华南紫萁组培快繁途径研究

陶佩琳 马新永 高政平

（1徐州生物工程职业技术学院，江苏 徐州 221000；2徐州市铜山区大彭镇农机服务中心）

华南紫萁普遍采用分株和孢子繁殖进行人工繁育，对环境条件要求高，且繁殖周期长，受季节限制，不能满足日益增长的市场需求。李杨介绍并提出蕨类组培存在的问题[2]；葛佳等以扇蕨茎尖为外植体，通过绿球体（GGB）途径获得了再生植株[3]；王淼等研究了不同培养基和激素配比对东北蕨菜组培快繁的影响[4]。本研究旨在探索出适宜华南紫萁离体诱导的快繁方法，为促进其高频、稳定、产业化生产提供参考依据，对缓解野生资源压力，满足市场需求，丰富生态内涵具有重要意义。

1 外植体选择及预处理

以徐州生物工程职业技术学院琴湖基地成功引种的健康华南紫萁种苗为试验材料，采集带有幼孢子囊群，未完全展开的叶片作外植体。用软毛刷轻轻去除外植体表面污垢，流水冲洗30min后，转入75%乙醇浸泡20s，0.1%氯化汞振荡清洗4min，无菌水冲洗5～7次，得华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体。

2 GGB诱导培养

将外植体首尾切除，剪成2cm小段，按照极性方向接种到B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基中，培养基添加30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，每瓶1个外植体，共接种60瓶，置于光照度2000～3000Lx，14h/d，温度23～27℃，湿度75%～85%的环境下培养。10d后观察发现，培养基表面有许多散落下来的绿色小孢子，其渐渐膨大，从基部产生不规则的突起，形成绿色球状体（GGB）。培养30d，GGB诱导率可达66.67%。

3 GGB的增殖与分化培养

将诱导出的GGB分割成直径为3～5mm的绿球体小块，重新接种到B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基中继续培养。培养30d后发现，GGB增殖膨大明显，平均直径为2.15cm，增殖率达79.8%，但是未见有不定芽分化现象产生。将增殖后的GGB接种至1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭分化培养基中，培养过程中观察到有不定芽的分化，60d产生的平均芽数可达35个，分化率达58.3%，且叶平展健壮，生长速度较快。

4 壮苗生根培养

当新生不定芽长到约2cm，带2～3片健康平展叶片时，切下单芽接种至生根培养基中进行不定根诱导。生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭。30d更换1次培养基，60d后观察有数条不定根产生，生长状况良好，生根率达100%，平均根数达3.5条。若将NAA浓度继续提高，不定芽基部有愈伤化趋势，生根的小苗长势缓慢、叶片发黄、状态不佳。

5 炼苗移栽

将高3～4cm，具3～4根健康根系的组培苗置于温度为20～25℃、光强2000Lx，12h/d的条件下进行驯化炼苗。之后小心取出，去除根部培养基，用质量分数为0.125%多菌灵溶液清洗根部，种植于泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，用薄膜和透光率30%的遮阳网覆盖，30d后统计成活率达91.8%，小苗生长健壮。

我国蕨类植物资源丰富，种类繁多，约有2600多种，占全世界的1/5以上。多数蕨类因其高雅飘逸的体态、碧绿青翠的叶色、精美的羽片图案、精致的脉序以及别致的孢子囊群排列[5]，已成为现代园林绿化行业的一个重要组成部分。本研究提出了一种以幼孢子囊群诱导，GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，初步建立了其离体再生体系，有效解决了现有繁殖方法的弊端，为优质华南紫萁商品种苗生产提供了方法和途径。