口腔白斑及口腔鳞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达

祝 磊，韩 雪

(1.郑州拜博医疗集团有限公司惠济泰康拜博口腔门诊部，河南 郑州 450000；2.郑州人民医院口腔科，河南 郑州 450053)

口腔白斑病是临床上常见的口腔黏膜表面白色斑块。口腔鳞癌占口腔颌面部恶性肿瘤的80%以上，是口腔最常见的恶性肿瘤。由正常口腔黏膜到口腔白斑再到口腔鳞癌是一个渐进的过程。Livin和第二个线粒体衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspase，Smac)是多种肿瘤的发生、发展过程中的关键因素[1-2]。本研究采用免疫组化S-P法联合检测Livin和Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑及口腔鳞癌组织中表达情况，以期为识别口腔白斑的早期癌变提供临床参考数据。

1 资料与方法

1.1 一般资料所有63例病理标本均选自2012年1月至2016年12月郑州人民医院病理科存档的蜡块和口腔科活检切取的组织。标本均由2位经验丰富的副主任医师职称以上病理科医师重新阅片确认。63例标本中，14例口腔白斑，38例口腔鳞癌，11例口腔正常黏膜。

1.2 试剂鼠抗人Smac单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；Livin兔抗人多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；S-P免疫组化染色试剂盒、山羊抗鼠抗体和山羊抗兔抗体二抗、DAB试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 免疫组化S-P法检测Livin和Smac蛋白表达采用免疫组化S-P法检测不同口腔黏膜组织中Livin和Smac蛋白的表达，以PBS代替一抗作为阴性对照，Smac蛋白染色以已知阳性乳腺癌标本为阳性对照，Livin蛋白染色以已知阳性食管癌标本为阳性对照。

1.4 结果判定Livin蛋白阳性细胞判定：细胞质内出现棕黄或棕褐色颗粒；Smac蛋白阳性细胞判定：细胞质、细胞核内出现棕黄色颗粒。用半定量积分法，根据染色程度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。再按阳性细胞所占百分比评分：<4%为0分，4%～24%为1分，25%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。两者相乘即为总积分，<1分为阴性(-)，1～2分弱阳性(+),3～4分阳性(++),5～6分强阳性(+++)，以弱阳性+阳性+强阳性计算阳性表达率。

1.5 统计学处理采用SPSS 17.0进行统计学处理，计数资料用百分数表示,比较用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Livin和Smac蛋白在不同口腔黏膜组织中的表达Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)；Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)。见图1、2，表1、2。

图2 Smac在正常口腔黏膜(A)、口腔白斑(B)、口腔鳞癌(C)组织中的表达(S-P，×400)

表1 Livin蛋白在不同口腔黏膜组织中的表达

注：3种口腔黏膜组织中Livin蛋白表达比较，χ2=29.187，P<0.001；正常口腔黏膜与口腔白斑比较，P=0.062；口腔白斑与口腔鳞癌比较，P=0.014；正常口腔黏膜与口腔鳞癌比较，P<0.001

表2 Smac蛋白在不同口腔黏膜组织中的表达

注：3种口腔黏膜组织中Livin蛋白表达比较，χ2=18.359，P<0.001；正常口腔黏膜与口腔白斑比较，P=0.079；口腔白斑与口腔鳞癌比较，P<0.001；正常口腔黏膜与口腔鳞癌比较，P<0.001

2.2 口腔鳞癌组织中Livin蛋白与Smac蛋白表达的关系口腔鳞癌组织中Livin蛋白表达与Smac蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.456，P=0.004)。见表3。

表3 口腔鳞癌组织中Livin蛋白与Smac蛋白表达的关系

注：rs=-0.456，P=0.004

3 讨论

Livin蛋白属于凋亡抑制蛋白的一种，在细胞凋亡的过程中发挥重要作用。研究[3]证实，Livin蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。Smac蛋白在胃癌组织中表达量较癌旁正常组织明显降低[4]。在非小细胞肺癌的研究[5]中，也发现肿瘤组织中Smac蛋白表达量较癌旁正常组织明显降低。在乳腺癌的研究[6]中，也检测到肿瘤组织中Smac蛋白表达量较癌旁正常组织明显降低。

关于口腔鳞癌的研究[7]中，检测到高表达的Livin基因能促进口腔鳞癌细胞TCA8113的增殖，Livin基因的高表达和沉默能有效调控口腔鳞癌细胞TCA8113的凋亡和增殖。本研究结果也显示，Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鳞癌组织中的Livin蛋白阳性表达率依次升高，且口腔鳞癌组织中Livin蛋白的表达明显高于正常口腔黏膜、口腔白斑。

Smac蛋白是存在于线粒体且具有调节细胞凋亡作用的蛋白质，其促凋亡作用机制可能与逆转凋亡抑制蛋白，特别是X连锁凋亡抑制蛋白有关。王志红等[8]的研究证实，Smac蛋白在卵巢子宫内膜异位症的恶变过程中发挥重要作用。大量研究[9-11]证实，Smac蛋白在胃肠道肿瘤、生殖系统肿瘤、泌尿系统肿瘤等组织中存在异常表达。Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鳞癌组织中的Livin蛋白阳性表达率依次降低，且口腔鳞癌组织中Livin蛋白的表达明显低于正常口腔黏膜、口腔白斑。

研究[12]证实，在结直肠癌组织中Smac蛋白表达与Livin蛋白表达具有密切关系。本研究通过对口腔鳞癌组织中Smac蛋白与Livin蛋白关系分析也发现，口腔鳞癌组织中Smac蛋白表达与Livin蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.456，P=0.004)。这提示两者在口腔正常黏膜到口腔白斑再到口腔鳞癌的转化过程中相互具有负性调节作用。

综上所述，Smac的低表达和Livin的高表达与口腔白斑癌变的发生、发展关系密切，两者联合检测有助于早期评估口腔白斑癌变风险。