止痛化癥胶囊对血瘀证模型大鼠的药效学研究

吴福林，王涵，董庆海，曹莹，谭静，林红强，李平亚

(吉林大学药学院，吉林 长春 130021)

妇科血瘀证是以疼痛、肿块、出血色紫暗或夹有瘀块等为主要临床表现的综合征，是妇科临床常见的一种病证[1]。中医学认为,妇科血瘀证可由情志内伤、寒邪侵袭、环境改变等多种原因诱发,其病机实质是瘀阻冲任、胞宫、胞脉,并有不同程度的全身血液运行障碍，主要治疗的方法为活血化瘀法。现代医学研究表明,妇科血瘀证发生机理可能主要在于血液流变学、血流动力学、病理结构的改变及体内免疫系统的功能状态的改变等方面[2]。临床实践发现，气滞血瘀和寒凝血瘀二种血瘀证类型最为常见[3]。

止痛化癥胶囊(ZhiTong HuaZheng Capsule, ZTHZC)，是由党参等19味中药炮制而成。用于气虚血瘀所致的月经不调、痛经、癥瘕，症见行经后错、经量少、有血块、行经小腹疼痛、腹有癥块；慢性盆腔炎见上述证候者[4]。近年来，ZTHZC广泛用于治疗痛经、盆腔炎、子宫内膜异位症及子宫腺肌病等妇科疾病[5-8]，临床效果较好，但其作用机制还不明确。本研究通过皮下注射肾上腺素结合冰水浴建立大鼠急性血瘀证模型，探究止痛化癥胶囊对血瘀模型大鼠血液流变学、血浆GMP-140及vWF含量的影响，为阐明止痛化癥胶囊的药效物质基础及作用机制提供一定的科学依据。

1 实验材料

1.1 实验药品与试剂

止痛化癥胶囊,批号：160502，国药准字Z22020845，吉林金宝药业股份有限公司；桂枝茯苓胶囊，江苏康缘药业股份有限公司，国药准字Z10950005，产品批号：171113；盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司出品，国药准字H31021344,批号：41170602；大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒，批号：E20181201A，北京鼎国生物技术有限责任公司；大鼠血管性血友病因子(vWF)ELISA检测试剂盒，批号：E20181201A，北京鼎国生物技术有限责任公司。

1.2 实验仪器

FA1104N型万分之一电子分析天平(上海菁华科技仪器有限公司)；T.G.L-16-aR飞鸽牌离心机(上海安亭科学仪器厂)；KES-900B型血流变检测仪(无锡康尔生仪器公司)；TECAN SUNRISE 酶标仪(瑞士帝肯集团公司)；DHG-9053A型电热恒温干燥箱(上海医用恒温设备厂)。

1.3 实验动物

取Wistar雌性大鼠48只，体质量180～220 g，购置于辽宁长生生物技术股份有限公司，质量合格证号：No.SCXK(辽)2015-0001。

2 实验方法

2.1 实验动物分组及给药

按照大鼠的体质量随机分成正常对照组、血瘀模型组、止痛化癥胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组共6组，每组8只。止痛化癥胶囊高、中、低剂量分别为1.60 g/kg、0.80 g/kg和0.4 g/kg，阳性对照组为桂枝茯苓胶囊，剂量为1 g/kg。在室温(22±2)℃，湿度为40%～60%的饲养室中，适应性饲养1周后，次日上午开始灌胃给药，灌胃剂量为10 mL/kg，实验过程中正常对照组及血瘀模型组给予等量的蒸馏水，各给药组均给予供试药液，连续给药7 d。

2.2 急性血瘀模型的制备

除对照组大鼠外，其余各组大鼠灌胃给药，给药1 h后，除对照组大鼠外，其它各组大鼠放置0～2℃冰水中，浸泡游泳4 min，连续进行7 d，并于第7天末次给药1 h后，给大鼠皮下注射0.1%肾上腺素2次，剂量为0.8 mL/kg ，中间相隔时间为4 h，在第 1 次大鼠皮下给予盐酸肾上腺素注射液 0.8 mg/kg，2 h后，将大鼠置于0～2℃冰水中，浸泡游泳4 min，再过2 h后，注射第2次盐酸肾上腺素注射液，造成大鼠急性血瘀证模型[9]。

2.3 血液流变学指标的测定

给大鼠第2次注射肾上腺素后，将大鼠禁食不禁水12 h，次日，除对照组大鼠外，其余各组大鼠灌胃给药，1 h后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛将其麻醉 ，进行大鼠腹主动脉取血。将血液放置在肝素抗凝管中，然后测定大鼠全血黏度和血浆黏度。首先，将放置肝素抗凝管中的血液取出适量，用血流变检测仪对全血黏度的低切(10/s)、中切(60/s)及高切(150/s)进行测定，然后将余下全血离心10 min，转速3 000 r/min，取血浆适量进行血浆黏度(140/s)测定。所有的实验操作在采血后3 h内完成。

2.4 血浆GMP-140及vWF含量的测定

给大鼠第2次注射肾上腺素后，将大鼠禁食不禁水12 h，次日，除对照组大鼠外，其余各组大鼠灌胃给药，1 h后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛将其麻醉 ，进行大鼠腹主动脉取血，将血液放置在肝素抗凝管中离心10 min，转速3 000 r/min。吸取上层血浆，分别按照大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)及大鼠血管性血友病因子(vWF)试剂盒说明书进行测定含量。

2.5 数据处理方法

3 实验结果

3.1 止痛化癥胶囊对血液流变学的影响

通过对比模型组与对照组数据，结果表明，模型组大鼠全血高、中、低切黏度均明显增加，血浆黏度明显增加，数据表明，大鼠急性血瘀模型复制成功。对照组急性血瘀模型大鼠全血高、中、低切黏度及血浆黏度显著降低(P<0.05，P<0.01)。止痛化癥胶囊中、高剂量组显著低于模型组血浆黏度以及全血黏度(P<0.01)，低剂量组明显降低模型大鼠全血高、中切黏度及血浆黏度(P<0.05)。表明止痛化癥胶囊能够影响急性血瘀模型大鼠的血液流变学，效果显著，见表1。

表1 止痛化癥胶囊对血瘀模型大鼠全血黏度及血浆黏度的影响

注：与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

3.2 止痛化癥胶囊对血浆GMP-140及vWF含量的影响

通过比较模型组与对照组，结果表明，模型组大鼠血浆GMP-140及vWF含量明显增加(P<0.01)。与血瘀模型组相比，桂枝茯苓胶囊能够明显降低急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140及vWF水平(P<0.01)。止痛化癥胶囊低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140及vWF含量明显减低(P<0.01)。研究表明，止痛化癥胶囊可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140及vWF水平明显降低。见表2。

表2 止痛化癥胶囊对血瘀模型大鼠血浆GMP-140 及vWF含量的影响

注：与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

4 讨论

血瘀证在妇科中是一种常见的疾病,血液循环受到阻碍，瘀血在体内运行不畅均对妇女造成伤害[10]。ZTHZC广泛运用于治疗妇科疾病，其丹参素，丹酚酸B等活性成分已被报道具有抗血栓、抗动脉粥样硬化及改善血液循环的作用[11-12]。血液流变学能够评估血液循环状态，可以作为一种检测指标[13]，当血液流变学发生异常，就会使人体内的血液循环产生阻碍，就会发生血瘀证，诱发各种疾病。GMP-140是血小板α颗粒膜蛋白，是血小板活化的标志性成分。GMP-140可参与血小板与单核巨噬细胞及内皮细胞的相互作用，能够反映出体内血小板的活化程度和聚集，对血栓的形成具有监督作用[14-15]。血管性血友病因子vWF可以作为内皮细胞受到伤害的标志性成分，是一种血管内皮细胞和巨核细胞合成的糖蛋白。当内皮细胞受到损害时，可参与血小板的相互作用，使血小板发生聚集、黏附，导致血栓的发生[16-17]。

本研究首次采用皮下注射肾上腺素结合冰水浴建立大鼠急性血瘀证模型，通过检测血液流变学及GMP-140、vWF试剂盒，探究ZTHZC改善血瘀证的药效学研究。结果表明ZTHZC中、高剂量组能够降低血瘀模型大鼠全血高、中、低切黏度，也使血浆黏度显著降低(P<0.01)，低剂量组也能够降低模型大鼠全血高、中切黏度降低和血浆黏度(P<0.05)，有明显改善急性血瘀模型大鼠的血液流变学作用。ZTHZC各剂量组均能够明显降低急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140及vWF含量(P<0.01)，从而影响血小板相互作用及活化而达到抗血瘀效果。研究表明，ZTHZC可以显著改善血液流变学的相应指标，具有改善血瘀证的药效作用，下一步将从ZTHZC改善血瘀的代谢组学进行分析，明确相关代谢通路，为阐明ZTHZC的作用机制提供科学依据。