相思藤生药学研究

张春花, 郭宏伟, 黄仁彬, 朱 丹*

(1.广西壮族自治区卫生计生委生殖中心药剂科,广西南宁530021；2.广西医科大学药学院,广西南宁530021)

相思藤,中药大辞典记载其为豆科相思子属植物相思子Abrus precatorius L.的干燥茎叶［1］,又名土甘草、相思子藤,主要分布于广西、广东、福建等地,其性凉,味甘,入肺、肝、肾三经,有清热解毒、消炎利尿、润肺护肝之功效,在民间主要用于咽喉肿痛、肝炎、肺热咳嗽、乳痈、疮疖等病症的治疗［2-3］,是广东凉茶原料之一。相思子中富含三萜皂苷类成分,如相思子三萜苷A、B、C、D,相思子原酸,环菠萝蜜烷苷等,此外还富含黄酮类、皂苷类、生物碱类［4-7］。课题组前期研究发现,它对酒精性肝中毒具有一定保护作用［8-9］。

然而,市场上相思藤来源混乱,混淆品多,常见的有鸡骨草 (广州相思子) Abrus cantoniensis Hance、毛相思子Abrus mollis Hance、小叶三点金草Desmoidum microphyllum(Thunb.) DC.等［10］。目前,相思子全株中研究较多的为种子［11-12］,对相思藤的关注甚少,目前尚未建立质量标准。为了保证用药安全,更好地辨别真伪,本研究对相思藤进行了较为系统的生药学研究,包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱,以及水分、灰分和浸出物检查,并制订合理的限度,以期为其鉴定和质量评价提供依据。

1 材料

1.1 仪器 BH-2 生物显微镜(日本奥林巴斯公司)；Leica RM 2245 轮转式切片机(德国徕卡公司)；LY-HPCCD 万能视频成像装置(成都励扬精密机电有限公司)；AK-400A 摇摆式粉碎机(浙江奥力集团有限公司)； HD-330 系列摊片烤片机(湖北慧达仪器有限公司)；YP2002 电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；HP25DHS 恒温恒湿箱(武汉瑞华仪器设备有限责任公司)；马弗炉(上海沪载实验仪器有限公司)；KQ-100DE 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；RRH-200 粉碎机(上海缘沃工贸有限公司)。

1.2 试剂 β-谷甾醇对照品(中国食品药品检定研究院,批号110851-201206)；无水乙醇(广东光华科技股份有限公司,批号20140425)；甲醇(广东光华科技股份有限公司,批号20141219)；石油醚 (广东光华科技股份有限公司, 批号20140504)；乙酸乙酯(广东光华科技股份有限公司,批号20121224)；环己烷(天津市博建化工有限公司,批号20140123)；乙酸丁酯(广东光华科技股份有限公司,批号20130616)；松节油(广东光华科技股份有限公司,批号20101206)；其他试剂均为分析纯。

1.3 材料 12 批相思藤收集于广西灵山等地,具体见表1,经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为豆科植物相思子Abrus precatorius L.的干燥茎、叶。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

2 方法与结果

2.1 性状鉴别 茎枝呈圆柱形或类方柱形,直径0.1～0.3 cm；表面淡黄色至灰黄色,具细纵纹,体轻,质软,易折断,断面皮部薄,黄白色,木部浅黄白色,中心有宽广的髓部；叶互生,偶数羽状复叶,小叶片卵形,长3 ～5 cm,宽1 ～3 cm,全缘,叶端急尖,上表面黄绿色,较光滑,下表面淡黄绿色,有稀疏非腺毛；纸质；气微,味甘回凉。

2.2 显微鉴别

2.2.1 茎横切面 木栓层为数列扁平细胞；皮层较窄,细胞扁平形、类圆形,壁较薄；中柱鞘纤维3～5 列,与石细胞群相间呈环状分布；韧皮部由韧皮纤维和韧皮薄壁细胞组成,韧皮纤维细胞壁较薄,微木化；木质部约占茎的1/2,木射线细胞1～4 列,长方形,导管单个或几个相连呈放射状分布,直径36 ～156 μm；髓部薄壁细胞圆形或椭圆形,细胞壁较厚,木化；中柱鞘、木质部和髓部的薄壁细胞内含草酸钙方晶。见图1。

图1 茎横切面构造图（×400）Fig.1 Transection feature of stems（×400）

2.2.2 叶横切面 上下表皮细胞1 列,圆形或椭圆形,长短不一,上下表皮均有非腺毛,有的折断留下断痕,非腺毛单细胞,长约75 ～165 μm；栅栏组织细胞1 列,圆柱形,长约10 μm；海绵组织细胞不规则形,排列疏松；中脉维管束扇形,木质部导管放射状排列,韧皮部较薄,周围有1 ～6 列中柱鞘纤维围绕；上表皮中脉略有凸出,下表皮中脉凸出。见图2。

图2 叶横切面构造图（×400）Fig.2 Transection feature of leaves（×400）

2.2.3 粉末特征 粉末为淡黄色,纤维成束或分离,纤维壁较薄,有些纤维细胞中含方晶,直径15～30 μm；非腺毛单细胞,长约100 ～170 μm；草酸钙方晶多面形,直径约15 μm；导管多为具缘孔纹导管,直径14～36 μm；叶上表皮细胞波状弯曲,叶下皮细胞波状弯曲,气孔平轴式,直径约20 μm。见图3。

图3 相思藤粉末特征（×400）Fig.3 Powder feature of A.precatorius（×400）

2.3 薄层鉴别

2.3.1 薄层条件优化［13-16］

2.3.1.1 提取溶剂 用甲醇、95%乙醇、氯仿作为提取溶剂,比较β-谷甾醇提取率。结果,确定甲醇为提取溶剂。

2.3.1.2 提取方法 比较分析超声法、回流法、索氏提取法对β-谷甾醇的提取率。结果,确定为超声法。

2.3.1.3 展开系统 采用石油醚-乙酸乙酯(3 ∶1)、环己烷-乙酸丁酯-石油醚(3 ∶1 ∶1)、环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2) 作为展开系统。结果,确定为环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2)。

2.3.1.4 薄层板 对比硅胶G 预制板、硅胶H 预制板、高效硅胶G 薄层板的分离效果,发现三者均可使主斑点得到有效的分离,但采用硅胶G 作为吸附剂时斑点无拖尾,更集中,颜色更清晰,故选择硅胶G 薄层板。

2.3.1.5 显色剂 以氨蒸气、10%硫酸乙醇溶液、1%磷钼酸乙醇溶液作为显色剂,通过对比显色效果发现三者均能显示主斑点,但1%磷钼酸乙醇溶液显色更清晰,斑点更集中,故选择该显色剂。

2.3.1.6 点样方式 比较圆点、条状的分离效果,结果表明圆点显示的主斑点更集中,大小适中,故选择该点样方式。

2.3.2 样品检测

2.3.2.1 对照品溶液制备 精密称定β-谷甾醇对照品4.8 mg,置于5 mL 量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀溶解,即得。

2.3.2.2 供试品溶液制备 取药材粉末(过3 号筛)1 g,置于锥形瓶中,加入20 mL 甲醇,超声处理1 h,滤过,滤液浓缩至1 mL,即得。

按2015 年版《中国药典》 四部薄层色谱法(通则0502)［13］,取供试品、对照品溶液各5 μL,点于来自同一硅胶G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2) 作为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%磷钼酸乙醇溶液,晾干,显色,在日光下观察,发现供试品色谱中在与对照品相应位置上显相同颜色的斑点。按上述条件对12 批药材进行薄层鉴别,结果均能检出特征成分,斑点清晰,分离度较好,见图4。

图4 12 批样品薄层色谱图Fig.4 TCL chromatogram of twelve batches of samples

2.4 检查

2.4.1 水分 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则0832 第四法)［17］测定。结果见表2。

表2 12 批样品水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定结果Tab.2 Determination results of water，total ash，acid insoluble ash and extractum of twelve batches of samples

2.4.2 总灰分、酸不溶性灰分 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则2302)［17］测定。结果见表2。

2.4.3 浸出物 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,以70%乙醇为溶剂,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则2201) 项下的热浸法［17］测定。结果见表2。

3 讨论

相思藤在两广地区为民间常用草药,容易与同属其他药材混淆［18］,尽管使用广泛,但作为地方用药尚未建立质量标准,本实验通过对其进行生药学研究,以期为相关鉴别和质量标准的制订提供依据。在显微鉴别中发现,相思藤茎横切面中,中柱鞘纤维与石细胞群相间呈环状分布；叶横切面上下表皮均有非腺毛,非腺毛为单细胞；粉末中纤维成束或分离,有些纤维细胞中含方晶,非腺毛单细胞,草酸钙方晶多面形,气孔平轴式,以上特征可作为相思藤的显微鉴别依据。

本实验建立了相思藤中β-谷甾醇TLC 检测方法,比较了不同溶剂、提取方式、展开系统、薄层板、显色剂点样方式的检测结果,确定最佳色谱条件。在优化条件下,12 批样品均能很好地显色,并且斑点清晰,大小适中,表明该方法适用性良好。根据水分测定结果,参照2015 年版《中国药典》 四部(通则0832、2302、2201)［17］,建议规定相思藤水分不超过15%,总灰分不超过5%,酸不溶性灰分不超过1%；按照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定,用70%乙醇作为溶剂时,浸出物不少于15%。