GeneXpert仪PCR检测技术在基层实验室结核病特定人群中的应用

2019-08-19占启川刘建成陈清文施素英林玉发陈云琴林明良赖繁彩

中外医学研究 2019年15期

占启川　刘建成　陈清文　施素英　林玉发　陈云琴　林明良　赖繁彩

【摘要】目的：探讨GeneXpert MTB/RIF PCR（GeneXpert）检测技术在基层实验室结核病特定人群中的应用效果。方法：回顾性分析笔者所在医院2016年1月-2019年1月共300例痰液标本，分别通过涂片法、液体分枝杆菌培养管培养法及GeneXpert MTB/RIF进行检测，分析GeneXpert检测技术在结核病特定人群中的应用效果。结果：300例痰标本中，涂片法检测显示阳性52例，占比17.33%，阴性248例，占比82.67%;液体培养法检测显示阳性80例，占比26.67%，阴性220例，占比73.33%。GeneXpert检测显示阳性81例，占比27.00%，阴性219例，占比73.00%。以液体培养法为标准，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。两种检测方法敏感度比较，差异有统计学意义（字2=21.191，P=0.000）;一致率比较，差异有统计学意义（字2=9.450，P=0.002）。结论：GeneXpert检测技术具有操作简单、快速、安全等优势，且敏感性、特异性较高的特点，可作为基层实验室早期检测结核病的重要方法之一，值得推广应用。

【关键词】 GeneXpert; 基层实验室; 结核病; 快速诊断

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.15.029 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）15-00-03

【Abstract】 Objective：To explore the application effect of GeneXpert MTB/RIF PCR in tuberculosis specific population in primary laboratory.Method：300 sputum specimens from January 2016 to January 2019 in our hospital were retrospectively analyzed.The application effect of GeneXpert in tuberculosis specific population was analyzed by smear method，liquid mycobacterium culture tube method and GeneXpert MTB/RIF.Result：Among 300 sputum specimens，52 were positive by smear method，accounting for 17.33%，248 were negative，accounting for 82.67%，80 were positive by liquid culture method，accounting for 26.67%，220 were negative，accounting for 73.33%.GeneXpert test showed 81 positive cases（27.00%） and 219 negative cases（73.00%）.According to the standard of liquid culture method，the sensitivity of smear method was 60.00%（48/80），the consistency rate was 88.00%（264/300），the sensitivity of GeneXpert was 91.25%（73/80），and the consistency rate was 95.00%（285/300）.The sensitivity of the two methods was significantly different（字2=21.191，P=0.000） and the consistency rate was significantly different（字2=9.450，P=0.002）.Conclusion：GeneXpert detection technology has the advantages of simple operation，fast and safety，and has high sensitivity and specificity.It can be used as one of the important methods for early detection of tuberculosis in primary laboratories，and it is worth popularizing and applying.

【Key words】 GeneXpert; Primary laboratory; Tuberculosis; Rapid diagnosis

结核病属于慢性传染病，主要是由于结核分枝杆菌导致，我国是结核病发病的高负担国家。呼吸道传播是结核病传染的主要途径，传染性最强的时间段为发现及治疗前，因此早期诊断对肺结核的治疗具有重要的指导意义。目前主要通过实验室检测对结核病进行诊断，实验室检测是临床治疗的重要参考依据，常用的方法包括涂片镜检、液体培养等[1]。涂片镜检的敏感度较低，固体培养虽然敏感度较高，但需要3～8周的检测时间，耗时较长，在早期诊断及治疗方面存在一定的缺陷。因此，寻找一种快速、可靠的实验室检测方法对肺结核的诊断至关重要[2]。近年来，随着医学技术的发展，结核分枝杆菌的鉴定方法也越来越多，如GeneXpert MTB/RIF PCR（GeneXpert）技術，该技术建立在全自动半巢式实时PCR基础上，将rpoB基作为靶基因，能直接检测标本中是否存在分枝杆菌感染。另一方面，该技术对传统PCR检测的流程进行了整合，提高了检测的自动化水平，简化了操作内容，更适用于基层实验室。但从目前我国的情况来看，GeneXpert应用时间较晚，大规模应用可行性的研究相对较少[3]。因此，本次研究探讨了GeneXpert检测技术在结核病特定人群中的诊断效能，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析笔者所在医院2016年1月-2019年1月痰检涂阳复发、边远山区、随访、涂阴、在校生等特定人群及部分笔者所在医院收治的结核病患者共300例的痰液标本，其中男197例，女103例，年龄13～80岁，平均（52.82±6.64）岁。

1.2 方法

涂片法严格遵照文献[4]《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》中的程序实施。液体培养法参照文献[5]《结核病诊断实验室检验规程》进行操作，将0.5 ml痰液标本加入液体培养管中，再通过液体培养系统进行培养，对显示阳性的标本进一步实施药敏试验。GeneXpert检测方法：按照说明书进行处理，取1 ml前处理标本，加入标本体积2倍的痰标本处理液，经涡旋振荡器处理15～30 s后静置15 min。吸取2 ml后加入反应盒，再将反应盒置入仪器中行自动化检测，记录检测结果。

1.3 统计学处理

通过SPSS 22.0软件进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果

300例痰标本中，涂片法检测显示阳性52例，占比17.33%，阴性248例，占比82.67%;液体培养法检测显示阳性80例，占比26.67%，阴性220例，占比73.33%。GeneXpert检测显示阳性81例，占比27.00%，阴性219例，占比73.00%。

2.2 GeneXpert与涂片法检测结果对比

52例涂片法阳性标本中，GeneXpert结果显示阳性48例;248例涂片法阴性标本中，GeneXpert结果显示阴性215例，见表1。

表1 GeneXpert与涂片法检测结果对比例

2.3 涂片法与液体培养法检测结果对比

80例液体培养法阳性标本中，涂片法结果显示阳性48例;220例液体培养法阴性标本中，涂片法结果显示阴性216例，见表2。

2.4 GeneXpert与液体培养法检测结果对比

80例液体培养法阳性标本中，GeneXpert结果显示阳性73例;220例液体培养法阴性标本中，GeneXpert结果显示阴性212例，见表3。

2.5 GeneXpert与涂片法效能对比

以液体培养法为标准，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。两种检测方法敏感度比较，差异有统计学意义（字2=21.191，P=0.000）;一致率比较，差异有统计学意义（字2=9.450，P=0.002）。

3 讨论

结核病的早期诊断对控制结核病的传播具有重要意义，实验室检查是目前临床中诊断结核病的重要参考依据[6]。从目前基层实验室的现状来看，在诊断菌阳肺结核方面，仍以痰涂片、痰培养等传统方法为主[7]。但这两种方法的检出率较低，容易出现误诊、漏诊等情况，耽误最佳治疗时机。因此，寻找一种新型的结核分枝杆菌高检出率手段具有重要的意义，是保证临床疗效，改善患者预后的关键[8]。

近年来，随着医学技术的发展，GeneXpert检测技术已广泛应用于多个国家，并取得了一定的效果。GeneXpert以半巢式PCR为基础，将样品准备、DNA扩增、DNA检测步骤整合在一起，样品经处理后，直接加入测试盒中，之后在微流样品盒中完成DNA提取，同时可实现对DNA的浓缩、纯化，有利于提高测试的灵敏度。浓缩纯化后的DNA标本再加入反应管中，经扩增实现检测，使标本在整个检测过程中处于封闭的反应盒中，实现了检测自动化，避免了人为因素可能造成的样品污染。且该方法对DNA序列的检测具有高度敏感性，软件在发现目标序列后可实时得出结果，整个过程仅需150 min左右，能够达到快速诊断的目的[9-10]。

目前我国对结核菌的检测一般以固体培养为金标准，而本次研究将液体培养作为金标准，可为后续研究提供一定的参考价值。本次研究显示，300例痰标本中，涂片法检测显示阳性52例，占比17.33%，阴性248例，占比82.67%;液体培养法检测显示阳性80例，占比26.67%，阴性220例，占比73.33%。GeneXpert檢测显示阳性81例，占比27.00%，阴性219例，占比73.00%。以液体培养法为标准，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。两种检测方法敏感度有明显差异（字2=21.191，P=0.000）;一致率有明显差异

（字2=9.450，P=0.002）。和液体培养法相比，GeneXpert检测所需的时间较少，对临床早期快速诊断、早期治疗具有重要的意义，应用价值较高。目前门诊中典型的肺结核患者明显减少，且在影像学方面的表现也不够典型，大大增加了临床诊断的难度，而GeneXpert作为一种新型检测技术，能为临床医师提供更多的参考依据，从而实现对结核病患者的早期诊断与治疗[11-12]。另一方面，GeneXpert对实验室生物安全性的要求相对较低，对操作人员危害较小，在基层实验室可行性较高，可作为一种新型的诊断工具。

综上所述，GeneXpert检测技术具有操作简单、快速、安全等优势，且敏感性、特异性较高等优势，可作为基层实验室早期检测结核病的重要方法之一，值得推广应用。

参考文献

[1]张丽霞，谢祎，孙昕，等.GeneXpert MTB/RIF检测技术在艾滋病合并肺结核双重感染中的诊断价值[J].中华检验医学杂志，2016，39（1）：53-54.

[2]张青，薛冰茹，李克诚，等.GeneXpert MTB/RIF系统对肺结核的诊断价值[J].检验医学，2016，31（7）：599-602.

[3]王蔚，吕青山，郁勤龙，等.GeneXpert MTB/RIF在疑似肺结核患者诊断中的应用价值[J].中国防痨杂志，2018，40（5）：543-547.

[4]赵雁林，姜广路.痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册[M].北京：中国协和医科大学出版社，2009.

[5]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京：中国教育文化出版社，2006：34-58.

[6]王铁山，齐墨词.比较四种实验室辅助检查方法在肺结核诊断中的应用价值[J].现代检验医学杂志，2016，31（1）：134-137.

[7]林永通，麦世康.GeneXpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价[J].中国热带医学，2018，18（1）：93-95.

[8]牛家峰，尚永明，张宁，等.复治肺结核患者痰液耐药结核分枝杆菌鉴定中荧光定量PCR与反向点杂交技术的联合应用[J].山东医药，2016，56（31）：69-71.

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[10]袁瑛，明湘虹，郑宏，等.SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究[J].临床肺科杂志，2019，24（3）：538-540.