国产全自动化学发光测定仪检测糖类抗原242和糖类抗原50的分析性能验证

满 霞，郑 进

（1.华东疗养院医学检验中心，江苏 无锡214065；2.新产业生物医学工程股份有限公司，深圳518000）

胰腺癌是常见的消化系统肿瘤之一，由于胰腺癌早期诊断较困难，一旦发现多为晚期，切除率低，预后差，死亡率高，故通过肿瘤标志物检测以获得早期诊断，是目前临床关注的焦点。糖类抗原242（CA242）是一种唾液酸化的糖链抗原，是一种新型的肿瘤标志物，其升高在恶性肿瘤患者中明显高于良性病变患者及正常体检者，而且以胰腺癌最高，其次为肠癌、胃癌［1］。糖类抗原50（CA50）是一种唾液酸脂和唾液酸糖蛋白为主的广谱肿瘤相关抗原，主要用于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌等的辅助诊断，其中胰腺癌患者升高最明显［2］。CA50与CA242联合检测可使诊断胰腺癌的敏感性达到95.0%，CA50与CA242联合检测有助于增强对胰腺癌的诊断，可能在胰腺癌的早期诊断中具有重要的意义［3］。中国合格评定国家认可委员会（CNAS）将ISO 15189作为我国医学实验室的认可准则，并开始国内医学实验室的认可工作。其中，对仪器进行性能验证是ISO 15189实验室认可的要求之一，在本院检验科ISO 15189实验室认可中，对深圳新产业生物医学工程股份有限公司研发的原装配套CA242、CA50检测系统的主要分析性能进行了验证。

材料与方法

1 样本来源

来本院行健康体检的体检者血清样本，外观无溶血、黄疸和脂血。空腹静脉血采集后，室温静置，离心，分离血清立即用于分析，不能立即分析的血清样本分装后保存在-20℃冰箱。

2 仪器与试剂

深圳新产业生物医学工程股份有限公司生产的全自动化学发光测定仪Maglumi 4000 Plus（以下简称深圳新产业“Maglumi 4000 Plus”），试剂、标准品及质控品均为本仪器原装配套试剂、标准品及质控品，并全部使用同一批号，CA242检测试剂、标准品及质控品批号均为06118073101，CA50检测试剂、标准品及质控品批号均为03718062202。

2 方法

用深圳新产业Maglumi 4000 Plus原装配套质控品进行常规室内质控检测，室内质控在控后进行下列验证实验。

2.1 精密度验证 批内精密度验证：使用血清制备的低、高2个浓度样本，连续重复测定每个样本20次，记录每个样本20次测定结果，分别计算均值、标准差及变异系数（CV）；批间精密度验证：使用血清制备的低、高2个浓度样本，每天测试2批，每批测定1次，两批间隔时间2小时以上，连续测定10天，记录每个样本20次测定结果，分别计算均值、标准差、变异系数（CV）。精密度以不超过厂家声明为判断标准。

2.2 正确度验证 参考CLSI EP15-A［4］文件，以卫生部临检中心提供的室间质量评价控制品为定值参考物质，对卫生部临床检验中心2019年6月发放的5个批号的室间质控品进行检测，每个批号连续检测2次，计算均值，测量均值与靶值和可接受限进行比对。

2.3 线性范围验证 按照CLSI EP6-A［5］文件要求，收集本院体检者血清样本，选取试剂说明书测量范围低限附近样本（CA242：2.00IU／mL，CA50：7.00IU／mL）为低值（L）样本，选取试剂说明书测量范围高限附近样本（CA242：200.00IU／mL，CA50：500.00IU／mL）为高值（H）样本，CA242、CA50低值样本和高值样本均使用原装配套试剂自带的标准品按照厂家说明书规定的方法定值，CA242标准品定标点1浓度为10.000 IU／mL，定标点2浓度为94.574IU／mL；CA50标准品定标点1浓度为7.955 IU／mL，定标点2浓度为250.752IU／mL。将高值（H）样本和低值（L）样本按照6L、5L＋1H、4L＋2H、3L＋3H、2L＋4H、1L＋5H、6H的比例进行混合配制，充分混匀形成系列验证样本，每个样本作3次重复，计算均值和变异系数（CV）。每个均值即为各个浓度的实测值，将得到的实测值和预期值用直线回归统计方法对数据进行处理，得到直线回归方程Y＝b X＋a和相关系数R2，若0.97≤b≤1.03，a趋于0，且R2≥0.95，则可以接受。

2.4 临床可报告范围验证［6］选取分析测量上限附近血清样本（CA242：172.60IU／mL，CA50：423.10IU／mL），使用生理盐水进行倍比稀释，如1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，依据稀释比例计算出各个稀释浓度的预期值，测定稀释样本，每个样本测定2次，以均值表示它们的检测值，比较各个稀释样品的检测值和预期值，分别计算比值R＝检测值／预期值，如110%≥R≥90%，定为可接受限，低于90%或者高于110%相应的稀释度则为不可接受稀释度。

2.5 生物参考区间验证 参考CLSI C28-A2［7］文件，选取合格参考个体20名，按实验室操作程序，采集处理分析样本，将20个样本检验结果与参考区间比较，如超出参考区间比例小于5%，则通过验证。

3 统计学处理

采用SPSS 16.0统计学软件对实验数据进行统计分析。

结 果

1 精密度验证结果

CA242批内精密度和批间精密度CV均小于厂家声明，CA50批内精密度和批间精密度CV均小于厂家声明。验证通过。见表1、表2。

表1 批内精密度验证结果

表2批间精密度验证结果

3 正确度验证结果

CA242的5个不同批号的室间质控品测量值与靶值的偏倚为5.25%～11.74%，CA50的5个不同批号的室间质控品测量值与靶值的偏倚为6.53%～12.47%，两个项目的偏倚均在CLIA′88规定的允许误差范围内。验证通过。见表3。

表3 正确度验证结果

4 线性范围验证结果

CA242浓度范围在1.78～195.00IU／mL线性回归方程为Y＝0.9854X-1.1027，相关系数R2为0.9995；CA50浓度范围在7.09～498.27IU／mL线性回归方程为Y＝1.002X-0.627，相关系数R2为0.9999。见表4、表5。

表4 线性范围验证实验结果（CA242）

表5 线性范围验证实验结果（CA50）

5 临床可报告范围验证结果

CA242和CA50稀释16倍的R值均在90%～110%之间，符合判断要求；CA242的临床可报告范围上限可扩展至3120.00IU／mL，CA50的临床可报告范围上限可扩展至为7972.32IU／mL。见表6。｀

表6 CA242和CA50各个稀释样本的R（%）值

6 生物参考区间验证结果

20名健康体检者检测CA242的浓度范围为0.97～10.38IU／mL，100%的结果在厂家提供的生物参考区间（＜20 IU／mL）范围内；20名健康体检者检测CA50的浓度范围为0.50～18.62IU／mL，100%的结果在厂家提供的生物参考区间（＜25IU／mL）范围内。

讨 论

ISO 15189：2012［8］规定了中国合格评定国家认可委员会（CNAS）对医学实验室质量和能力进行认可的专用要求，包含了医学实验室为证明其按质量管理体系运行、具有相应技术能力并提供正确的技术结果所必须满足的要求。其中5.5.1.2检验程序验证要求未经修改而使用的已确认的检验程序在常规使用前，应经过实验室的独立验证。实验室应从制造商或方法开发处获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。实验室进行的独立验证，应通过获取客观的证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。验证过程证实的检验程序的性能指标，应与检验结果的预期用途有关。检验程序的性能指标包括：测量正确度、测量准确度、测量精密度、测量不确定度、分析特异性、分析灵敏度、检出限和定量限、测量区间、诊断特异性和诊断灵敏度。CNAS-CL38：2012［9］要求检测方法和程序的分析性能验证内容至少包括正确度、精密度和可报告范围。美国临床实验室修正案（CLIA′88）文件中明确规定使用未经修改的完整检测系统的实验室只需完成4个验证实验，即准确度、精密度、可报告范围及生物参考区间验证实验。在本科室申报ISO 15189实验室认可中，对深圳新产业Maglumi 4000 Plus全部4个检测项目进行了性能验证，本文以CA242和CA50为例，阐述其精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围和生物参考区间的验证过程。

精密度是指在规定条件下，对同一或类似被测对象重复测量所得示值或测量值间的一致程度［10］。精密度通常用不精密度程度以在规定测量条件下的标准偏差、方差或变异系数表示。精密度性能是检测系统的基本分析性能之一，也是其他方法学评价的基础，目前临床医学实验室对样本只做单次测量便发出报告，这种情况下精密度更是至关重要。本文参考CLSI EP5-A2［11］文件，进行了CA242和CA50批内精密度验证实验；批间精密度验证不同于CLSI EP5-A2文件验证方案，在考虑人力、物力、财力的基础上，结合科室具体实际，采用2×1×10方案，在相对较短的时间内完成了实验。精密度验证结果显示，CA242批内精密度和批间精密度CV均小于厂家声明，CA50批内精密度和批间精密度CV均小于厂家声明，表明厂家声称的精密度可靠。

正确度定义为无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度［10］。正确度通常用偏倚表示。正确度性能是检测系统或方法重要的分析性能之一，是分析测量范围（线性范围）及生物参考区间验证等实验的基础。目前，关于正确度评价有很多种方案，本文参考CLSI EP15-A文件进行正确度验证实验，包括两种方案：使用患者样本和使用参考物质。本文采用卫生部临床检验中心2019年6月发放的5个不同批号的室间质控品进行正确度验证，结果显示CA242的5个不同批号的室间质控品测量值与靶值的偏倚为5.25%～11.74%，CA50的5个不同批号的室间质控品测量值与靶值的偏倚为6.53%～12.47%，两个项目的偏倚均在CLIA′88规定的允许误差范围内。

线性范围即分析测量范围，指样本未经任何处理（稀释、浓缩或其他预处理），由检测系统直接测量得到的可靠结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的测量值与其实际浓度（真值）呈线性比例关系［12］。线性范围验证实验结果显示，CA242的浓度范围在1.78～195.00IU／mL的线性回归方程为Y＝0.9854X-1.1027，相关系数r2为0.9995，说明组成回归线的所有数据点紧密贴近回归线，预测值和实测值之间相关性极好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）；CA50的浓度范围在7.09～498.27IU／mL的线性回归方程为Y＝1.002X-0.627，相关系数r2为0.9999，说明组成回归线的所有数据点紧密贴近回归线，预测值和实测值之间相关性极好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）。表明采用深圳新产业Maglumi 4000 Plus检测CA242的浓度范围在1.78～195.00IU／mL成线性，和厂家声明的线性范围（CA242：2.00～200IU／mL）基本一致；检测CA50的浓度范围在7.09～498.27IU／mL成线性，和厂家声明的线性范围（CA50：10.00～500IU／mL）基本一致。

临床可报告范围是指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其他预处理［12］。本文研究结果显示CA242和CA50稀释16倍的R值均在90%～110%之间，符合判断要求；CA242的临床可报告范围上限可扩展至3120.00IU／mL，CA50的临床可报告范围上限可扩展至为7972.32IU／mL。本院是健康体检单位，CA242和CA50特别高浓度的检测结果罕见，稀释倍数只进行到1∶16，已能够满足临床需求。

参考区间是两参考限之间的区间，指参考下限到参考上限的区间，通常指中间95%区间［13］。由于地理、人种、性别及年龄差异，各实验室应建立自己的生物参考区间。本文参考CLSI C28-A2文件，选取无系统疾病、表面健康的体检者20名，其中男10名，年龄在25～72岁之间；女10名，年龄在27～62岁之间，对深圳新产业Maglumi 4000 Plus检测CA242和CA50的生物参考区间进行验证。研究结果显示20名健康体检者检测CA242的浓度范围为0.97～10.38IU／mL，100%的结果在厂家提供的生物参考区间（＜20 IU／mL）范围内；20名健康体检者检测CA50的浓度范围为0.50～18.62IU／mL，100%的结果在厂家提供的生物参考区间（＜25IU／mL）范围内。说明厂家提供的CA242和CA50生物参考区间是可以接受的，可直接使用。

选择性能良好的检测系统是保证病人检验结果可靠性的前提。通过本文研究，深圳新产业Maglumi 4000 Plus检测CA242和CA50的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间均和厂家声明一致，能够保证检测结果的准确，满足临床检验的需要。同时，Maglumi 4000 Plus有144个样本位，25个试剂位，每小时达到280个测试，并且样本和试剂可连续加载，能够随机、批量测试，大大提高了检测效率，而且国产试剂较进口试剂价格低廉，能够降低医疗成本，可以在临床实验室推广使用。