ApoE基因多态性与高脂血症患者降脂疗效的相关性

姚琼 郑炎焱 吴曙智 林一均 吴森翔 戴显宁 张旭

随着我国经济的发展和人民生活水平的提高，高脂血症患者逐年增加，据《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》报道，2012年我国高胆固醇血症的患病率为4.9%，高甘油三酯血症的患病率为13.1%，低高密度脂蛋白胆固醇血症的患病率为33.9%，血脂异常总患病率高达40.4%[1]。高脂血症可引起动脉粥样硬化、斑块形成、血管狭窄，增加冠心病、脑梗死等心脑血管意外的发生，给人们的生命健康和经济带来严重的危害[2]。高脂血症患者常用他汀类药物治疗。载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因位于19号染色体，有E2、E3、E4 3种主要的异构体，分别由3个等位基因ε2、ε3、ε4编码而成，组成 6种基因型：E2型（E2/2、E2/3）、E3型（E2/4、E3/3）、E4 型（E3/4、E4/4）[3-4]。目前发现 ApoE基因与阿尔茨海默病、冠心病、脑梗死等疾病有关。近年研究发现ApoE基因多态性与高脂血症患者的血脂水平和他汀类降低胆固醇有关[5-7]。本研究旨在探讨ApoE基因多态性与高脂血症患者降脂疗效的相关性，以指导临床合理用药。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2016年7月至2017年12月在温州市人民医院神经内科和心内科门诊诊断为高脂血症的患者 100例，其中男66例，女 34例；年龄 32～89（66.62±12.82）岁。高脂血症诊断标准参照《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》[1]：（1）TC≥6.2mmol/L；（2）TG≥2.3mmol/L；（3）LDL-C≥4.1mmol/L；以上 3 项中符合一项即可。排除标准：（1）严重肝肾功能不全患者；（2）心脑血管疾病患者；（3）肿瘤患者；（4）糖尿病血糖控制欠佳者；（5）阿托伐他汀过敏的患者；（6）精神病患者。本研究经温州市人民医院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 患者每晚睡前口服阿托伐他汀（美国辉瑞制药有限公司，20mg×7片）20mg降脂治疗，治疗 4周，服药期间嘱咐患者采用低脂饮食。

1.2.2 血液标本采集 治疗前后分别于清晨空腹抽取患者外周静脉血3ml用于血脂检测；治疗后同时再抽取外周静脉血3ml，置于EDTA-K2抗凝管中，放入-20℃冰箱中冷冻保存，用于ApoE基因检测。

1.2.3 血脂检测 阿托伐他汀治疗前后检测患者血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平，计算LDL-C下降率，下降率＝（治疗后－治疗前）/治疗前×100%。以LDL-C在治疗前后下降率40%为界，分为他汀治疗高疗效组56例和他汀治疗低疗效组44例。他汀治疗高疗效组男38例，女 18 例；年龄 46～89（68.26±11.42）岁；其中合并高血压10例，糖尿病15例，高血压伴糖尿病5例。他汀治疗低疗效组男 28例，女 16例；年龄 32～84（64.78±12.96）岁；其中合并高血压8例，糖尿病11例，高血压伴糖尿病4例。两组患者性别、年龄、合并高血压、糖尿病比例等比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

1.2.4 ApoE基因检测 采用实时荧光定量PCR法。样本采用全血基因组提取试剂盒（批号：20180803，苏州天隆生物科技有限公司）提取全基因组DNA，提取过程严格按照试剂盒操作说明书进行。提取DNA后用SMA-4000核酸浓度分析仪（美国Merinton公司）测定其浓度和纯度（DNA 推荐浓度为 5～15ng/μl，吸光度 A260/280为 1.8～2.0），待测 DNA-20℃保存。取待测 DNA 2μl加至荧光定量PCR反应体系中，至7500荧光定量PCR仪（美国ABI公司）进行扩增，反应条件：37℃ 10min，95℃ 5min，95℃ 15s，62℃ 60s，采集荧光信号，40 个循环。根据FAM、VIC不同荧光通道采集不同ApoE基因型荧光信号，进行结果判读。ApoE基因分型试剂盒购自武汉友芝友有限公司（批号：18092808）。

1.3 统计学处理 采用SPSS 23.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高脂血症患者ApoE基因分布 100例高脂血症患者共检出 E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4 种基因型，E2/2、E4/4 2种基因型未检出。其中E3/3基因型66例（66.0%），E3/4基因型20例（20.0%），E2/3基因型 9例（9.0%），E2/4基因型 5例（5.0%）。ε2、ε3、ε4 3种等位基因检出率：ε3 为 80.5%（161/200），ε4 为 12.5%（25/200），ε2 为7.0%（14/200）。

2.2 不同基因型高脂血症患者血脂比较 将4种检出的基因型分为 E2型（E2/3）9例、E3型（E2/4、E3/3）71例和E4型（E3/4）20例。因E3型样本量最多，属于大众基因型，故E2型基因组、E4型基因组TC、TG、HDL-C、LDL-C均与E3型基因组进行比较。结果显示，E2型基因组、E4型基因组TC、HDL-C、LDL-C水平与E3型基因组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05），其中E4型基因组TC、LDL-C水平最高，而E2型基因组TC、LDL-C水平最低。E2型基因组、E4型基因组TG水平与E3型基因组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

表1 不同基因型高脂血症患者血脂比较（mmol/L）

2.3 两组患者ApoE基因型分布情况比较 他汀治疗低疗效组E3/3基因型检出率低于他汀治疗高疗效组，E3/4基因型检出率高于他汀治疗高疗效组，两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；但两组患者E2/3基因型和E2/4基因型比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表 2。

表2 两组患者ApoE基因型分布情况比较[例（%）]

2.4 两组患者ApoE等位基因分布情况比较 他汀治疗低疗效组ε3等位基因检出率低于他汀治疗高疗效组，ε4等位基因检出率高于他汀治疗高疗效组，两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；但两组患者ε2等位基因检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 两组患者ApoE等位基因分布情况比较[例（%）]

3 讨论

ApoE早在1973年被Shore等从极低密度脂蛋白（VLDL）中分离出来[8]，是由299个氨基酸组成的多肽链，其分子量为34 145。ApoE作为配体与LDL受体、ApoE受体结合，3种异构体的受体结合能力不同，ε4等位基因的ApoE与LDL受体亲和力明显高于ε2、ε3。肝脏摄入较多含ε4等位基因的ApoE，使乳糜微粒（CM）和VLDL残粒代谢加速，提高肝细胞内游离胆固醇含量，通过负反馈调节降低肝细胞表面LDL-C受体数量，减缓LDL分解代谢，最终使血中CM、VLDL下降，TC、LDL-C升高，从而导致脂代谢紊乱[9-11]。

文献表明ApoE基因频率具有特征性分布，E3/3基因型检出率最高，ε3等位基因在3种等位基因中分布最高[12]。本研究发现100例高脂血症患者共检出E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4种基因型，其中E3/3基因型检出率为66.0%，E3/4基因型为20.0%，E2/3基因型为9.0%，E2/4基因型为 5.0%。ε2、ε3、ε4 3 种等位基因检出率：ε3为80.5%，ε4为12.5%，ε2为7.0%，与国内大部分文献报道的3个基因型分布比例大致相同[13-14]，细微差异可能与不同地区人群民族构成、饮食结构不同等因素有关。E2型基因组、E4型基因组与E3型基因组TC、HDL-C、LDL-C水平比较差异均有统计学意义，其中E4型基因组TC、LDL-C水平最高，而E2型基因组TC、LDL-C水平最低，结果与既往文献报道[15]相符。本研究还发现不同ApoE基因型人群对他汀药物的敏感性不同，E3/3基因型他汀治疗效果好，E3/4基因型他汀治疗效果差，且ε4等位基因在他汀治疗低疗效组检出率高，拥有这个基因型的人群为了血脂达标，可能需要他汀加量或加用其他降脂类药物比贝特类、烟酸类。

高脂血症是引起动脉粥样硬化的高危因素，而动脉粥样硬化是导致冠心病、脑梗死等心脑血管意外发生的主要原因。ApoE基因是目前较热门的研究对象，参与机体脂蛋白代谢，其多态性与高脂血症密切相关。通过本研究进一步证实ApoE基因分布具有特异性，ApoE基因多态性与高脂血症患者降脂疗效相关性较大，同时还发现ε4等位基因影响阿托伐他汀降低血脂的效果，E3/4基因型他汀治疗效果差。故临床治疗高脂血症患者时需密切注意ApoE不同位点突变情况，对于他汀治疗效果差的患者进行基因检测明确基因型，E3/4基因型如果使用他汀类药物降脂需要加量使用，治疗期间需注意不良反应[16-17]，指导临床合理用药。