造成石蜡制片污染的可能因素

刘天民 童玲玲

制作一张高质量的石蜡切片是一个多步骤，多因素的过程。造成石蜡制片污染的因素主要分为两大类：组织的污染和试剂的污染，以及人为的因素。本文主要根据石蜡制片的步骤，总结归纳可能出现污染的情况。

1.取材

活体新鲜组织离体后，应立即放人10%中性福尔马林中固定，送至病理科。组织送到后，专门人员应将组织标本与送检单一一对应，核对病人的基本信息，送检组织，若有不符，病理科有权拒收，待J临床科室更正后再次接受，并将每日接受的标本进行登记。病理科标本的接收核对是活检组织处理的第一步，也是关键之一，如果一旦核对有误，将出现严重而不可挽回的后果。

对于某些较小或者较碎的组织，如诊刮的子宫内膜组织、门诊活检的破碎宫颈组织等，取材时应将组织包在擦镜纸里，以免掉出包埋盒。对于某些体积过大的组织，如胎盘组织等，需固定至第二天才取材，待标本核对结束后，一定要重新粘贴标本袋上的标签，以免因福尔马林水溶液将标本签打湿，造成字迹不清楚，无法确认标本的来源。

每次完成一个标本的取材后，一定要对取材用的工具，如刀，镊子，剪刀，取材板，直尺等用流水冲洗，保证不会将第一次取材的组织带人第二次取材。取材的大小以1.5cm×1.5cm×（0.2-0.3）cm为宜，过大过厚脱水较软，切片易破碎，过小组织脱水较硬，切片易出现横纹。取材的合格与否直接影响后续组织的固定、脱水、透明、浸蜡及制片。

2.脱水机处理

取材完成后，组织放人全自动脱水机中处理，主要包括组织的固定、脱水、透明。取材结束，须确保每个包埋盒的盖子已盖紧，以免组织在脱水机处理过程中掉出。脱水机中的甲醛，二甲苯，梯度酒精，液体石蜡，清洗试剂需及时更换，一方面保证脱水机每日的正常运行，另一方面确保不因试剂的污染而造成组织的污染。

3.包埋

包埋的原则需遵循打开一个脱水盒，包埋一个组织，杜绝一次性打开多个脱水盒的现象，以免组织掉落或不慎掉人下一个包埋盒中。包埋过程的污染主要来源于组织的污染，在相邻组织块之间，完成一次包埋后需要将镊子擦拭干净，或者直接将镊子插入包埋机的专属镊子加热孔中，多把镊子交替使用，以免上一个组织被人为带入下一个组织中。如包埋诊刮的子宫内膜组织，由于是破碎组织，一方面镊子上很容易粘连，另一方面组织易悬浮于底蜡中，需要及时将组织靠压在一起。对于管状结构的组织，如输卵管、脐带等，管状面与包埋面垂直，按“品”型包埋;对于皮纸组织，如外阴等，包埋面必须与表明垂直，这样才能包埋皮肤的各层结构都能被看观察。

4.冻块

石蜡组织完成包埋，制作成组织块后，需放入一4℃冷冻一段时间，易于切片。在冻块过程中，将一个病理号的每个组织按取材小号依次放置，方便后续切片。

5.切片

切片时，先核对玻片上的病理号与蜡块组织上的病理号是否一致，保证相同无误的前体下，再行切片。切片时，首先要保证毛笔刷、镊子干净，无污染物，尤其是一些含血凝块较多的组织，在切片时容易产生大量细小的碎屑，进而影响下一个蜡块的切片。此外，在分片时，一定要注意镊子上污染物不能掉入切片上。

展片时，需用硬纸将水面上漂浮的多余组织打捞干净，尤其对于脂肪组织等这类在水中极易散开的切片，以防污染。若相邻的蜡块是同一类型的组织，可能就会无法识别。每日完成切片工作后，需将水浴缸清洗。

6.HE染色

HE染色污染主要是试剂的污染，如常见的苏木精沉查。苏木精被氧化后在染液表面会形成氧化膜以及在媒染剂的作用下形成的氧化铝结晶，在进行苏木素上色时，容易黏附在切片上，尤其是含黏液较多的组织。所以，除了定时更换或过滤苏木素，每日染色前需将苏木素表层的氧化膜打捞干净，再行染色。此外，若出現某些切片烤片不当，组织掉落在染色试剂中，也可能会造成污染。

7.裱片

裱片时采用的中性树胶的浓度要实验，太浓胶水不易散开，太淡容易出现气泡且溢出。此外，裱片时一定要使胶水全部覆盖组织，尤其是某些钙化或含有颗粒体的组织时，由于该类组织表面不平整，易出现大气泡，胶水扩散不均匀。

8.核对

在日常工作中，核对会花耗大量的时间，核对是制片的最后一步，也是关键步骤。处理上述在切片时核对蜡块跟玻片的一致性，染色完成后需核对切片与取材记录时的数目是否一致。

9.保存

门诊标本需保存15年，住院标本需保存30年，所以每日的石蜡块切片完毕后，需要及时的进行封块，以免组织暴露在空气中被氧化。封块时一定要注意时间，尤其是一些极小的组织，动作要快，避免蜡块融化组织掉出。

综上，从组织送检至病理科开始，就应该严格的按照规范流程操作，重视每一个操作步骤。在实际工作中，每日的切片量较大时，在保证制片质量的前体下，需合理分配时间，秉承认真负责的态度，稍有一个环节出现差错，就会影响整体效果造成污染，影响最终的病理诊断。

通讯作者：童玲玲。