血小板减少性紫癜患者抗核抗体以及抗心磷脂抗体的检验及其临床应用价值探讨

刘 亚 余志斌

（重庆天府矿务局职工总医院检验科，重庆 400700）

特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）属于临床治疗中一种具有较高发生率的出血性疾病，多数研究者均认为疾病的发生与免疫因素、病毒感染存在密切相关性[1]。抗心磷脂抗体（ACA）为属于一种抗磷脂抗体，其结合在磷脂抗原中，是自身免疫性抗体，与诸多自身免疫性疾病的发生均存在密切关系。既往研究显示，ACA通过与血小板中的膜磷脂抗生素原相互结合，破坏血小板，导致血小板出现消耗性减少[2]。本研究主要探讨血清ANA、ACA水平与ITP存在的相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取48例2016年4月至2018年6月在本院接受诊治的ITP患者作为研究对象。其中男16例，女32例，年龄14～58岁，平均（38.9±4.8）岁。选择相同时间段在本院接受健康体检，且体检结果为良好的48名健康者作为参照组，所有入选者均签署知情同意书，自愿加入研究。纳入者男18名，女30名；年龄15～59岁，平均（38.7±4.6）岁；在纳入者相关基线资料（年龄、性别等）对比上，两组间差异无显著性（P＞0.05），具有可比性。

1.2 病例纳入及排除标准：纳入标准：①符合ITP相关临床诊断标准[3]；②血小板计数≤50×109/mL；③签署相关知情文件，自愿参与研究；④临床检验资料齐全。排除标准：①伴有系统性红斑狼疮；②伴有其他结缔组织病。

1.3 方法：抗核抗体、抗心磷脂抗体试剂均为德国EUROIMMUN公司提供。应用到仪器主要为 BC5800 全自动细胞分析仪（深圳迈瑞）、全自动酶标分析仪（上海讯达仪器公司）。在受检者空腹状态下采集其2 mL静脉血作为标本，静置使血清分离，该分离过程控制在3 h内结束，然后将样本放置于-20 ℃环境中待测。检验过程中相关操作均严格按照仪器及试剂说明书规范进行。

1.3.1 ACA检测：通过酶联免疫吸附试验法行ACA含量检测。使用稀释液按照1∶201比例将待测血清样本稀释，然后再与质控、标准血清同时加至包被微孔中。经过孵育洗涤流程之后再将酶标记抗体加入。完成孵育洗涤流程后再将显色剂加入，通过酶标仪进行比色。以标准曲线为根据将标本中抗心磷脂抗体含量计算出来。

1.3.2 ANA检测：抗原基质为猴肝片、Hep-2细胞。通过间接免疫荧光法实施ANA含量检测。以猴肝片以及Hep-2细胞细胞核是否有特异性荧光产生作为根据判断检测标本中是否存在ANA。

1.3.3 ENA检测：选用免疫印迹法进行ANA含量检测。先将皮肤敏感抗原、将亲和层析纯化核抗原核糖核蛋白、Scl-70、Jo-1、平滑肌抗原转印至硝酸纤维薄膜上，再将血清、酶标记抗体加入。以硝酸纤维薄膜为根据判断是否显现颜色。以滴度是否＞1∶100作为根据，判断是否存在某种抗ENA抗体。具体操作按照试剂盒说明书规范实施。给予患者7 d治疗后，再抽取其静脉血送检，行血小板计数复查。治疗方法为给予患者免疫球蛋白、糖皮质激素、止血药等。

1.4 观察指标及检验结果判断：观察ACA、ANA以及ENA检测结果，ACA含量＞12 IU/mL判定为阳性；抗核抗体滴度＞1∶100判断为ANA阳性；观察研究组患者治疗前、后血小板计数。

1.5 统计学方法：以SPSS 22.0软件为工具行数据统计学分析。计数资料（检测阳性率等）采用例数和百分比（%）表示，比较行χ2检验；计量资料（血小板计数）采用均数±标准差（±s）表示，比较行t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

表1 两组ACA、ANA检测结果对比[n（%）]

表2 两组抗ENA抗体检测结果对比[n（%）]

表3 两组ANA及ACA阳性、阴性ITP治疗前后血小板计数比较（±s）

表3 两组ANA及ACA阳性、阴性ITP治疗前后血小板计数比较（±s）

组别 例数 治疗前(×10/L) 治疗后(×10/L) t P 99 ANA阳性组 14 19.28±11.35 202.45±119.25 5.694 0.000 ANA阴性组 34 19.90±10.63 221.35±142.35 5.788 0.000 t-0.087 0.756 - -P-0.926 0.355 - -ACA阳性组 20 18.26±11.36 203.42±115.62 7.111 0.000 ACA阴性组 28 18.82±10.47 240.46±108.94 8.241 0.000 t-0.059 2.875 - -P-0.950 0.032 - -

2 结 果

2.1 两组ACA、ANA检测结果比较：研究组ACA/ANA阳性率均显著高于参照组（P＜0.05），见表1。

2.2 两组抗ENA抗体检测结果比较：在研究组患者中，有10例ANA为阳性的标本中出现≥1种ENA抗体，抗SSA、nRNP阳性最高，见表2。2.3 两组治疗前后血小板计数比较：治疗后，所有患者血小板计数均有显著提高，但ACA阳性组显著低于ACA阴性组（P＜0.05），见表3。

3 讨 论

ACA是一种自身抗体，其靶抗原为内皮细胞膜上带负电荷心磷脂以及血小板。ACA能够与带负电荷磷脂、狼疮样抗凝物质发生交叉反应。临床研究显示，ACA与习惯性流产、血栓形成、神经系统疾病发生、血小板减少均存在密切相关性[4]。本研究分析结果显示，研究组ACA阳性率高达70.83%，而健康者阳性率则为0。张文兰文献指出，与ACA阴性者相比，ACA阳性者出现血小板减少的概率要高出3倍。曹新春等[5]文献指出，带负电荷的磷脂以及其他靶抗原均有可能是ACA的靶抗原。本次研究分析结果显示，ACA阳性组患者治疗后血小板计数显著低于ACA阴性组。该结果表明，ACA阳性可能是导致ITP患者血小板计数明显减少的一个重要原因，具体机制可能如下：①ACA可对血小板活化产生促进作用，血小板活化后构成内膜的负电荷磷脂能够翻转到表面，转变能够与ACA发生反应的状态，血小板、ACA二者相互作用，导致巨噬细胞系统对血小板产生的破坏、吞噬作用不断增加，进而使血小板出现消耗性减少；②血小板在ACA促进下活化后，血小板内容物花生四烯酸的释放明显减少，对内皮细胞释放前列环素产生明显抑制作用，进而引发血小板聚集，导致血栓形成，进一步减少血小板计数[6-7]。由此可知，行ACA测定在一定程度上能够反映ITP患者血清血小板遭受损伤情况，对ITP临床诊断具有一定意义。

ANA是一种自身抗体的总体，其靶抗原为细胞核内各种蛋白质分子以及蛋白质分子的复合物[8]。在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、血小板减少性紫癜等多种自身免疫性疾病中，细胞核的核内染色质、核仁、非组蛋白、由相关蛋白与RNA构成的各种核糖核蛋白粒子均能够成为机体自身免疫反应攻击靶子，最终形成ANA[9]。周莲等[10]报道指出，在机体其他细胞的细胞核、血小板二者无交叉抗原情况下，ANA阳性可能与血小板减少性紫癜的发生和进展无关联，但二者存在交叉抗原情况下，ANA则可能是导致血液中血小板计数减少的一个重要因素。本次研究分析结果显示，ITP患者ANA阳性率显著高于健康者，ANA阳性、阴性组治疗后血小板计数比较无显著差异。该结果表明，ITP患者血清中虽然含有抗血小板抗体，但因该抗体、机体其他细胞细胞核二者间未存在交叉抗原，因此ANA产生有可能只是该疾病患者的一种伴随症状，因此该项指标无法作为ITP临床诊断的辅助性指标。但是当ITP患者出现ANA阳性时必须高度警惕，加强随访，仔细观察患者病情是否会发展成为其他自身免疫性疾病。综上所述，ACA阳性可能是导致血清血小板含量减少的一个重要影响因素，同时还可反映血小板损伤情况，对ITP诊断及疗效、预后评估均具有重要意义。