灯盏细辛药材中总黄酮含量测定方法及质量标准建立的研究

尹力 高志毅 陈绍明

摘 要：目的：对灯盏细辛药材中总黄酮含量测定方法进行研究，建立相应的内部质量标准，对灯盏细辛药材中总黄酮含量进行控制。方法：用65%的乙醇溶液超声60分钟对灯盏细辛药材进行提取，用紫外分光光度法在510nm处测定吸收度，用芦丁配制对照品溶液，绘制标准曲线计算灯盏细辛药材中总黄酮的含量，建立相应内部质量标准。结论：用65%乙醇作为提取溶剂超声处理，方法简便，精密度，重复性，稳定性良好。结论：本方法简便，准确，重现性良好，可用于灯盏细辛药材总黄酮含量检测，此方法可作为灯盏细辛药材总黄酮含量控制的质量标准。

关键词：灯盏细辛药材;总黄酮;含量测定;质量标准

灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，夏、秋二季采挖，除去杂质，晒干。味辛、微苦，性温，归心，肝经。具有活血通络止痛，祛风散寒之功效。常用于中风偏瘫，胸痹心痛，风湿痹痛，头痛牙痛等[1]。灯盏细辛中黄酮类化合物为主要有效成分，具有较广泛的药理活性，中国药典将高效液相法检测野黄芩苷作为质量控制依据。紫外分光光度法检测总黄酮含量，显色稳定，提取方法简便。灯盏细辛临床上主要制剂有灯盏细辛注射液，灯盏花素片，灯盏细辛胶囊等。采用紫外分光光度法[2]检测灯盏细辛药材中的总黄酮含量，可以对药材的质量优劣提供有效依据，为后期产品提供质量保证。本研究通过实验，探索灯盏细辛药材总黄酮的提取，检测方法等，为有效控制产品质量建立质量标准。

一、概述

对灯盏细辛药材总黄酮含量的测定方法进行系统适用性试验、精密度试验、线性关系与线性范围考察、准确度试验（加样回收试验）的验证，确保检驗方法对被检物质有足够的专属性和灵敏度，通过回收率试验验证检验过程的回收率，用以确定HPLC法在本实验室的适用性及可控性。

二、验证内容

1.仪器与试药

北京普析生产紫外分光光度计，型号为：TU-1810

上海科导生产的超声波清洗器（型号为：SK7210LHC）

梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司生产的电子天平（型号：ME204E/02）

芦丁对照品主要是经过中国食品药品检定研究院提供，批号100080-201408

灯盏细辛药材（云南白药有限公司购进检测合格药材留样，批号YC2421301）

2.方法

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液

精密称取无水芦丁21.51mg，置于100mL容量瓶中，加60%乙醇适量，微热使其溶解，放冷，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，置50mL容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，即得（浓度0.099591mg/ml）

2.1.2供试品溶液

取灯盏细辛药材1g，精密称定，置锥形瓶中，加入65%的乙醇200ml超声60分钟，过滤，滤液蒸干，用60%乙醇溶解残渣，置100mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，过滤。

2.1.3测定法

精密吸取续滤液0.4mL，置10mL容量瓶中，加30%乙醇使成5.0mL，精密各加（1→20）亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀后放置6分钟，加（1→10）硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，再放6分钟，加氢氧化钠试液4.0mL，分别加水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法用对照品溶液0.0mL样品做空白，在510nm处测定吸收度。

3.验证项目

3.1线性关系与线性范围考察

精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL容量瓶中，各加30%乙醇使成5.0mL，精密各加（1→20）亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀后放置6分钟，加（1→10）硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，再放6分钟，加氢氧化钠试液4.0mL，分别加水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法用对照品溶液0.0mL样品做空白，在510nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。Y=12.5226x+0.0010，R2=0.9996，线性关系良好。

3.2精密度试验

取同一批供试品溶液，连续取6份，进行显色反应，测定吸光度，带入标准曲线计算总黄酮含量分别为（5.85%，5.83%，5.85%，5.81%，5.83%，5.84%），RSD为0.26%，≤2%，结果表明方法精密度良好。

3.3重复性试验

取同一批供试品，分别制备供试品溶液6份，进行显色反应，测定吸光度，带入标准曲线计算总黄酮含量（5.81%，5.86%，5.88%，5.79%，5.82%，5.87%），RSD为0.63%，≤2%，结果表明方法重现性良好。

3.4 稳定性试验

取同一批供试品溶液，室温放置0，2，4，8，12，24h进行显色反应，测定吸光度，带入标准曲线计算总黄酮含量（5.805%，5.810%，5.822%，5.808%，5.813%，5.826%），RSD为0.14%，结果表明方法稳定性良好。

3.5回收率试验

采取全程加样法。取6份已知含量的供试品，取1g，精密称定，置锥形瓶中，加入65%的乙醇200ml，按0.8：1比例加入芦丁对照品，超声60分钟，过滤，滤液蒸干，用60%乙醇溶解残渣，置100mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，过滤，精密吸取续滤液0.4mL，依法测定。平均回收率为99.16%（RSD=0.57%）。结果较满意，表明本法适用于本实验室。

4.讨论

试验初期，对提取试剂浓度的选择，分别加入40%、50%、60%、65%、70%、80%乙醇溶液进行提取，最后试验结果显示浓度40%、50%、60%的乙醇溶液之中，总黄酮含量一直处在上升的趋势。当到达65%浓度乙醇溶液之中时，总黄酮含量达到最大值，与70%乙醇含量基本无差别，比80%乙醇提取含量高。超声处理和索氏提取器相比较结果差异小，索氏提取耗时过长，所以最终标准采用65%的乙醇超声提取作为灯盏细辛药材总黄酮的提取方法。采用本方法检测灯盏细辛药材中的总黄酮检测成本低，便于操作，能很好的为药材质量把关。本方法精密度，重复性，稳定性良好。

参考文献：

[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典 2015 年版[S]一部.北京：中国医药科技出版社，2015：147

[2]国家药典委员会，中华人民共和国药典 2015 年版[M]四部.北京：化学工业出版社，2015