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新疆戈宝麻花、种子及叶片部位芦丁含量比较

2019-08-15张孟丽束成杰张卫明

中国野生植物资源 2019年3期
关键词:芦丁麻花供试

张孟丽,束成杰,张卫明*

(1. 南京师范大学生命科学学院,江苏 南京 210023; 2. 南京野生植物综合利用研究院,江苏 南京 211100)

戈宝麻(GAU BAU KENDER),罗布麻属,夹竹桃科,多年生宿根草本植物,年生长大约180天,具有很强的抗逆性[1-3]。罗布麻做茶饮和药用已有非常悠久的历史,自《中国药典》中也记载罗布麻有清热利水、平肝安神的功效,用于治疗高血压、头晕、心悸、失眠等症状[4]。戈宝麻作为罗布麻的一种,功效也极其显著。据文献报道,绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、紫云英苷、槲皮素、山柰酚是戈宝红麻中主要的化学成分[5]。其中芦丁作为一种活性物质,具有清除自由基、促进成骨细胞的生长、降低血糖、抑制结肠癌和前列腺癌等作用[6-8]。近年来前人对戈宝麻研究开发大多集中于其叶片上,因此,本文用液相色谱法测定新疆戈宝麻不同部位中芦丁的含量,为今后戈宝麻的综合开发利用提供科学依据。

1 实验与方法

1.1 材料与仪器

戈宝麻(产地新疆阿勒泰)南京野生植物综合利用研究院提供;NH-4数显恒温水浴锅金坛市三坛仪器厂;SHZ-DⅢ循环水式真空泵巩义市予华仪器责任有限公司;RE-52AA旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂;KF-1209电子天平凯丰集团有限公司;BCD-183A冰箱合肥荣事达电冰箱有限公司;液相色谱仪美国Agilent公司;微孔滤膜上海嘉鹏科技有限公司。

1.2 试剂

芦丁对照品上海源叶生物科技有限公司;甲醇、乙腈(色谱纯,美国Fisher Scientific公司);磷酸为优级纯;水为纯净水;其他试剂均为分析纯。

1.3 实验方法

1.3.1 芦丁提取

本实验用乙醇作为提取剂,采用回流提取法提取芦丁。将戈宝麻花、种子、叶片除杂干燥,粉碎,称取戈宝麻各部位粉末50g,共3份,分别加入8倍体积分数为80%乙醇在80℃下回流提取3次,每次1 h,合并提取液,离心后过滤,放至室温,减压回收溶剂,收集滤液,微膜过滤,得样品液[9-11]。

1.3.2 色谱条件

流动相:乙腈:0. 25%磷酸,流速1.0 ml/min,检测波长为360 nm[9,10]。

1.3.3 标准曲线

对照品溶液的制备准确称取芦丁对照品各10.0 mg,分别置于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,置4℃冰箱避光保存备用[11,12]。

准确量取上述制备的芦丁对照品溶液,配置成0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL的芦丁对照品溶液。分别精密吸取20 μl进样,得线性关系良好的回归方程。

1.3.4 样品测定

将各供试品溶液离心后用滤膜过滤,精密吸取20μl进样,用标准曲线计算其芦丁含量。

1.4 数据处理

所有数据均为平均值±平均标准误差(S.E.M)。数据分析使用SPSS 12.0软件完成(SPSS Inc.,Chicage,USA)。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

如图1,芦丁标准品的高效液相色谱图,其单一显著出峰时间为10-11min;如图2,芦丁标准曲线,计算得知,芦丁的峰面积与质量浓度呈线性关系,回归方程分别为为y=27.011x-10.74,r =0.9936(y为峰面积,x为质量浓度,r为相关因数)。如图3,新疆戈宝红麻花、种子、叶的供试品溶液高校液相色谱图;

图1 芦丁标准品高效液相色谱图Fig.1 Standard chromatographic separation of figure ofrutin from GAU BAU KENDER

图2 芦丁标准曲线Figure 2 The standard curve ofrutin

图3 新疆戈宝麻花、种子、叶片供试品溶液高校液相色谱图Figure 3 Sample chromatographic separation of figure of rutin from GAU BAU KENDER

2.2 精密度试验

如表1,取各部位供试品溶液,精密吸取20 ul,按“1.3.2”色谱条件分别连续进样6次,测定各供试品溶液中芦丁的峰面积,计算芦丁含量的RSD值,以评价仪器的精密度[13]。测得花、种子、叶中芦丁含量的RSD值分别为2.7%,2.2%,2.8%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.3 稳定性试验

如表2,取各部位供试品溶液,按“1.3.2”色谱条件,分别在0、2、4、6、8、10 h进样20 ul,测定各供试品溶液中芦丁的峰面积,计算芦丁含量的RSD值,以评价供试品溶液的稳定性[14,16]。测得花、种子、叶中芦丁含量的RSD值分别为2.8%,2.6%,2.5%(n=6),表明各供试品溶液在配制24 h内稳定。

2.4 重复性试验

如表3,取不同部位供试品溶液各3份,并进行HPLC测定,记录峰面积计算芦丁含量的RSD值,以评价方法的重现性[17,18]。测得花、种子、叶片中芦丁含量的RSD值别为1.86%,2.9%,2.3% (n=3),表明该方法的重复性满足要求。

表1 精密度实验结果Table 1 Result of accuracy experiment

表2 各部位供试品溶液稳定性测定结果Table 2 Result of stability test of the sample solution in the flowers

表3 重现性测定结果Table 3 Result of reproducibility experiment

2.5 回收率实验

如表4,分别取戈宝麻花、种子、叶片样品液各1ml,加入对照品,制备供试品溶液,并在相同色谱条件下进样20 μl,测定峰面积,计算平均加样回收率及RSD值。测得花、种子、叶片中芦丁平均加样回收率分别为98.65%,100.40%,96.9%;RSD 分别为 2.7%,0.09%,2.6% (n=6)。

表4 芦丁加样回收试验结果Table 4 Recovery of flowers, seeds and leaves of GAU BAUKENDER.

2.6 戈宝麻花、种子、叶各部位芦丁含量比较

如表5,新疆戈宝麻花、种子、叶中均含芦丁,花、种子、叶中芦丁的得率分别为0.094%,0.014%,0.6%,因此,戈宝红麻三个部位中芦丁的含量分布为:叶>花>种子。

表5 花、种子、叶片部位芦丁含量比较Table 5 Comparison of the content of rutinin flowers, seeds and leaves.

3 讨论

本研究发现新疆戈宝麻花中芦丁得率为0.094%,种子中芦丁得率为0.014%,叶中芦丁得率为0.6%,其叶中芦丁含量与石秋梅[22]等研究发现的新疆产罗布红麻中芦丁含量结果非常接近。目前戈宝麻产品大多集中于对叶片的开发利用,因此本文通过高效液相层析对戈宝麻花、种子、叶片三个部位的芦丁含量进行分析,发现芦丁的含量分布为:叶﹥花﹥种子,由此看出,研究不同部位戈宝麻中芦丁含量,有利于更合理地利用戈宝麻资源,创造更高的附加值。

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