TLRs在口腔癌细胞中的表达及临床意义

王雪丽　刘俊辉

【摘要】 目的：探究TLRs在口腔癌細胞中的表达及与临床的关系。方法：收集笔者所在医院口腔科2014年10月-2015年10月因口腔癌行手术治疗的患者32例为口腔癌组，总结口腔癌患者性别、年龄、肿瘤大小、分级等信息，并对患者进行术后随访。纳入同期入院的正常口腔黏膜患者32例为对照组。采用qRT-PCR检测肿瘤组织中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表达，并与肿瘤大小、预后行相关性分析。结果：口腔癌组TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表达均显著高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。口腔癌组织中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的mRNA水平的表达与口腔癌肿瘤大小呈正相关，与生存时间呈负相关，差异均有统计学意义（P<0.05）。口腔癌组织中TLR1、TLR3、TLR7的mRNA水平的表达与口腔癌肿瘤大小、生存时间无明显相关性（P>0.05）。

结论：TLR1-8亚型在口腔癌患者中的表达异常升高，且TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表达与肿瘤大小呈正相关，与患者生存期呈负相关。

【关键词】 口腔癌; Toll样受体; 表达; 相关性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.14.028 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）14-00-03

The Expression and Clinical Significance of TLRs in Oral Cancer Cells/WANG Xueli，LIU Junhui.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（14）：64-66

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of TLRs in oral cancer cells and its relationship with clinic.Method：32 patients with oral cancer who underwent surgical treatment in author's hospital from October 2014 to October 2015 were collected，and as the oral cancer group.The information of sex，age，tumor size and grade of oral cancer patients were summarized，and the patients were followed up.32 patients with normal oral mucosa admitted to the hospital during the same period as the control group.The expression of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 in tumor tissues were detected by qRT-PCR.The correlation analysis was performed between the expression of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 and the tumors size and prognosis.Result：The mRNA levels of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 in the oral cancer group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）.The expression of TLR2，TLR4，TLR5，TLR6 and TLR8 in oral cancer tissues was positively correlated with the size of oral cancer and negatively correlated with the survival time，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of TLR1，TLR3 and TLR7 in oral cancer tissues had no significant correlation with the size and survival time of oral cancer（P>0.05）.Conclusion：The expression of TLR1-8 subtypes is abnormally high in patients with oral cancer，and the expressions of TLR2，TLR4，TLR5，TLR6 and TLR8 are positively correlated with the size of tumors and negatively correlated with the survival time of patients.

【Key words】 Oral cancer; TLRs; Expression; Correlation

First-authors address：Hubei Province Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Wuhan 430015，China

口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤，病理分级多属中、高分化癌，区域性淋巴转移率高，而全身远位转移率较低，对放、化疗敏感性差[1]。原发灶的失控是导致患者死亡的主要原因，各期平均5年生存率在50%～60%，故探讨有效的治疗方法是临床面临的重大课题[2]。Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）是一类Ⅰ型跨细胞膜受体[3]。TLRs与多种内源性分子结合后可启动核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）途径，NF-κB在肿瘤发病和发展过程中起着关键作用，它能够控制黏附分子、细胞因子和生长因子等一些基因的表达，激活免疫反应及炎性反应，释放大量的细胞因子及炎性反应趋化因子，形成适合肿瘤生长的微环境，促进肿瘤的发生、发展[4-5]。因此，探究TLRs在口腔癌细胞中的表达及与临床的关系具有重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集笔者所在医院口腔科2014年10月-2015年10月因口腔癌行手术治疗的病例32例。纳入标准：（1）术前资料、术中及术后病理诊断均确诊为口腔癌;（2）术前未行放化疗;（3）不合并其他口腔疾病;（4）无其他系统肿瘤病史或放化疗病史。口腔癌组患者平均年龄（32.6±12.3）岁;男23例，女9例;肿瘤

0.4～4.7 cm，平均（1.5±2.4）cm;分级：1级11例，2级11例，3级10例;术后3年内肿瘤相关死亡18例，术后3年内非肿瘤相关死亡2例。纳入同期入院的正常口腔黏膜患者32例为对照组，平均年龄（32.9±14.8）岁;男22例，女10例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究获得患者及家属同意，并签署知情同意书。

1.2 方法

（1）总结口腔癌患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期等信息，并对患者进行术后随访，随访至2018年10月31日。（2）获得样本。严格按照RNAgent Isolation System说明书，抽提总RNA。取1 μg总RNA，严格按照逆转录试剂盒说明书将总RNA逆转錄成cDNA。PCR反应在PE公司GeneAmp8 5700型PCR扩增仪上进行，严格按照SYBR green说明书加样，总反应体系20 μl，各样本加cDNA 2 μl;SYBR green 10 μl;商品化引物2 μl[TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8（上海生工）;GAPDH（MQP027158，Genecopoeia公司）];RANase Rree去离子水2 μl。按两步法反应94 ℃、30 s，58 ℃、30 s，反复40个循环以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参照进行分析。

1.3 统计学处理

应用SPSS 20.0统计软件分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验;两组均满足正态分布的定量资料采用Pearson相关检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TLRs在mRNA水平的表达比较

口腔癌组TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表达均显著高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 TLRs表达与口腔癌肿瘤大小相关性分析

口腔癌组织中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的mRNA水平的表达与口腔肿癌瘤大小呈正相关，差异均有统计学意义（P<0.05）。口腔癌组织中TLR1、TLR3、TLR7在mRNA水平的表达与口腔癌肿瘤大小无明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3 TLRs表达与生存时间相关性分析

口腔癌组织中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8在mRNA水平的表达与生存时间呈负相关，差异有统计学意义（P<0.05）。口腔癌组织中TLR1、TLR3、TLR7在mRNA水平的表达与生存时间无明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

3 讨论

TLRs是近年来发现的Ⅰ类跨膜信号传递受体，在先天免疫中通过识别病原体相关分子模式，调节吞噬细胞特异性识别抗原，诱导炎症因子和细胞因子的合成中发挥重要作用[6]。自1997年Medzhitov发现第一个与果蝇同源的人Toll样受体蛋白以来，至今在人类和鼠类中分别发现10和13种类型[7]。在结肠癌、胶质瘤等多种恶性肿瘤中的研究均表明，TLRs的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关[8]。但是TLRs在口腔癌中的作用鲜有文献报道。通过此次的研究表明，TLRs家族中的TLR1-8亚型在口腔癌中的表达均明显升高，且显著高于健康人群。

Virchow等于100多年前就提出了肿瘤起源于慢性炎症反应的假说。目前研究表明，TLRs家族可以通过持续激活NF-κB信号途径，导致慢性炎性反应持续存在，进而发展为恶性肿瘤[9]。TLRs通过与相应配体结合，启动下游的Myd88依赖/Myd88非依赖两条信号途径，进一步激活下游的SPNK/JNK、p38MAPK、ERK1/2信号通路，从而激活转录因子激活子蛋白-1（activator protein-1，AP-1）、NF-κB等，启动炎症因子及炎症趋化因子的转录，使肿瘤细胞合成释放TNFα、IL-6、IL-8等炎症因子与炎症趋化因子，促成肿瘤微环境[10]。同时，肿瘤细胞释放的大量细胞因子可作用于免疫细胞，抑制免疫细胞发挥作用，进而产生免疫逃逸[11]。因此，在非小细胞肺癌、结肠癌、宫颈癌中的研究均表明，TLRs的表达与肿瘤大小、患者预后密切相关[12-13]。本研究亦证实，TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表达与患者生存时间呈负相关，TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8表达越高，患者生存期越短，这亦与既往的研究符合。但是，此次的研究发现TLR1、TLR3、TLR7的表达与生存时间无明显相关性，这仍有待进一步探讨。

综上，本研究表明TLR1-8亚型在口腔癌中的表达异常升高，且TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表达与肿瘤大小呈正相关，与患者生存期呈负相关。

参考文献

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（收稿日期：2018-12-14）