普门电化学发光仪检测降钙素原的性能分析

陈继德，汪志学

（重庆市璧山区人民医院检验科，重庆402760）

降钙素原（procalcitonin，PCT）是降钙素的前肽物质，其为116个无激素活性氨基酸构成的糖蛋白，是近年来临床日益重视的新型炎症标志物之一［1］。相较于WBC、IL-6、CRP等感染监测指标，PCT拥有较高的灵敏度和特异性，可有效地区别细菌感染和病毒感染等其他炎症过程，并可指导临床上的抗菌药物应用［2-4］。目前PCT的检测方法很多，但普门eCL8000作为国内首款电化学发光仪，其分析性能如何尚不清楚。本研究为了解普门eCL8000电化学发光仪的性能，以PCT为检测指标，从批内精密度、批间精密度、正确度（方法学比对）、线性范围、生物参考区间等方面评价其在临床应用方面的可行性与可靠性。

材料和方法

1 材料

收集本医院门、急诊和住院患者及健康体检者的肝素抗凝样本，3500r／min离心5min，分离血浆后-20℃保存备用。

2 仪器与试剂

深圳普门科技股份有限公司eCL8000电化学发光仪及其配套PCT试剂（批号为L0118001，有效期至20190415）。比对前做好项目校准，检测期间做好室内质控。

3 方法

3.1 批内精密度和批间精密度 根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）《EP5-A2定量测量方法的精密度性能评价——批准指南》文件要求，选取2个浓度水平的样本分装5管，每天解冻1管，连续5天检测，每一样本重复测试10次，计算标准差（SD）和偏倚（CV），判断是否低于行业标准。

3.2 正确度（方法学比对） 根据CLSI《EP9-A2用患者样本进行方法学比对及偏倚评估——批准指南》文件要求，先对实验数据进行方法间离群值检验分析，再以罗氏电化学发光检测系统Cobas e601为参考，用普门试剂与罗氏试剂分别检测40例不同浓度的相同血清样本PCT，样本浓度覆盖医学决定水平，并尽可能在线性范围内均匀分布，计算结果偏倚（Bias）与可接受标准的比较，并对两方法进行线性拟合分析。

3.3 线性范围 根据CLSI《EP 6-A定量测量方法的线性评价——统计方法》文件，用降钙素原（PCT）试剂盒测试接近检测上限的高值人血清样本（H）与低值样本（L），按H：L不同比例（1∶0、1∶4、2∶3、3∶2、4∶1、0∶1）混合成6个梯度浓度样本，每个样本重复测定3次，计算均值，再用平均斜率的方法验证线性范围。

3.4 生物参考区间 收集20份健康人的标本，用降钙素原（PCT）试剂盒连续上机测定。根据CLSI C28-A3c《临床实验室如何定义、建立和验证参考区间》方案，至少90%的检测值在参考范围内为合格。

4 统计学处理

本研究数据均用Microsoft Office Excel 2016软件进行处理与分析。

结 果

1 批内精密度

通过对PCT 2个不同浓度水平样本检测后的不精密度CV值分析，参考《YY／T 1175-2010肿瘤标志物定量测定试剂（盒）（化学发光免疫分析法）》标准，以变异系数CV≤7.5%为判定标准。本研究结果显示CV值均低于标准，提示批内精密度可以接受。结果如表1所示。

表1 2个浓度水平样本检测的批内精密度

2 批间精密度

根据CLSI《EP10-A2定量临床试验方法的初步检验批准指南》文件要求，以变异系数CV≤10.0%为判定标准。本研究结果显示批间不精密度CV值均低于标准，提示批间精密度可以接受。结果如表2所示。

表2 2个浓度水平样本检测的批间精密度

3 正确度（方法学比对）

本研究共测试40例血清样本，首先对实验数据进行方法间离群值检验，经统计分析，本研究离群样本0个，离群率0%。再以罗氏检测系统测定浓度为横坐标，以普门检测系统测定浓度为纵坐标作散点图，进行线性拟合，得到相关系数。本研究验证结果为相关系数R2＝0.9977，斜率K＝1.0014，数据如下图所示。以罗氏系统检测结果为参考，计算普门仪器检测结果的偏倚，结果如表3所示，最大偏倚为14.29%。美国CLIA′88《能力比对检验的分析质量要求》并没有规定PCT的允许误差（TEa），根据卫生部室间质评标准设定TEa＝30%，本实验最大偏倚≤1／2TEa，提示正确度符合要求。

图1 普门和罗氏系统检测PCT结果比对分析

表3 罗氏e601与普门eCL8000检测PCT结果比较

4 线性范围

用降钙素原（PCT）试剂盒测试接近检测上限的高值人血清样本与低值样本，按要求混合成6个梯度浓度样本并测试，结果显示，线性相关系数R2＝0.9993，斜率K＝1.0131。线性相关系数R2、斜率均满足实验要求，如图2所示。

图2 PCT预期值与测量均值相关性分析

5 生物参考区间

本研究经测试20例健康人血清，其中20例测试值在0～0.05ng／mL范围内，0例大于0.05ng／mL，有95%的测量值在参考范围内，测试结果合格，厂家提供参考区间可接受。

讨 论

临床检验结果的质量与患者的诊治及预后紧密相关，检验结果必须准确、可靠，否则会影响临床医生的判断。而检验结果与其检测系统有着密不可分的关系。根据《医疗机构临床实验室管理办法》及ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》，在检测系统应用临床前，应评估所用方法和程序是否满足临床需要［5-6］。定量检测分析是评价仪器工作性能的主要方式，是确保有效质量控制的前提。通过对精密度、准确度等性能特征的分析，不仅反映分析方法的性能，也反映了分析仪器的状态、室内质控、操作规程及人员能力等影响检测中质控要求的各因素。因此，判断仪器性能是否可接受是临床应用前必不可少的工作。

在临床工作中，PCT常为急诊检验项目，其浓度上升是细菌性炎症和真菌感染的特异性指标，也是脓毒血症的灵敏指标，PCT检测结果能为临床医生及时提供是否使用抗菌药物诊断依据［7］。为保证质量，本研究对普门检测系统进行分析性能验证，包括精密度、正确度、线性范围、参考区间等，观察其性能是否达到标准。

精密度既是临床检验的方法评价，也是仪器性能评价的重要指标之一，能反映分析过程中随机误差的大小［8］。本研究结果显示，不论是批内精密度还是批间精密度，其不精密度的CV值均低于标准，提示普门eCL8000符合实验室要求。正确度指由测试结果与接受参照值间的一致程度。通常以偏倚来表示，偏倚小说明正确度高［9］。本研究结果显示最大偏倚低于1／2TEa，且普门仪器检验结果与罗氏检测系统结果的相关性非常高（R2＝0.9977），说明与罗氏检测系统相比，普门仪器的结果能够被临床接受。但表3也呈现正偏倚数据较多（85%），提示检测系统存在一定的系统误差，可能是两种不同检测系统的差异造成的。线性范围反映的是一种检验能力，在一定测量区间内可提供测量结果与样本中测量物的量值直接成比例［10］。本研究中普门检测系统对不同浓度样本的检测相关系数R2＝0.9993，表明检测范围内线性良好。生物参考区间又称为参考范围、正常范围等，是参考值分布的中间95%区间，根据CLSI C28文件设计验证方案，普门eCL8000发光仪有95%的测量值在参考范围内，测试结果合格，说明本仪器检测PCT的参考区间可接受。

总之，根据CLSI的各项文件要求来看，普门eCL8000电化学发光仪具有良好的精密度，与罗氏检测系统相比，正确度能够接受，线性范围及参考区间等与均厂家提供的资料相一致，均达到厂家声称的性能标准，符合临床质量要求。同时，普门eCL8000电化学发光仪操作简单，能快速检测PCT，可以满足临床早期诊断和及时判断的需求。