水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物残留量的LC-MS/MS测定法

周刚

（邢台市食品药品检验所 河北邢台 054000）

1 前言

QuEChERS 方法是最近几年来国际上最新发展起来的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，2003年，由美国农业部 Anastassiades 教授等开发，主要应用于农药残留的检测[1]。近年来，该方法应用到兽药残留的检测研究屡见报道[2,3]。本文利用QuEChERS 前处理方法，测定水产品中非法添加的孔雀石绿和结晶紫及其代谢物残留量。

2 实验部分

2.1 试剂与仪器

孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿、隐色结晶紫（德国 Dr.Ehrensorfer）；ProElut QuE 15 mL Tube 净化管（北京迪马科技）；甲醇、乙腈（均为色谱纯，美国Fisher 公司）；LC-MS/MS（日本岛津）；水产品（均采自于当地市场）。

2.2 样品提取

称取2.0 g 样品于50 mL 具塞离心管中，加入2.0 g NaCl，混匀，再加20 mL1%甲酸乙腈，涡旋混合1 min，振荡 10 min，8 000 rpm 离心 2 min，取 10 mL上清液待净化。

2.3 样品净化

首先，将10mL 上清液转移至15mL 净化管中，振荡 5 min，8 000 rpm 离心 2 min；其次，取上清液 5 mL，40℃减压蒸干，用流动相复溶，用0.22 μm 滤膜过滤后供LC-MS/MS 分析；最后，采用相同方法制备空白基质标准溶液。

2.4 LC条件

色谱柱:LeapsilC18，100 mm×2.1 mm，2.7 μm；流速:0.3 mL；进样量:5 μL；柱温:35℃；流动相:A:5 mmol/mL 乙酸铵+0.2%乙酸，B:乙腈；A∶B=15∶85。

2.5 质谱条件

电离模式:ESI；扫描方式:正离子；检测方式:MRM；电喷雾电压:5 500 V；雾化气压力:50 psi；辅助气压力:50 psi；帘气压力:20 psi；离子源温度:500℃。定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压详见表1。

表1 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压

3 结果与讨论

在相同的色谱与质谱条件下，分别针对鱼、虾、蟹、贝作1.0 μg/kg 水平回收实验，实验结果详见表2。

表2 水产品中孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、隐色孔雀石绿的添加回收结果

由表2可知，添加水平 1.0 μg/kg 时回收率为72.25%～107.08%。浓度 0.5 μg/L 孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、隐色孔雀石绿混合标准品上机，MRM色谱图详见图1。

图1 0.5 μg/L 孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫 MRM 色谱图

4 结语

本文通过对QuEChERS 方法和质谱条件进行优化，建立了水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物残留量QuEChERS-LC-MS/MS 检测方法，与常用的固相萃取法相比，本法前处理简便高效，而且环保，适用于大批量水产品中的孔雀石绿和结晶紫及其代谢物残留量检测。