病原微生物盲样检测结果的探讨

□ 张春鹏 李 媛 马妍娜 王 波 徐州市质量技术监督综合检验检测中心

实验室质量控制考核是评价检测实验室工作质量与水平的重要方式[1]。考核形式主要是主管部门组织的能力验证、盲样考核，由中国合格评定委员会（CNAS）认可的第三方检测服务机构提供考核样品。这些考核形式属于实验室的外部质量控制，当考核出现不满意结果时，实验室应深入分析原因、实施纠正措施，并验证措施的有效性。对参加能力验证且有稳定满意表现的合格评定机构，CNAS在各类评审中可考虑适当简化相关项目的能力确认过程[2]。

1 材料与方法

1.1 质控样品

来自组织单位发放的含有待测菌的冻干粉样品1支，以西林瓶胶塞铝盖封口。盲样有2种致病菌，报告结果是所有检出菌种的名称。

1.2 培养基及试剂

商品培养基和生化鉴定试剂盒购自广东环凯微生物科技有限公司；质控菌株购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；革兰氏阴性和阳性细菌鉴定卡购自法国梅里埃公司。均在有效期内。

1.3 仪器与设备

VITEK2全自动微生物鉴定系统，法国梅里埃；JY02S型紫外分析仪，北京君意东方电泳设备有限公司；SPX-250生化培养箱，上海跃进生化培养箱；DG250厌氧培养箱，英国DWS；BX41荧光显微镜，日本奥林巴斯；HVE-50高压灭菌器，日本Hirayama。所有仪器设备均性能良好，校准维护均在有效期内。

表1 在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

表2 1号菌生化试验结果

表3 2号菌生化试验结果

1.4 检测方法

依据食品安全国家标准GB 4789-2016微生物检验方法及组织单位提供的作业指导书。

2 结果与分析

2.1 增菌培养和划线分离

将质控样品接种到脑心浸出液肉汤（BHI）培养基中，接种两瓶，置于生化培养箱和厌氧培养箱中，36 ℃下培养24～48 h后，两瓶增菌液均混浊。用接种环从增菌液中挑取1环接种到致病菌各类选择性平板上，培养24～48 h，观察平板上菌落的特征。发现在李斯特氏菌显色琼脂平板、PALCAM琼脂平板和CN琼脂平板上存在2种不同的可疑菌落，分别编号为1号菌和2号菌，菌落特征见表1。

2.2 革兰氏染色和生化试验[3-4]

1号菌疑似单核细胞增生李斯特氏菌，革兰氏染色结果为革兰氏阳性短杆菌，生化试验结果见表2。根据生化试验结果，可确定1号菌为单核细胞增生李斯特氏菌。从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成一定浊度的菌悬液，使用革兰氏阳性细菌鉴定卡进行鉴定，置于VITEK2全自动微生物鉴定系统进行分析，同时用标准菌株做阳性对照，结果为单核细胞增生李斯特氏菌，并且阳性对照符合。

2号菌菌落涂片染色为革兰氏阴性无芽胞杆菌。在紫外线下检查滤膜时，菌落产荧光。产荧光的菌落进行氧化酶测试、乙酰胺肉汤试验及金氏B培养基试验，结果均为阳性，证实2号菌为铜绿假单胞菌。采用VITEK2全自动微生物鉴定系统作比对，提示该菌为铜绿假单胞菌。

根据以上结果可判断该质控样品中检出2种致病菌：单核细胞增生李斯特氏菌和铜绿假单胞菌，结果为满意，说明实验室目前的检测能力状况良好。

3 结论

单核细胞增生李斯特氏菌，是一种人畜共患病的病原菌[5]，感染病死亡率高，在欧美国家常有发生，主要表现为败血症、脑膜炎，甚至导致死亡[6]。该菌在4 ℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌。铜绿假单胞菌是一种常见的条件致病菌，原称绿脓杆菌，存在的重要条件是潮湿的环境，水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有存在。该菌对不良环境抵抗力强，可能引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[7]。因此不断加强对病原菌的检测能力，对食物中毒原因的排查具有重要的意义。质控考核是对检测人员技能、实验室内部质量控制情况的检验[8]，实验人员应严格按照标准并结合作业指导书的方法进行操作，实验过程应进行严格的质量控制，保证获得满意的检测结果。