不同温度、保湿时间对西兰花主要采后病害发生的影响

2019-08-07彭光华赵安娜涂贻轩严守雷李洁王清章

长江蔬菜 2019年14期

彭光华，赵安娜，涂贻轩，严守雷，李洁，王清章

（1.西藏自治区产品质量监督检验所，拉萨，850000；2.华中农业大学食品科学技术学院；3.湖北省水生蔬菜保鲜加工工程技术研究中心）

西兰花（Brassica oleraceaL.var.botrytisL.）是十字花科芸薹属甘蓝种的一个变种，深受人们喜爱，在世界范围内被广泛食用[1]。采后极易出现擦伤等情况，造成微生物感染，导致采后病害发生，对西兰花的运输、贮藏有极大影响。西兰花采后病害的发生与其环境有很大关系，西兰花采后衰老黄化既有其内部原因，如采后呼吸跃变和营养水分的缺乏，也有来自外部的压力，如病原真菌的侵染[2]。被病原菌感染后的西兰花表面会出现霉点或斑纹，随后会迅速衰老和黄化，严重影响西兰花的外观和品质[3]。调查表明，西兰花贮藏期病害主要有菌核病、细菌性腐烂及霜霉病等[4]。贮藏的温度和湿度会影响西兰花货架期，有研究表明，西兰花贮藏温度在20℃以上时，其货架期只有1~3 d[5]。郭香风等[6]研究表明，与室温相比，4℃贮藏西兰花能延缓其褪绿、黄化和褐变，将货架期延长6 d；将采后的西兰花直接在0℃或5℃冷藏，贮藏期分别达到了34.7 d和17.4 d[7]。说明适当的温度可以有效抑制病原菌的侵入，延缓西兰花的衰老、萎蔫和黄化。本文将西兰花在不同的温度条件下保湿不同时间，通过湿培养观察发病情况，探讨不同温度、不同保湿时间对西兰花采后病害的控制效果。

1 材料与方法

1.1 试验材料

西兰花：购于武汉市中百超市。

供试菌株：Alternaria alternata菌株WH1-21和Fusarium incarnatum菌株WH5-1，来自武汉市采集的西兰花分离的主要致病菌链格孢菌和镰刀菌。

试验时间：2016年12月至2017年1月。

1.2 试验方法

①菌碟接种选择致病力较强的A.alternata菌株WH1-21和F.incarnatum菌株WH5-1进行接种。2种菌株分别先在PDA平板上培养5 d，然后用打孔器打取直径为6 mm的菌丝块，用无菌挑针分别接种至新鲜无感染的西兰花茎切面的正中央，将接种好的西兰花花茎放置在铺有吸水纸的直径为90 mm的培养皿中并用保鲜膜封好，分别放在 5、10、15、20、25、30℃的温度下，并设置 0、12、24、36、48、72 h等不同时间，湿度均为90%。在塑料盆中摆放整齐，并置入设置不同温度的培养箱中，每个处理设置3个重复并设置空白对照，保湿培养观察发病情况，3 d后测量病斑直径。

②孢子液接种选择致病力较强的A.alternata菌株WH1-21和F.incarnatum菌株WH5-1进行孢子液接种。首先制备孢子液，将菌株在PCA培养基上置于22℃、16 h光照8 h黑

暗的培养箱中培养；5 d后在超净工作台中用无菌棉签将表面菌丝刮掉，并用无菌水冲洗干净残余菌丝，吹干表面水分，盖上盖子不封口置于培养箱培养4～5 d产孢；产孢结束后用无菌水洗涤菌落表面的孢子，4层纱布过滤，将孢子滤液收集在小烧杯中，用血球计数板测定孢子浓度，浓度调节至1×106CFU/mL，装入小喷壶用于接种。

选取新鲜无感染的西兰花分成大小一致的小花球，用30%的酒精预处理2 min后甩干，置于铺有吸水纸的小烧杯中，将喷壶内制备好的孢子液喷接1 mL至小花球表面，用保鲜膜封住烧杯口，分别在 5、10、15、20、25、30℃ 的温度下放置 0、12、24、36、48、72 h，湿度保持 90%，3 d 后观察其发病情况并测量发病面积。

表1 不同温度不同保湿时间下菌株WH1-21接种西兰花茎切面病斑直径

图1 不同温度不同保湿时间下菌株WH1-21接种西兰花茎切面发病情况（3 d）

2 结果与分析

2.1 WH1-21菌丝块接种西兰花茎切面发病情况

由表1和图1可以看出，西兰花茎切面在5、10℃条件下接种菌株WH1-21均不发病，在5℃下组织状态良好，即使不采取保湿措施也无明显失水现象，但在10℃条件下，西兰花茎在保湿时间0～24 h有轻微失水现象，24 h以上的则无明显失水现象且无病斑产生；在15℃时，花茎发病病况整体较轻，但病斑直径随着保湿时间的延长而增大，在保湿72 h时病斑直径达到最大，为11.3 mm；在20℃时，未经保湿处理的（保湿时间0 h）出现了失水现象，保湿时间越长，花茎发病情况越严重，保湿48 h内病斑直径不超过20.0 mm，保湿时间达72 h时病斑直径增至29.7 mm。20~30℃，保湿时间0～12 h下，随着温度的升高茎切面失水越来越严重，病斑直径较小，说明病原菌侵染组织需一定的湿度；保湿时间24~72 h，西兰花茎切面上的病斑直径随着保湿时间的增加而增大，在30℃下保湿72 h后整个块茎几乎完全发病，病斑直径达28.7 mm，说明病原菌的致病力在适宜的温度下随着保湿时间的增长而增强。

2.2 WH1-21孢子液接种西兰花花球发病情况

由表2和图2可以看出，西兰花花球在温度条件为5℃和10℃时，于不同的保湿时间培养下均不发病，且花球上的花茎依然紧实，色泽保持良好，这是可能由于没有达到孢子的萌发温度，孢子没有萌发无法侵染花球。15℃下，花球保湿48 h以内未发病，但花蕾松散且色泽已稍暗沉，保湿72 h后，可观察到花球表面有少

量孢子萌发产生菌丝侵染组织，但发病情况较轻，发病表面积百分比仅为6.0%。在20℃条件下，花球在保湿0～36 h时不发病，但西兰花花蕾松散且出现黄化现象；当保湿时间达到48 h时，喷洒在花球上的孢子液开始萌发，西兰花花球发病较严重，发病面积近35%，保湿72 h增至51.2%。在25℃时，花球保湿时间为36 h开始发病，保湿时间越长，花球发病越严重，48 h时发病面积近70%，72 h时发病面积占比达到97.5%。在30℃时，花球保湿24 h即开始发病，发病程度随着保湿时间的延长而加重，但在保湿时间为48 h和72 h时，发病表面积百分比均低于25℃时，说明过高的温度不利于菌丝在花蕾上的生长和侵染。

表2 不同温度不同保湿时间下菌株WH1-21接种西兰花花球发病表面积

图2 不同温度不同保湿时间对菌株WH1-21接种西兰花花球致病力的影响

2.3 WH5-1菌丝块接种西兰花茎切面发病情况

由表3和图3可以看出，西兰花茎切面在5℃和10℃，于不同的保湿时间下几乎无明显发病症状。在15℃时，菌丝块开始侵染西兰花块茎，但保湿时间从0~36 h的病斑直径相差不大，在保湿72 h时病斑直径最大，为13.7 mm。在20℃，保湿时间达到72 h时病斑直径增大至22.3 mm。在25℃和30℃条件下培养的西兰花块茎，保湿时间较短时，组织容易失水干瘪不利于病原菌侵染，随着保湿时间的延长，病斑直径几乎成直线增长，在25℃下保湿72 h后病斑直径达到39.7 mm，病原菌在组织表面产生白色菌丝并侵染到组织内部，去除表面浓密的白色菌丝，可以看到西兰花块茎内部组织软化腐烂，并发出恶臭味。

2.4 WH5-1孢子液接种西兰花花球发病情况

由表4和图4可以看出，在西兰花花球上接种的菌株WH5-1孢子液，在5℃和10℃的不同保湿时间条件下，均没有萌发，西兰花花蕾依然保持紧实且没有黄化。在15℃条件下，保湿时间在0~48 h内，均未发现孢子萌发侵染现象，当保湿时间达到72 h时，花球上少量孢子萌发产生菌丝侵染花球，并且色泽没有10℃下的好，但整体发病情况较轻，发病比为5.4%。20℃时，花蕾在保湿时间0～24 h时未表现出发病，但花球已经开始松散，当保湿时间达到36 h时，花球表面开始有白色菌丝产生，发病表面积百分比为6.4%，保湿时间为48 h时发病表面积百分比显著增大至36.6%，保湿72 h后病斑面积增至67.4%。在25℃和30℃时，孢子保湿时间在0～24 h时基本未萌发，花蕾开始黄化，失水枯萎导致品质严重下降，在保湿时间达到36 h和48 h时，孢子大量萌发产生菌丝侵染花蕾，致病力显著增强，花球发病面积增大，在25℃下保湿时间48 h时发病表面积百分比为63.7%，当保湿时间增至72 h后发病表面积百分比最大，为90.2%，表面有白色菌丝覆盖，内部组织有褐变腐烂现象。

3 结论与讨论

由试验结果可知，在低温5℃和10℃条件下，0~72 h内，西兰花接种致病菌株后均未发病。适宜温度下，菌株WH1-21侵染花球时，孢子大量萌发，产生褐黑色菌丝覆盖花球表面，进而深入组织内部，严重的延伸至花茎，导致花茎产生黑斑，并且在25℃温度条件下发病最为严重，这与刁小琴等[3]的研究结果稍有差异，说明相同属下的不同小种的最适生长温度有差异。而菌株WH5-1在花球上的孢子萌发产生白色菌丝，菌丝慢慢深入组织内部利用营养物质快速生长，进而导致组织细胞分解坏死而腐烂变质。20℃、25℃和30℃条件下有利于病原菌的侵染，虽然20℃条件下花球上的菌丝比30℃条件下的浓密，但由于温度过高会加速花球自身的组织代谢，造成花球因叶绿素分解而黄化，组织内细胞失水而萎蔫，并且由于病原菌的侵染更易腐烂，这与陈慧[8]的研究结果相符。