新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析

孙英慧

（北部战区总医院 辽宁 沈阳 110016）

相关研究表明，DNA是一种较强的免疫反应刺激物，不仅激活免疫细胞使其进行增殖分化，亦可以对免疫应答进行调节[1]。随着研究的进一步深入，现已证实CpG-DNA既能诱导机体产生细胞免疫，又能诱导机体产生体液免疫，其免疫应答主要以Th1为主，亦有学者称其为新型免疫佐剂[2]。近年来，CpG-DNA引起了广泛关注，已有研究证明其具有甲基化CpG基序。本研究旨在探究新型免疫佐剂CpG-DNA对HBsAg的免疫作用。

1.资料与方法

1.1 一般资料

取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，其周龄为8～10，皆为雌性。按照随机数字表法，分为两组，分别为HBsAg组、HBsAg+CpG-DNA组，每组各15只。

1.2 方法

HBsAg+CpG-DNA组：CpG-DNA剂量取80μg，抗原取1μg，充分混合后，对小鼠进行皮下、背部注射，每只注射量皆为80μg。HBsAg组：只给予HBsAg，方法同HBsAg+CpG-DNA组。自第一次注射后，第4周及第12周时再次加强免疫。加强免疫后一周内处死小鼠，取其脾脏，采用ELISPOT试剂盒测定细胞毒T淋巴细胞的功能。

1.3 观察指标

对比各组细胞的细胞毒T淋巴细胞功能。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数资料（%）进行χ2检验，计量资料（）进行t检验，P＜0.05提示有显著差异。

2.结果

在第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpG-DNA组分泌的CD8+CTL的数量较HBsAg组显著升高（P＜0.05），见表。

表 两组细胞免疫检测结果比较

3.讨论

以往研究认为，DNA的免疫原性较弱，难以引起机体较强的免疫反映[3]。人们对DNA免疫调节的重视追溯到20世纪80年代，科学家首次检测出从牛分枝杆菌中提取出具有抗肿瘤活性的DNA。而随着研究的进一步深入，有学者对编码牛分枝杆菌蛋白的cDNA中进行了不同序列ODN的合成，经检测，部分ODN具有较强的免疫原性，可诱发机体强烈的免疫反映[4]。而这类ODN来说都具有一个或多个回文序列的特性。除此之外，另有科学家对ODN结构进一步测定，结果显示具有免疫刺激作用的CpG ODN通常为非甲基化，一旦经甲基化修饰，或者GC或其它序列代替了CpG ODN则其免疫活性消失。基于此，有学者认为DNA具有免疫活性的前提为具有甲基化CG双核苷为核心的特定核苷酸序列。而免疫系统对外源性DNA进行免疫应答就是通过对这些特定序列进行特异性识别而实现的。无与此同时，亦有相关研究报道，CpG序列是否含有低甲基化或者非甲基化是决定CpG-DNA是否有免疫活性的主要问题。若CpG未发生甲基化或者呈低甲基化，则其免疫活性较佳；反之，若CpG缺失或呈高甲基化，则其活性明显降低。经进一步测定，现认为CpG-DNA的活性结构为CpG两侧的2个5’嘌呤和2个3’嘧啶，且当5’端为GpA、3’端为TpC或TpT时活性最强[5]。本研究取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，于免疫强化后一周进行细胞毒T细胞功能检测结果显示，对小鼠第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpGDNA组分泌的CD8+CTL的数量显著升高（P＜0.05），这与相关研究结果不谋而合，表明了CPG-DNA对HBsAg具有较好的免疫佐剂作用，不仅能够与铝剂相互协同促进IgG的产生与分泌，亦能够促进Th2类免疫反应逆转为Th1类免疫反应，这一转变是通过IFN-γ的分泌完成的。

综上所述，CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂。