固本安神胶囊质量标准研究*

张玉昆，冯月男，孙思邈，牛雯颖

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040）

固本安神胶囊是由葛根、黄芩、五味子、生地、淫羊藿、巴戟天等12味中药组方，是应用多年的临床经验方剂，治疗阴阳两虚型更年期综合征效果显著。西医治疗更年期多以补充激素水平为手段，但不良反应较多[1]。中药复方的多药效成分对应疾病多靶点的治疗较西药单一靶点治疗更年期不同症状更加具有适应性[2-3]。课题组前期研究已确立了固本安神胶囊的制备工艺[4-5]，本研究中旨在建立其质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

DT201型电子天平（千分之一，意欧仪器仪表有限公司）；电子分析天平（十万分之一，梅特勤-托利多上海公司）；ZF-7型紫外线分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）；UV-1601PC型紫外可见分光光度仪（日本岛津公司）；MP5200H型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板（自制）；玻璃点样毛细管。

1.2 试药

葛根对照药材（批号为201407-121551），葛根素对照品（批号为201318-110752），黄芩对照药材（批号为 201407-120955），黄芩苷（批号为 201402-112002），五味子对照药材（批号为 201410-120922），五味子醇甲（批号为201411-110857），均购自中国食品药品检定研究院；固本安神胶囊（黑龙江中医药大学附属第一医院自制，批号为 201801-201806）；乙酸乙酯、丁酮、三氯甲烷、氨水、甲醇、石油醚（60～90℃）、甲酸、正丁醇、甲酸乙酯，均为分析纯，均购自天津科密欧公司。

2 方法与结果[6-10]

2.1 薄层色谱鉴别

葛根：取精细研磨的本品4 g，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，加10 mL乙酸乙酯，超声处理21 min，滤过后，将滤液蒸发至干，加入1 mL甲醇以溶解残渣，即得供试品溶液。以原方等比按配方工艺制成不含葛根的样品，同法制备阴性对照品溶液。取对照药材葛根0.8 g，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，按供试品溶液制备方法制备成对照药材溶液。取葛根素对照品适量，用甲醇溶解成为1∶1的溶液，即得对照品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液与阴性对照品溶液各2 μL、对照药材溶液与对照品溶液各0.5 μL，在同一硅胶G板底部一条直线上间隔点板后，放入以氯仿-甲醇-水（14∶5∶0.5，V∶V∶V）为展开剂的展开缸中，展开，取出，阴干，将G板置紫外光灯下，于365nm波长下检视。结果见图1 A。

五味子：取精细研磨的本品4 g，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，加15 mL氯仿，超声处理25 min，滤过，将滤液蒸发至干，加入1 mL氯仿溶解残渣，即得供试品溶液。取对照药材五味子0.9 g，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。取对照品五味子醇甲，用甲醇溶解成1∶1的溶液，即得对照品溶液。以原方等比按配方工艺制成不含五味子的样品，按供试品溶液制备方法制备不含五味子的阴性对照品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液与阴性对照品溶液各5 μL、对照药材溶液与对照品溶液各2 μL，在同一硅胶G板底部一条直线上间隔点板后，放入石油醚（30～60℃）-C3H6O2-HCOOH（15∶5∶1，V∶V∶V）的上层溶液作为展开剂的展开缸中，取出阴干，将硅胶G板置紫外光灯下，于254 nm波长处检视。结果见图1 B。

图1 薄层色谱图

黄芩：取精细研磨的本品3 g，精密称定，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，加25 mL甲醇，超声处理45 min，滤过，将滤液蒸发至干，加入1 mL氯仿以溶解残渣，即得供试品溶液。以原方等比按配方工艺制成不含黄芩的样品，同法制备不含黄芩的阴性对照品溶液。取对照药材黄芩0.9 g，置25 mL Erlenmeyer烧瓶中，依法制备对照药材溶液。取对照品黄芩苷，用甲醇溶解为1∶1溶液，即得对照品溶液。分别精密吸取上述4种溶液各3 μL，在同一硅胶G板底部一条直线上，间隔点板后，放入以乙酸乙酯-丁酮 -甲酸 -水（10∶7∶1∶1，V∶V∶V∶V）为展开体系的展开缸中，展开，取出阴干，采用2%酸性三氯化铁乙醇溶液显色。结果见图1 C。

2.2 葛根素含量测定[11-13]

2.2.1 最佳吸收波长确定

取葛根素对照品溶液适量，置紫外分光光度计中，于200～400 nm波长范围内扫描，最大吸收均出现在250 nm波长附近，详见图2。参考2015年版《中国药典（一部）》及相关文献中葛根素含量检测方法，最终确定检测波长为250 nm。

图2 葛根素紫外吸收光谱图

2.2.2 溶液制备

对照品溶液：取0.002 g对照品葛根素，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，作为对照品贮备溶液。取5 mL，置25 mL容量瓶中定容，即得。

供试品溶液：取样品（批号为201801）内容物0.5 g，精密称定，加入20 mL乙醇，于超声水浴中超声15 min，放冷后滤过；药渣中加入20 mL乙醇再次超声15 min，放冷，滤过；收集药渣，加入20 mL乙醇，超声15 min，放冷，滤过；取3次提取液加入乙醇定容至25 mL容量瓶。吸取 5 mL，装入聚酰胺柱（80-100，3 g，内径 0.8～1.0 mm）上，用50 mL水洗脱，弃去水液，再以30 mL浓度为70%甲醇进行洗脱，将收集的洗脱液置蒸发皿中，蒸干，以70%甲醇溶解残渣定容至25 mL。精密量取2.5 mL，置25 mL容量瓶中，加水5 mL，加浓度为5%的NaNO21 mL，混匀，并静置6 min后，再加入浓度为10%的 1 mL Al（NO3）3，混匀，再次静置 6 min 后，加入 10 mL NaOH试液，混匀，用水定容，即得。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验：以原方等比按配方工艺制成不含葛根的样品，精密称取0.5 g，依法制成不含葛根的样品溶液，作为阴性样品溶液。采用紫外分光光度法进行扫描。结果显示，在250 nm波长下，阴性样品溶液吸光度较小，说明本方法不干扰葛根素成分的测定。

标准曲线制备：精密量取葛根素对照品溶液0.5，1，2，3，4，6，8 mL，定容至 25 mL，依法于 250 nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标（Y）、葛根素质量浓度为横坐标（X，g/L）进行线性回归，得回归方程Y=67.858X+0.106 1，r=0.999 2（n=8）。结果表明，葛根素质量浓度在0.003 2～0.011 2 g/L范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验：取0.002 g葛根素对照品，精密称定，依法制备对照品溶液，精密吸取4 mL对照品溶液定容至25 mL，在250 nm波长处测定吸光度，根据标准曲线计算质量浓度。结果平均质量浓度为0.006 5 g/L，RSD为2.32%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：分别取6批样品，每份0.5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，采用紫外分光光度法进行测定。结果葛根素平均含量为220.42 μg，RSD为2.54%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取样品（批号为201801）适量，依法制备供试品溶液，吸取适量，在0～12 h内每小时检测 1次。结果葛根素平均含量为 220.65 μg，RSD为1.29%（n=13），表明供试品溶液在12 h内稳定。样品从提取至测定一般在2 h内即可全部完成，故所建立的检测方法可行。

加样回收试验：取样6份，每份0.5 g，精密称定，分别精密加入220.5 μg/mL葛根素对照品溶液1 mL，依法制备供试品溶液，依法测定。结果见表1。

表1 葛根素加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 含量测定

取6批样品0.5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，采用紫外分光光度法测定含量。结果见表2。

表2 样品中葛根素含量测定结果（n=6）

3 讨论

薄层色谱法广泛用于中药、中成药中标志性物质的检测，方法简单，准确度高。本研究中薄层展开剂比例多以《中国药典》要求为准，可重复性相对较高。葛根为处方中君药，主要活性成分为葛根素，故选择葛根素作为含量检测指标。葛根素属异黄酮类，是以苯色酮环为基础的一种酚类化合物，因此选用聚酰胺柱通过形成氢键的强弱进行分离纯化葛根素，发现聚酰胺柱参数为80-100，3 g，内径 0.8～1.0 mm 时，可达到理想效果。紫外分光光度法灵敏度度相对较高，精密度试验、重复性试验及加样回收试验的RSD均小于3%，认为该方法简单可行。本研究前期进行了葛根单味药中葛根素的含量测定，不同产地的葛根素含量在3.0%～4.5%之间，差异较大，建议生产中购买品相上等的药材，严格控制投料药材的质量。