标准法和改良法测定饲料中喹乙醇的比较研究

2019-07-17杜杨李彬朱贵冠

四川畜牧兽医 2019年7期

杜杨，李彬，朱贵冠

（河南省安阳市畜产品质量安全监测检验中心，河南安阳 455000）

喹乙醇是一种化学合成的生长促进剂，可促进机体蛋白质合成代谢，提高饲料能量利用率，促进生长发育[1]，同时具有较强的抑制或杀灭细菌的作用[2]。在饲料加工工业中常与淀粉或麦麸、磷酸氢钙、碳酸钙配制成饲料预混剂。在畜牧和水产养殖行业，为了盲目追求经济价值[3]，曾被养殖户广泛添加于饲料中。有研究发现，大剂量喹乙醇对动物有毒性作用，而且喹乙醇在体内有蓄积性，在动物体内蓄积到一定程度时，会对动物和人产生致畸、致癌、致突变的“三致”作用[4]。农业农村部2638号公告规定：自2018年5月1日起，停止生产喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药的原料药及各种制剂，相关企业的兽药产品批准文号同时注销；自2019年5月1日起，停止经营、使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药的原料药及各种制剂。

目前，我们多采用国家标准方法——高效液相色谱法（GB/T 8381.7-2009）对饲料中的喹乙醇进行测定，但该方法前处理过程中，离心后的上清液要经滤纸过滤，过滤过程可能对目标检测物质产生一定的吸附，同时增加检测成本，延长检测时间。本试验对该标准法进行了改良，通过提高离心机转速并缩短离心时间来替代滤纸过滤这一环节，在保证检验结果的准确性和重复性较好的情况下，提高了工作效率，降低了检测成本。

1 材料

1.1 试剂甲醇，超纯水，盐酸；提取液：甲醇+水，其比例为5∶95。

1.2 标准储备液准确称取喹乙醇标准品50mg于50mL棕色容量瓶中，加30mL水超声溶解，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，即得1 mg/mL浓度的标准储备液。4℃保存，有效期为1个月。

1.3 标准工作液精密量取标准储备液1mL于100 mL容量瓶中，以水定容至刻度。混匀，制成浓度为10μg/mL的标准工作液。

1.4 空白添加样品分别按照10、50、100 mg/kg的比例在空白样品中添加喹乙醇标准品，混匀。

1.5 仪器与设备离心机，超声波清洗器，固相萃取装置，恒温振荡器。

2 测定方法

2.1 标准方法称取5 g试样于具塞锥形瓶中，加入50mL提取液，具塞置入摇床中，室温下恒温避光振荡45min（振荡速度为110r/min）。提取液在3500r/min下离心10min，上清液经滤纸过滤，滤液作为SPE小柱净化使用。活化好的SPE小柱分别用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗，然后将小柱吹干。最后用2 mL洗脱液洗脱。洗脱液过0.22μm有机相滤膜，滤液上机测定。

2.2 改良方法称取2 g试样于具塞锥形瓶中，加入20 mL提取液，具塞置入摇床中，室温下恒温避光振荡45min（振荡速度为110r/min）。提取液在5000r/min下离心6min，上清液作为SPE小柱净化使用。其余步骤同上。

2.3 液相色谱条件柱温25℃，进样体积10μL，检测波长260nm，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

3 结果

用标准法和改良方法在空白样品中分别添加不同浓度（10、50、100 mg/kg）喹乙醇进行回收率实验，每个添加浓度进行5次重复测定，求相对标准偏差。分别按2.1和2.2步骤进行实验，结果见表2和表3。从表2和表3可以看出，添加量在10、50、100 mg/kg时，改良方法的回收率在95%～110%之间，重复性好，相对标准偏差均小于1%。