高效液相色谱示差法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖

□ 张锐波 吕亚宁 广东东方纵横检测有限公司

1 材料与方法

1.1 实验试剂

利用高效液相色谱示差法来测定蜂蜜中果糖、葡萄糖和蔗糖的含量，需要利用这三种糖类的标准品，还需要两种融合剂：乙腈和去纯水。值得注意的是，这里的水是去离子水，是反渗透去离子水纯水机制造出来的。

表1 不同质量样品溶解在水中的测定结果及相对偏差

1.2 实验仪器

该实验用到的实验仪器有2695-2414型高效液相色谱仪、碳水化合物分析柱、RO DI型反渗透去离子纯水机。

1.3 测定方法

实验开始之后，要分别取果糖、葡萄糖、蔗糖标准品各5 g，取样的时候每种标准品都需要精确到0.000 1 g，将这三种标准品加入60 mL水进行溶解，再用乙腈定容到100 mL，并摇匀作为标准母液[1]。取4支10 mL容量瓶，分别向其中注入1、2、3、4 mL标准母液，再用乙腈水溶液定容到刻度，配制成含有果糖、葡萄糖、蔗糖的标准溶液，其含量分别是5、10、15、20 mg/mL。

样品将采用两种方法进行处理。第一种直接采用纯水进行处理，首先取0.5～3 mL的均匀样品放入25 mL比色管中，值得注意的是，取样一定要精确至0.000 01 g。因为蜂蜜有时候会出现结晶状态，对于有结晶的蜂蜜样品可以采取加入水后，再放入40～50 ℃的温水中进行振荡溶解，溶解过后再下降到室温进行定容，定容到刻度再经0.45 μm滤膜过滤，之后再由液相测谱仪进行测定。而那些结晶的蜂蜜可以加去离子水进行溶解。第二种方法是采用乙腈混合液进行处理，取出0.5～1 g样品放入25 mL的比色管中，这次取样也需要精确到0.000 1 g，再用乙腈混合液进行定容，然后再利用液相色谱进行测定，测定前也需要经过过滤。

2 结果分析

2.1 样品在纯水溶液中测定的结果分析

对同一样品分别取出0.5～3 g，然后用纯水定容至刻度，测验结果见表1。

从表1的数据可以看出，利用水当溶剂是非常可取的，因为可以避免溶液出现分离现象，如果溶液分离可能会导致提取不彻底。利用水当溶剂来提取这三种糖类，测定的结果具有稳定性。

2.2 样品在不同溶液中溶解比较

蜂蜜能溶于水，却不能完全溶于乙腈溶液，所以说在利用乙腈-水混合液来对样品进行溶解的时候，必须要做到完全溶解才能对样品进行测定[2]。

3 结论

该实验通过利用高效液相色谱示差法来对蜂蜜中的葡萄糖、果糖和蔗糖进行测定，通过实验对比，笔者发现将样品溶于水之后，再用乙腈进行定容，既能快速提取蜂蜜中的这三种糖类物质，又能保证数据的准确性。