核酸检测法检测血液标本内乙肝病毒的价值分析

黄永梅

核酸检测法(nucleic acid detection， NAT)可直接用于病毒核酸的检测中， 对于献血者乙型肝炎筛查具有非常重要的作用。实践证明， 这种检测法非常方便、可靠， 近年来在血液筛查中得到了广泛应用， 可准确检出多种因素引发的漏检血液， 大大降低由于输血导致的感染病毒发生率， 为临床血液病毒筛查提供了重要检测手段［1］。本次研究分别利用酶联免疫吸附剂试验 (enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)、NAT检测本站采集的血液， 重点观察NAT用于血液标本中乙肝肝炎病毒(hepatitis b virus， HBV)检验中的价值， 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2015年11月1日～2018年2月28日本血站无偿献血合格标本120份作为研究对象， 均符合《献血者健康检查要求》的相关标准［2］， 所有献血者均经干化学法行谷丙转氨酶(ALT)检测， 并利用金标试纸法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)， 得到结果均合格。

1.2 血液采集方法 保留ELISA与ALT、离心NAT样管,速率3000 r/min, 离心力1600 g, 时间为20 min, 于4℃下储存备用, 48 h内行检测。准确记录好血液采集日期、样品编码等信息资料。获得标本需在2 h内进行处理, 并转至冰箱内,确保冰箱温度在2～8℃, 2～3 h内转至离心保存, 在24 h内行血清学筛查, 并进行NAT检测。

1.3 检测方法 全部严格按照操作规程进行各项操作，所有试剂均确保在有效期内使用， 仪器设备有瑞士哈美顿STAR全自动样仪、BEHRING全自动酶免后处理机、Cobas s 201核酸检测系统、COBAS AmpliPrep 核酸提取仪及COBAS Taqman核酸扩增检测仪)。①ELISA检测：每份血液标本进行HBsAg检测时均给予2种ELISA试剂， 并在每批实验中设置阴性对照组、阳性对照组、室内质控品组与空白对照组。检测结果判断标准：样本光密度值与临界值的比值(S/CO)≥1为阳性， 该状态下血液检测结果不符合标准；0.5＜S/CO＜1为灰区， 该状态下血液检测结果不符合标准；S/CO＜0.5为阴性， 该状态下血液检测结果符合标准。②NAT检测：利用混样方法检测核酸。在每级混样中设置6个标本，设定内对照， 设定混合测定阴性为阴性， 对混合测定阳性者进行拆分， 如拆分检测呈阴性则为NAT阴性， 如拆分测定呈阳性， 则为NAT阳性。③追踪随访：NAT呈阳性标本中， 核酸确认为阳性， 但“二对半”检测结果为阴性和核酸确认阴性献血者应进行追踪随访， 2个月后重新采样。

2 结果

2.1 ELISA检测结果 120份血液标本中, ELISA检测单试剂阳性2份, 双试剂阴性118份。见表1。

2.2 NAT检测结果 120份血液标本中, NAT检测阴性105份, 阳性15份, 经NAT确认阳性12份, ELISA确认阳性1份。最终确认阳性的13份标本中, 仅2份ELISA检测为单试剂阳性, 而NAT检测均为阳性。见表1。

2.3 追踪随访结果 NAT检测呈阳性的15份标本中, 对符合条件的献血者进行追踪随访, ELISA检测阴性转化为阳性2例, 该血样于ELISA窗口期NAT检测发现, NAT检测有1例隐匿性HBV感染。见表1。

表1 120份血液标本ELISA检测与NAT检测结果(份)

3 讨论

HBV病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒均可经过血液传播， 对人类身体健康存在严重威胁， 相关资料显示， 发展中国家采集的血液中， 约5%～20%的血液中包含上述3种病毒［3］， 同时， 每年经输血与非安全性注射引发的感染HBV的人数高达1600万人， 并且丙型肝炎感染人数也高达470万人 ， 艾滋病毒的感染人数也非常高 ， 约为 16 万人［4］， 严重阻碍着我国经济与社会发展。

HBV是一种通过血液传播的病毒性传染病， 对献血人群进行血液筛查是预防HBV传播的一条重要途径。ELISA是临床诊断HBV使用频率最高的一种方法， 通常性检验指标为HBsAg， 该检测方法具有便宜、快捷等优点， 因此在血液筛查工作中占据着非常重要的地位［5］。但是因为隐匿性HBV、HBV感染窗口期等问题存在， 临床检测中存在较大的HBV漏检风险。NAT可以为血清学诊断方法提供补充， 该检测方法是一种新型分子生物学诊断方法， 主要通过对HBVDNA含量测定， 快速、直接的反映出HBV感染的具体情况，其检测结果具有较高的灵敏性， 现在已经在献血者血液病毒感染筛查工作中得到了广泛应用。

输血是否存在安全性， 其风险主要在于被筛查病毒的“窗口期”， 相关资料显示， 经NAT检测可有效减少HBV等“窗口期”， 其减少率可达40%～75%， 大大降低病毒通过输血传播的风险［6］。本次研究NAT呈阳性标本中， 核酸确认为阳性，但“二对半”检测结果为阴性和核酸确认阴性献血者进行追踪随访， ELISA测定阴性转化为阳性2例， 该血样于ELISA窗口期NAT检测发现， NAT测定共有1例隐匿性HBV感染者，可见NAT检测在血液筛查中具有非常重要的价值。在NAT检测中， 所用的试剂必须具有比较高的灵敏性和特异性， 并且对实验环境也提出了比较高的要求， 比其他检测方法要求更为严格， 检查过程中使用的设备与试剂要求都比较高， 大大提升了血液检测的成本， 但也加强了血液安全的保障。另外， NAT自身存在一定局限性， 一般如果病毒载量较低时，利用NAT检测是很难获得准确的结果［7，8］。

综上所述， 在血液筛查中应用NAT检测， 可显著提升血液病毒检出率， 为确保血液安全提供保证， 值得在临床上推广。NAT可以有效缩减“窗口期”， 同时减少通过输血途径传播病毒的风险性， 但是在临床诊断中也会出现漏检标本。在实施NAT时， 应对病毒核酸加以重点关注， 而ELISA则为抗原或抗体， 以上两种检测方法体现的检测原理与方法上存在一定差异， 因此， 这两种检测方法在血液标本检测中不存在重复性， 体现为一定的互补性， 均为血液筛查中非常重要的检测方法。