大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

苏芳芳

[摘要] 目的 针对大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌实施超广谱β-内酰胺（ESBLs）检测，对其耐药性进行分析。 方法 方便选择该院2016年1月—2017年12月期间从120例住院患者当中进行标本采集后并进行分离，大肠埃希菌共计161株、肺炎克雷伯菌共计92株，应用细菌分析检测仪针对大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌进行分析鉴定。 结果 肺炎克雷伯菌以及大肠埃希菌共计253株，共计检出ESBLs菌99株（39.13%）;大肠埃希菌的检出率是42.24%，肺炎克雷伯菌检出率是33.70%（χ2=3.261，P=0.000）;肺两种菌株的ESBLs底物模式以单CTX和CTX/CIAV阳性模式为主，均能够产生ESBLs的菌株。哌拉西林、头孢噻吩、阿莫西林等药物的耐药性可达到50%～100%，而对于药物美罗培南和亚胺培南的耐药性相对较低。 结论 大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌在產出ESBLs菌方面比较严重，多呈现为多重耐药性，因此医院需依据ESBLs菌特点并结合第3代头孢菌素类药物的应用情况，实施多底物的ESBLs菌检测。

[关键词] 大肠埃希菌;肺炎克雷伯菌;检测;耐药性

[中图分类号] R446.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）02（a）-0181-03

[Abstract] Objective To investigate the drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae by detection of extended-spectrum β-lactam （ESBLs）. Methods From January 2016 to December 2017， we convenient selected samples from 120 hospitalized patients. A total of 161 Escherichia coli strains and 92 strains of Klebsiella pneumoniae were used. Analysis and identification of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. Results A total of 253 strains of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli were detected， and 99 strains of ESBLs were detected （39.13%）. The detection rate of Escherichia coli was 42.24%， and the detection rate of Klebsiella pneumoniae was 33.70% （χ2=3.261， P=0.000）; the ESBLs substrate pattern of both lung strains was dominated by single CTX and CTX/CIAV positive patterns， all of which were able to produce ESBLs. The drug resistance of piperacillin， cefotaxime， amoxicillin and the like can reach 50%-100%， while the resistance to the drugs meropenem and imipenem was relatively low. Conclusion Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae are serious in producing ESBLs， and they are multi-drug resistant. Therefore， hospitals need to implement the characteristics of ESBLs and combine with the application of the third-generation cephalosporins multi-substrate ESBLs test.

[Key words] Escherichia coli; Klebsiella pneumoniae; Detection; Drug resistance

近年来随着临床中对于第3代头孢菌素的应用率不断上升，国内外关于ESBLs的流行情况报道也在不断增多[1]。ESBLs是基于肠杆菌科细菌而产生的，特别是肺炎克雷伯菌以及大肠埃希菌最具代表性个典型性。属于质粒介导，是基于常规β-内酰胺发生基因突变后形成的，在其结合与转化的过程中，此类细菌当中的耐药基因不断的扩散，因此极易引发院内感染呈流行性暴发[2]。为了进一步掌握ESBLs所具有的耐药性特征，该次研究将针对该院2016年1月—2017年12月期间期间的120例住院患者实施标本采集后分离大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌实施ESBLs检测，并对其耐药性进行探讨。

1  资料与方法

1.1  一般资料

方便选择该院从120例住院患者当中进行标本采集后并进行分离，应用VIT60型细菌分析检测仪针对大肠埃希菌共计161株以及肺炎克雷伯菌共计92株进行分析鉴定。班次研究中的质控菌株是大肠埃希菌（ATCC26833）。仪器与试剂：VIT60型细菌分析检测仪和GNS602药敏实验检测卡。药敏纸片为氨曲南、头孢他啶、头孢噻肟、头孢三嗪、头孢西丁等;M-H琼脂。

1.2  方法

双纸片协同实验：参照《全国临床检验操作流程规范》[3]进行菌液的制备，应用M-H琼脂将受试菌进行涂抹，于平板的中央区域粘贴阿莫西林和棒酸纸片，之后需在此符合纸片的四周处粘贴30 μg头孢三嗪、头孢噻肟以及头孢他啶和氨曲南制片。每张纸片的中心均需与复合纸片的中心保持大约25～30 mm的距离，放置于35℃环境中进行孵育，于20 h后取出。任意一张纸片于符合纸片的周边发生协同现象时，即可进行ESBLs的阳性判定。应用细菌检测仪和K-B纸片发针对细菌进行耐药性检测。

1.3  统计方法

研究数据均以SPSS 17.0统计学软件处理，计量资料以均数±标准差（x±s）来进行表示，行t检验，计量资料采用率[n（%）]表示，行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  結果

2.1  ESBLs的检出率情况

该院于2016年1月—2017年12月期间临床分离肺炎克雷伯菌以及大肠埃希菌共计253株，经实验确认共计检出ESBLs菌99株，此次的检出率是39.13%。大肠埃希菌共计检出ESBLs菌68株，检出率是42.24%（68/161）;肺炎克雷伯菌共计检出ESBLs菌31株，检出率是33.70%（31/92）;该次研究中大肠埃希菌相较于肺炎克雷伯菌的ESBLs菌株率更高。

具体比较结果见表1。两组资料相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2  双纸片法的ESBLs底物模式

双纸片法下肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌两者的ESBLs底物模式当中，主要为单CTX和CTX/CIAV阳性模式，其占比分别为69.12/61.29%。单AZ和CAZ/CIAV的阳性底物模式占比则分别仅为2.94%、0.00%。因此仅应用单AZ和CAZ/CIAV纸片实验实施ESBLs检测时，可能会导致漏检情况。详见表2。

2.3  肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌对于多种抗生素耐药性统计

肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌当中能够产生ESBLs的菌株其耐药性都显著高于未产生ESBLs的菌株，并且大部分均呈现多重耐药性。特别是对于哌拉西林、头孢噻吩、阿莫西林、头孢他啶以及替卡西林等药物的耐药性较高，可达到50%～100%。对于药物美罗培南和亚胺培南的耐药性相对较低，其次是哌拉西林。详见表3。

3  讨论

ESBLs菌广泛的存在于革兰阴性杆菌当中，特别是大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌最具代表性[4-5]。该次研究中大肠埃希菌的检出率是42.24%，而肺炎克雷伯菌的检出率是33.70%，该次研究的总检出率是39.13%，这与黄磊杰等[4]所报道的37.62%比较相近，但高于王晓丽等[5]所报道的23.62%，这种阳性率之间的差异可能同不同地区及医院所应用的第三代头孢菌索具体种类、数量和时间等差异而导致的ESBLs筛选和诱导差异有关。由于ESBLs的产生主要源自于质粒介导，因此非常容易造成不同菌属细菌之间的转移，应引起重视。两种菌株在阳性检出率方面存在差异可能同地区差异、院内第3代头孢菌素应用情况等有关。因为ESBLs菌的产生是基于质粒介导，因而容易发生不同菌种之间转移，因此需引起临床医学界的重视[6-9]。该次研究中药物替卡西林、头孢噻吩、阿莫西林等耐药性均较高，分别达到97.81%、100.00%、97.62%，而美罗培南、亚胺培南以及哌拉西林的耐药性相对较低，分别为3.82%、3.84%、7.06%，因此临床应用中需结合实验结果合理选择药物，降低耐药性。这与张鹏亮等[10]报道的美罗培南（3.64%）、亚胺培南（3.86%）以及哌拉西林（8.25%）的耐药研究结果相一致。

大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌的ESBLs试验当中.特别是以CTX和CIx/CIAV的检出阳性率最较高，分别达到69.12%和61.29%;而两组均呈现阳性者则分别高达44.12%与35.48%：而单CAZ或者CAZ/C1AV组的阳性者仅为1例，占比为2.94%。产生ESBLs的大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌其临床分离的菌株均对于CTX所具有的耐药性显著高于CAZ，这也表明说明其内因ESBks主要是头孢噻肟酶，也就是即CTX型酶，因而在表型确认试验当中需要采取双纸片试验法，如果仅仅只采用单纸片进行的CAZ、或CAZ/CLAV作为底物进行试验，则可能会导致漏检。产生ESBb的是肠杆菌科的细菌对于β-内酰胺类抗肾素出现耐药性的重要影响因素之一。该酶一方面能够同水解青霉素以及一代和二代头孢菌素，另一方面还可以水解三代头孢菌素与单酰胺类抗生素，这也给临床当中的患者抗感染治疗带来了较大的困难。产ESBLs菌对于临床当中比较常用的诸多抗生素均具有多重耐药，例如对于青霉素类和头孢菌素类的耐药性可高达55%～100%。而其中的大肠埃希菌ESBKs（+）对于庆大霉索和妥布霉索此两种氨基苷娄具有的耐药也可达到50%以上，然而对于药物阿米卡星的耐药性相对较低，仅为13.19%，同时对于药物亚胺培南、哌拉西林以及美洛匹宁等药物具有的铭感度较低，因此可将以上几种药物作为临床中的治疗产ESBLs菌感染的优选药物。肺炎克雷伯菌对于几种药物具有的耐药性程度都高于大肠埃希菌，并且对于亚胺培南以及美洛匹宁的耐药率均为8%左右，人对于哌拉西林的耐药率则相对较高，达到22.89%。除此之外，该次研究中还发现那些非产ESBLs的肠科杆菌对于抗生素具有的耐药性与产ESBLs菌相比其耐药程度相对较低，然而也可能存在着不同程度的交叉耐药性。这也表明超广谱β-内酰胺酶不是唯一引发的耐药原因，其因而其耐药机制应该引起临床中的重视。

综上所述，大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌在产出ESBLs菌方面比较严重，多呈现为多重耐药性，因此医院需依据ESBLs菌特点并结合第3代头孢菌素类药物的应用情况，实施多底物的ESBLs菌检测。

[参考文献]

[1]  赵文申，陈会霞，李守霞.尿路感染患者产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析[J].传染病信息，2017，30（5）：269-271.

[2]  田俊华，陈蕾.血流感染非产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析[J].中国卫生检验杂志，2017，27（20）：3023-3026.

[3]  王伟，胡豫杰，徐进，等.产CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌全基因组序列耐药和毒力特征研究[J].中国食品卫生杂志，2017，29（5）：519-525.

[4]  黄磊杰，刘晓亮，朱锐，等.产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌噬菌体的分离及特性研究[J].上海交通大学学报：医学版，2017，37（8）：1069-1073.

[5]  王晓丽，葛亮，李兴华.新疆某院5年间大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶的分布及耐药特征分析[J].国际检验医学杂志，2017，38（15）：2094-2098.

[6]  張晶晶，谢永富，黄印启，等.超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌底物筛选与耐药性及耐药基因分型研究[J].中国病原生物学杂志，2016，11（7）：661-664，668.

[7]  余悦能，张祎萍，金旭红，等.肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶菌株的临床特点及感染的危险因素[J].浙江医学，2016，38（10）：728-731，734.

[8]  陈键.老年呼吸科患者感染产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药分析[J].临床肺科杂志，2016，21（1）：51-53.

[9]  冯慧芬，赵秋民，段广才，等.产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及其危险因素分析[J].现代预防医学，2015，42（7）：1325-1327，1341.

[10]  张鹏亮，徐修礼，白露.医院感染大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的产酶率与耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2015， 25（3）：508-510.

（收稿日期：2018-11-06）