2.5 方法精密度、准确度和回收试验

选取空白山药基质，在基质中分别添加浓度为10.0、50.0和100.0 μg·kg-1的标品做回收率试验，每个浓度操作6个平行试验，按照1.4节所述步骤处理后进样，计算各添加浓度的回收率和相对标准偏差(RSD)。在该试验条件下，添加浓度为10.0 μg·kg-1，10种杀菌剂的回收率为88.6%～105.5%，RSD为2.7%～8.3%；添加浓度为50.0 μg·kg-1，10种杀菌剂的回收率为89.6%～104.8%，RSD为1.2%～7.9%；添加浓度为100.0 μg·kg-1，10种杀菌剂的回收率为94.3%～104.7%，RSD为1.9%～9.1%(表5)。

表5 杀菌剂不同添加浓度下的回收情况

2.6 实际样品分析

利用该方法对在农贸市场、超市随机购买的15批次山药样品进行10种杀菌剂残留量的测定，结果从2批次的山药样品中检出多菌灵和嘧霉胺，测定值分别为2.51×102和1.03×103μg·kg-1，其余8种杀菌剂未检出。

3 小结

通过建立快速测定山药中10种杀菌剂残留的LC-MS/MS分析方法，对于上述10种杀菌剂，本方法回收率为88.6%～105.5%，相对标准偏差为1.2%～9.1%，10种化合物检测限为0.05～0.31 μg·kg-1，定量限为0.10～0.62 μg·kg-1。该试验方法有效的减少了基质对10种杀菌剂测定的干扰，且前处理简单，具有快速高效等特点，可用于山药中10种杀菌剂残留的快速筛查。