基于HPLC法控制祛屑息风胶囊质量的研究

李忻，汪旭，代恩勇，孟庆妍，朱昆※

（1.吉林大学中日联谊医院药学部，长春 130021；2.长春市中心医院制剂室，长春 130024；3.吉林省食品药品检验所，长春 130033）

祛屑息风胶囊为院内制剂，处方由蛇床子、红花、荆芥、防风、苦参、白鲜皮、百部、地肤子等中药材加工制备而成，具有除风渗湿、活血化瘀之功效，临床主要用于治疗神经性皮炎及银屑病。蛇床子为该方剂中的君药，蛇床子素为蛇床子主要有效成分之一，具有抗癌、抗氧化、抗炎及神经修复等药理作用[1-4]。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定祛屑息风胶囊中主要有效成分蛇床子素的含量，拟通过检测蛇床子素的含量控制该院内制剂的产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ3200E型超声波处理器（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

祛屑息风胶囊（批号 20180071、20180072、20180073，长春市中心医院制剂室）；蛇床子素（批号110822-201710，中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯，Grace公司）；其他所用试剂均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5-6]

2.2 对照品溶液的制备

2.3 供试品溶液的制备

称取适量祛屑息风胶囊内容物，研磨成细粉末，用3号筛滤过后，精密称取样品1.0 g，置入到50 mL的容量瓶中，加入95%乙醇定容至50mL，密闭，称重，超声波振荡20min后，取出放冷，再对其称重，用95%乙醇溶液弥补溶液耗损，振荡摇匀，滤过溶液，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照品溶液的制备

按处方中药材比例，取除蛇床子外的其他药材，按工艺流程制备成不含蛇床子素的阴性对照品溶液。

2.5 专属性试验

按照“2.1”项下色谱条件，分别取对照品溶液、阴性对照品溶液以及供试品溶液，分别进样，得相关HPLC色谱图（图1）。结果表明，蛇床子素出峰时间约11.75min，在这个时间段，阴性对照品溶液未见明显杂质峰干扰，即祛屑息风胶囊组方中的其他成分在该检测条件下对蛇床子素含量测定不会产生影响，专属性较强。

图1 蛇床子素对照品（a）、供试品（b）和阴性样品（c）的液相色谱图Fig.1 Liquid chromatogram of osthole reference substance(a),test sample(b)and negative sample(c)

2.6 线性范围考察

精密称取适量的蛇床子素对照品，用95%乙醇溶液配制成0.045 0 mg/mL的溶液，分别精密吸取该对照品溶液2、6、10、14、25、30L，分别注入液相色谱仪，测定对照品蛇床子素的色谱峰面积，以进样量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘图，进行线性回归，得到回归方程为y=4 106x 1 576.1（r=0.999 4），表明蛇床子素进样量在0.089 0～0.977 1g范围内蛇床子素色谱峰面积与进样量呈现良好的线性关系。

2.7 精密度考察

2.8 稳定性试验

取同一批供试品（批号20180071），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24h，按照“2.1”项下色谱条件测定蛇床子素色谱峰面积，以考察测定环境下供试品溶液的稳定性。结果，RSD为0.81%（n=6），表明供试品溶液在该环境下24 h内的稳定性达到测定要求。

2.9 重复性试验

取祛屑息风胶囊6份（批号20180071），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，得平均含量为1.012mg/g，RSD为0.98%，表明该方法测量结果的偏差小，重复性达到测定要求。

2.10 加样回收率试验

取已知含量样品（批号20180071，含量为1.012mg/g）6份，再分别加入蛇床子素对照品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样测定，测定样品中蛇床子素的含量，计算得出平均回收率为99.82%，RSD为0.93%。

2.11 祛屑息风胶囊中蛇床子素的含量测定

按照“2.3”项下方法，取3个批次（20180071、20180072、20180073）的祛屑息风胶囊样品，制备3批供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，分别对3个批次的供试品溶液蛇床子素含量进行测定。结果，3个批次的供试品溶液中蛇床子素含量分别为 1.012、1.016、1.009 mg/g。

3 讨论

本研究在选择流动相时，曾经考察水-乙腈（57∶43）、（35∶65）的不同配比，结果，蛇床子素与其他色谱峰的分离度较差，无法满足试验要求[5-6]。通过反复调整有机相与水相的组合，最终确定水-乙腈（40∶60）为流动相，在该试验条件下，蛇床子素的色谱峰与样品其他成分的分离度均大于1.5，且无拖尾现象。

综上所述，通过高效液相色谱法，可以简便、快捷地确定祛屑息风胶囊中蛇床子素的含量，这对于控制该制剂的质量是一种较好的选择，为建立其质量标准提供依据。