血清YKL-40蛋白水平与肝硬化患者肝功能、肝纤维化的相关性及作用机制

侯永强 王新征

河南科技大学第一附属医院普外三科 (河南 洛阳， 471003)

以往认为，血清YKL-40蛋白水平与脑梗死、糖尿病、冠心病、哮喘、癌症等疾病的发生发展密切相关，因此通过检测YKL-40蛋白水平，能够对相关疾病的诊断起到指导作用[1，2]。近年来有研究表明，肝硬化患者的血清YKL-40蛋白水平要明显高于正常人群，因此也可将血清YKL-40蛋白水平作为诊断肝硬化的检测指标之一[3]。目前关于YKL-40蛋白水平诊断肝硬化的临床研究较少。因此，本文以肝硬化患者为研究对象，分析其血清YKL-40蛋白水平对肝硬化的诊断意义，并探讨其与患者肝功能、肝纤维化的相关性及作用机制，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2016年6月至2017年5月本院收治并确诊为肝硬化的患者62例为实验组，男37例，女25例；年龄30～72岁，平均(52.7±7.4)岁；体重41～75 kg，平均(62.5±6.5)kg；病程2～13年，平均(61.0±1.7)年。其中酒精性肝硬化23例，乙型肝炎肝硬化18例，自身免疫性肝硬化21例。同期遵循1∶1匹配原则，以性别、年龄、体重等指标作为匹配条件，筛选62例来院健康体检的正常人作为对照组，男35例，女27例；年龄31～70岁，平均(53.5±8.2)岁；体重43～76 kg，平均(61.8±8.4)kg。研究经过医院伦理委员会审核批准，且均签订知情同意。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①符合肝硬化诊断标准；②年龄16～63岁；③HBV感染6个月以上，HBV DNA>1.0×105拷贝/ml；④签订知情同意书并完成治疗者。排除标准：①合并重要脏器严重疾病者；②合并肝性脏病、上消化道大出血、肝肾综合征者；③妊娠、哺乳期妇女及过敏体质者；④恶性肿瘤患者。

1.3 检测指标 采用ELISA检测两组人员血清YKL-40蛋白水平，操作严格按试剂盒说明书进行。同时测定两组人员凝血酶原时间(PT)、血清胆固醇(Cho)、总胆汁酸(TBA)、白蛋白(Alb)、胆碱酯酶(Che)、总胆红素(TBil)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)。仪器：微孔板洗板机(BioteKELx50，美国宝特公司)，全自动酶标仪(上海市欧仪器公司)，全自动生化分析仪(7600-20c，日本日立公司)。

1.4 检测方法

1.4.1 血清YKL-40蛋白检测 于早晨、空腹情况下，采集两组人员下腔静脉血，3 000 rpm离心10 min，分离血清样本待检。①将20 μl稀释后的待检样本与标准品、质控品依次加入人CHI3L1抗体包被微孔板中，37 ℃下孵育1 h以形成抗原抗体复合物。②将抗原抗体复合物重复洗板4次后加入生物素标记的抗人CHI3L1抗体，37 ℃下继续孵育1 h。③继续进行5次洗板，然后加入HRP标记的亲和素，避光条件下孵育1h。④再次进行5次洗板，加入四甲基联苯胺底物系统后反应15 min，然后以终止液终止反应。⑤观察显色从蓝色渐渐转至黄色后，30 min内在全自动酶标仪下读取并计算YKL-40的浓度[4，5]。

1.4.2 肝功能检测 采用全自动生化分析仪测定两组人员血清PT、Cho、TBA、Alb、Che、TBil、AST、ALT水平。计算FIB-4指数，FIB-4指数=(年龄×AST)÷(PLT×ALT)。

1.4.3 肝纤维化检测 采用肝穿刺技术对肝硬化患者进行检测，穿刺前需要完善患者的肝功能、凝血功能等检查。穿刺时常规消毒穿刺点皮肤，以2%利多卡因局部浸润麻醉，用穿刺针取出患者的肝脏组织1～2条。于福尔马林液体中固定，4 h后依次进行脱水、石蜡包埋、切片，进行病理检查。轻度(S0-S1)为无瘢痕或轻度瘢痕；中度(S2-S3)瘢痕超出血管区或桥接纤维化；重度(S4)肝硬化或晚期肝纤维化。

2 结果

2.1 肝功能不同分级患者血清YKL-40蛋白的检测情况 见表1。

表1 肝功能不同分级患者血清YKL-40蛋白的检测结果比较

2.2 不同程度肝纤维化患者血清YKL-40蛋白检测结果 见表2。

表2 不同程度肝纤维患者血清YKL-40蛋白结果比较

2.3 不同类型肝硬化患者血清YKL-40蛋白检测结果 见表3。

表3 3种类型肝硬化患者血清YKL-40蛋白检测结果比较

2.4 两组人员血清YKL-40蛋白、肝功能各项指标检测结果 见表4。

表4 两组人员YKL-40蛋白、肝功能各项指标结果比较

2.5 YKL-40蛋白水平与患者肝功能，肝纤维化的相关性Pearson相关性分析实验组患者YKL-40蛋白水平与FIB-4指数、肝功能Child-Pugh分级、肝纤维化严重程度均呈明显正相关性(r=0.248、0.271、0.362，P均<0.05)。

3 讨论

YKL-40是1992年由Johansen等在人软骨瘤细胞株MG63中发现的一种糖蛋白[6]。之后，YKL-40的研究不断深入，目前已发现其在多种肿瘤(如淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤、恶性胶质瘤等)以及心血管炎性疾病、神经性炎性疾病等患者的血清中表达量增高[7～9]。近年来有研究发现，肝癌患者血清YKL-40蛋白水平会呈现明显的增高趋势，可作为诊断肝癌与判断不良预后的指标之一[10]。但是，血清YKL-40蛋白水平是否会对其他炎症基础上发展起来的肝疾病有诊断意义，目前临床鲜有报道。

本文以肝硬化患者为研究对象，分析YKL-40蛋白水平在其血清中的表达情况，并与62例体检健康受试者进行比较，结果发现肝硬化患者血清YKL-40蛋白水平显著高于健康人群，提示其对诊断肝硬化具有一定的指导意义。观察不同Child-Pugh分级、不同肝纤维化程度患者的YKL-40蛋白水平，结果显示，肝功能分级越高以及肝纤维化程度越严重，患者血清YKL-40蛋白水平越高。这提示血清YKL-40蛋白水平对评估患者病情严重程度及预后也具有较高的应用价值，这一研究结论与Kumagai 等[11]、Tao等[12]的研究结果相符。

本研究根据患者的肝硬化类型进行分析，结果不同类型肝硬化(酒精性肝硬化、肝炎肝硬化、自身免疫性肝硬化)患者血清YKL-40蛋白水平无明显差异，提示不同类型肝硬化也均是由炎症发展而来，而血清YKL-40蛋白参与、介导了多种炎症疾病的发生与发展，因此不同类型的肝硬化均会存在YKL-40蛋白水平上升现象。

综上所述，血清YKL-40蛋白水平可作为肝硬化疾病的诊断指标之一，其对判断肝功能与肝纤维化严重程度也有一定意义，能够为肝硬化患者的治疗与预后提供指导作用。