多囊卵巢综合征患者外周血游离miR-21在诊断中的运用研究

张伟新 卢孔月 文道林 曾 君 刘 琛

（中国科学院大学深圳医院（光明），广东 深圳 518107）

多囊卵巢综合征（PCOS）为生育期女性最为多见的内分泌代谢异常性疾病之一，其主要表现为女性慢性无排卵、雄激素水平升高及卵巢多囊样改变，多合并胰岛素抵抗和肥胖的发生[1]。现阶段PCOS发病机制尚未明确，以往研究认为该病可能与遗传及环境因素等有关[2]。miRNA为一种含有22个核苷酸长度的单链非编码RNA，能够与靶基因mRNA 3'-端特异性结合，对靶基因mRNA的表达进行调控。miRNA的表达失调可导致上百个mRNA和蛋白表达的变化，在疾病的发生和发展过程中具有重要的作用[3]。自从在血清/血浆中发现与疾病相关的miRNA后，多个研究小组展开了血清/血浆miRNA水平与多种疾病关系的研究。结果表明，在患者的血清/血浆中存在着相关疾病特定的miRNA表达谱，与疾病的发生和发展相关[3]。而随着对miRNA在多种疾病中的研究不断深入，为多囊卵巢综合征外周血游离miRNA的筛选与鉴定以及在诊断中的应用研究提供了可行性。

1 资料与方法

1.1 一般资料：随机选取我院2017年7月至2018年6月妇产科收治的PCOS患者30例，年龄21～39岁，平均年龄（32.2±6.5）岁；年龄选择于我院健康体检的健康者30例，年龄22～40岁，平均年龄（33.1±6.3）岁。纳入标准：符合我国颁布的多囊卵巢诊断标准[4]；超声检查确诊为卵巢多囊性改变；无排卵或稀发排卵；未合并卵巢其他疾病；未达到手术指征；既往于正规医院接受治疗。排除标准：引其他疾病所导致的雄激素分泌增加；处于妊娠期或哺乳期；合并其他系统疾病；进阶段使用激素或调制降糖药干预。两组患者一般临床资料对比无差异性（P＞0.05），可进行对比。

1.2 主要试剂：Trizol试剂（购自北京天根生物科技有限公司）；TransScript II Green Two-Step qRT-PCR SuperMix 试剂盒（购自北京天根生物科技有限公司）。

1.3 方法：所有纳入研究患者均空腹8 h以上，采集空腹外周静脉血，并于采血后2 h内采用4 ℃低温离心机离心10 min，转速为1600 r/min，取上清置于-80 ℃冰箱中备用。用于检测miR-21的血清在采用离心机离心10 min（转速16000 r/min）以保证血清中不含有血浆各种细胞成分，置于无RNA酶的EP管中保存待测。首先运用TRIzol （Invitrogen）法提取血清中的总RNA，随后采用TransScript II Green Two-Step qRTPCR SuperMix 试剂盒，按照试剂盒说明操作，对总RNA中的miRNA进行特异的逆转录反应，合成目标miRNA的cDNA模板用于后续的Q-PCR扩增反应，操作步骤严格遵守试剂盒说明书进行，采用Q-PCR仪（ABI7500）检测miR-21表达水平。

1.4 统计学方法：采用SPSS2.0统计学软件对数据进行统计分析，组间对比采用t检验分析，以表示；计数资料采用χ2检验分析，以%表示。诊断价值采用受试者工作曲线（ROC）下面积（AUC）评价指标的诊断价值，采用Z检验对比ROC曲线下面积。当P＜0.05时，差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同组别人群miR-21表达水平对比：PCOS组者miR-21表达水平为（8.53±2.36），健康组miR-21表达水平为（4.78±1.27）对比具有差异性（t=4.68，P=0.00）。见表1。

表1 不同组别人群miR-21表达水平对比

表1 不同组别人群miR-21表达水平对比

分组 例数 miR-21 PCOS组 30 8.53±2.36健康组 30 4.78±1.27 t值 - 4.68 P值 - 0.00

2.2 miR-21对鉴别诊断POCS和健康者的诊断价值分析：对miR-21进行进一步的受试者工作曲线（ROC）评估是否具有作为鉴别诊断POCS的生物标志物的价值。结果表明：血清miR-21诊断ROCS的受试者工作曲线（ROC）下面积（AUC）为0.928（P=0.001），则miR-21对POCS具有诊断价值；选取大于5.20的截点时，Youden指数此时最大，则miR-21对鉴别诊断POCS具有较好的诊断价值，灵敏度为100.00%，特异度为72.70%。见图1。

3 讨 论

图1 血清中miR-21在POCS患者和健康人群中相对表达结果

多囊卵巢综合征为现阶段女性人群中最为多见的内分泌疾病之一，多合并有代谢异常及生殖功能障碍，但现阶段其发病因素或发病机制尚未明确[5]。且近些年来的研究证实，多囊卵巢综合征患者雄性激素分泌增加是导致机体代谢紊乱的作用因素[6]。miRNAs对机体中细胞增殖分化、凋亡及免疫中具有重要的作用[7]。miR-21为机体中分布最为广泛的miRNAs之一。有研究表明[8-9]，miRNA在卵巢细胞中能够通过作用于卵巢颗粒细胞，在性腺发育、激素合成分泌具有重要作用，从而促进卵细胞的成熟。有学者研究发现[10]，miR-21对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡具有抑制作用，可提高小鼠的排卵率。本研究结果表明，PCOS组者miR-21表达水平为（8.53±2.36），健康组miR-21表达水平为（4.78±1.27），对比具有差异性（t=4.68，P=0.00）。血清miR-21诊断ROCS的受试者工作曲线（ROC）下面积（AUC）为0.928，选取大于5.20的截点时，Youden指数此时最大，则miR-21对鉴别诊断POCS具有较好的诊断价值，灵敏度为1.00，特异度为0.73（P=0.001）。综上所述，血清miR-21在PCOS中表达水平增加，且对PCOS具有较好的诊断价值。