一例网状内皮组织增生症高抗体蛋鸡子代垂传检测报告

2019-06-26薛晓阳华裕农业科技有限公司河北邯郸056000

山东畜牧兽医 2019年6期

薛晓阳（华裕农业科技有限公司河北邯郸 056000）

贺凯丽张向文王娟娟赵姗姗孔肖肖秦晓丽王雨蒙

（河北省蛋鸡产业技术研究院河北邯郸）

河北一蛋鸡场REV抗体检测异常，选择30只蛋鸡，进行血清REV抗体检测，全血REV病原检测，同时固定鸡只所产种蛋入孵，出雏雏鸡进行肝脏和全血REV病原检测，检测结果种鸡血清抗体滴度平均值在10000左右，病原检测阴性，出雏雏鸡全血及肝脏REV病原检测均为阴性。得出结论该REV抗体滴度阳性鸡群子代0日龄检测为阴性，无垂传现象。

网状内皮组织增殖症是由网状内皮组织增殖病病毒(REV)引起的鸭、火鸡、鸡和野禽的一组症状不同的综合征。包括免疫抑制、致死性网状细胞瘤、生长抑制综合征(矮小综合征)以及淋巴组织和其他组织的慢性肿瘤[1]。目前养殖企业会定期进行REV抗体检测，以评估鸡群感染压力。在集约化养殖场实行管理上的防疫措施只能在一定程度上减少禽网状内皮组织增生病病毒的感染机会，但并不能保证鸡群呈阴性状态，同时查阅国内流行病学调查显示全国有一定的流行。张丹俊等对安徽省不同地区9个鸡场、7个不同地方品种鸡471份血清样本中有250份为阳性，全省7个不同地方品种鸡总体个体阳性感染率高达53.1%；被检的9个鸡场中均有阳性感染鸡群，被检鸡场阳性感染率为100%；不同鸡场的不同批次差异较大[2]。崔治中等[3]对来自全国从南到北5省市9个公司100个鸡群的约2400份血清样品的ELISA检测表明，有60%以上的鸡群在不同时期感染过REV，不同地区不同鸡群的REV抗体阳性率从0到100%不等，平均约为20%，综上表明鸡群REV感染较为普遍。针对REV病源检测核酸探针方法是一种快速、灵敏、特异性强的检测技术，操作简单，结果易于判定，是目前常用的分子生物学诊断技术，也是本次试验的主要应用方法[4]。主要针对筛选出的REV抗体阳性鸡只进行种蛋入孵，以评价是否垂传，以此进行调查，为种蛋的使用提供参考。

1 材料与方法

1.1 阳性鸡只从种鸡场选择REV抗体阳性鸡只30只，品种为海兰褐蛋鸡，日龄153d该场区多次检测阳性率为100%，但鸡群生产指标正产，鸡群解剖无REV症状存在。

1.2 试剂 RNA 提取试剂盒，OMEGA品牌，批号R6874-02，反转录试剂盒Takara 品牌，批号A112361A，2*PCR mix天根品牌，批号R7129。REV抗体检测试剂和，IDEXX产品，批号：FP466斑点杂交试剂，由山东农业大学肿瘤研究重点实验室提供。

1.3 设备温箱，树立仪器、烘箱，树立仪器、冷冻离心机、水浴锅、PCR仪，伯乐T100，孵化器。

1.4 引物 REV-FGGACTCAATTCCCGTAT-CA GA， REV-R TCTTCCCAGCGACCTTTAC，片段大小为775bp，扩增条件为REV：体系为25µl，上下引物各µl，mix 12.5µl，模板2µl，双蒸水9.5µ，反应条件为95℃，5min；31个循环(95℃，30s；58℃，30s；72℃，1min20s)72℃，10min[4]。

1.5 斑点杂交方法参照山东农业大学肿瘤重点实验室方法[5]。

1.6 试验方法（1）蛋鸡检测：采集30只种鸡血清进行REV抗体检测。采集全血进行斑点杂交检测。（2）种蛋检测：单笼固定鸡只，收集受精种蛋30枚进行入孵，21d出壳后取肝脏和全血检测REV病毒方法为PCR+斑点杂交。

2 试验结果

2.1 种鸡血清检测结果见表1。

表1 试验用鸡REV抗体检测结果

2.2 种鸡REV核酸检斑点杂交检测结果见表2。

表2 试验用种鸡REV核酸病原检测结果

2.3 孵化结果孵化种蛋30枚，出雏28只，鸡只声音宏亮，体重在初产蛋体重范围之内。

3 结果

（1）种鸡REV抗体检测，从检测结果得出抗体几何平均值为10378，最大值为19317，最小值为4132，因国内目前无REV疫苗免疫，确定鸡群受到REV感染，并且抗体滴度值较高，表明接触REV病原时间较长。（2）同时对种鸡进行REV核酸检测，方法PCR+斑点杂交，从检测结果得出在REV高抗体存在的情况下，机体进行REV检测，病原检测呈阴性。（3）对出雏雏鸡全血和肝脏进行病源检测，结果均为阴性，同时出雏数据均正常，孵化率为93.3%，出雏重量及均匀度良好。

4 讨论

（1）鸡群REV高抗体存在，且阳性率100%是该场区的一个特点，针对该种鸡场情况进行相关试验，从检测结果可以看出在抗体滴度达到10000左右的时候，垂传为零。但造成该状况的原因尚无定论，鸡痘病毒(FPV)野毒和疫苗毒整合禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)全基因或基因片段的现象普遍存在，由此引起的生物风险分析已成为许多研究学者关注的焦点，并且有临床报到禽痘疫苗污染引起的病例[6-7]。但疫苗污染后群体抗体水平会达到多少阳性率无相关报到。（2）种鸡群抗体滴度在10000左右从孵化及种鸡生产分析来看对生产影响不大，但需要后续跟踪子代生产成绩，更加深入的进行评判。同时要对场区高阳性率来源进行原因查找。（3）研究表明多数雏鸡容易在早期感染REV，且易产生耐受性病毒血症，维持长期的病毒血症却不产生抗体，同时成为鸡群内REV的传染源[8]，因此，下次试验会结合雏鸡的REV抗体走势及生产成绩进行综合评判，结合此次结果初步判断高抗体阳性鸡只0日龄雏鸡无REV检出，为是否发生垂传提供初步判断。