虎奶菇菌丝生物学特性研究

吴小建 陈雪凤 余春丽 韦仕岩 王灿琴 郎 宁 吴圣进*

（1广西农业科学院微生物研究所，广西南宁530007；2贺州学院，广西贺州542800）

虎奶菇（Pleurotus tuber-regium）属担子菌亚门层菌纲伞菌目侧耳科侧耳属，是热带、亚热带地区的一种珍稀药食两用真菌[1]（图1），适合在我国南方地区栽培，但目前虎奶菇的栽培地区主要分布在江西、福建等地，栽培面积也不大。有关虎奶菇的生物学特性与栽培研究已有较多报道，20世纪80年代，黄年来等学者就已经开展了虎奶菇的栽培研究[2]，此后，江枝和等[3-4]、阮瑞国[5]、丁湖广[6]相继开展了虎奶菇生物学特性研究。栽培技术方面，张传利等将咖啡壳应用到虎奶菇菌种生产中获得成功，咖啡壳的添加量达到40%[7]。魏云辉等利用稻草配比棉籽壳、玉米芯、木屑栽培虎奶菇获得成功[8]。但不同的研究报道之间存在较大差异，且生物学特性研究以考察影响菌核产量及各类成分含量的因素为主，针对菌丝生长条件的研究较少，栽培原料以木屑、棉籽壳为主，针对南方地区丰富的蔗渣、木薯渣、桑枝的原料适应性研究鲜有报道。笔者研究进一步考察虎奶菇菌丝生物学特性，明确碳氮源种类和浓度、培养温度、初始pH、含水量等对其生长的影响，探索利用蔗渣、木薯渣、桑枝、稻草等南方地区常见原料为主料栽培虎奶菇的可行性，为其在南方地区推广栽培提供理论依据和技术支持。

图1 虎奶菇

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株

虎奶菇1号，由广西壮族自治区农业科学院微生物研究所提供。

1.1.2 供试原料与培养基

供试栽培料木屑、棉籽壳、木薯渣、蔗渣、玉桂木屑、桑枝、稻草、麸皮、石灰均由广西农业科学院微生物所食用菌菌种中心提供。

马铃薯琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，琼脂18～22 g，加水1000 mL，pH自然。

碳源试验基础培养基：蛋白胨 3 g，KH2PO41.5 g，MgSO40.5 g，琼脂 20 g，加水1000 mL，pH自然。

氮源试验基础培养基：葡萄糖20 g，KH2PO41.5 g，MgSO40.5 g，琼脂 20 g，加水1000 mL，pH自然。

1.2 试验方法

1.2.1 温度对菌丝生长的影响

将虎奶菇菌丝接种至PDA培养皿后分别在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和45℃恒温培养箱培养。采用十字交叉法测定菌丝生长速度（菌丝生长速度=菌落半径/培养天数），定期观察并记录菌丝长势。每个处理设5个重复。

1.2.2 初始pH对菌丝生长的影响

配制PDA培养基，分别调整pH至4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5和9.0，灭菌后再分别倒平板。每个处理设5个重复。接种后的平板于30℃恒温培养，采用十字交叉法测定菌丝生长速度（菌丝生长速度=菌落半径/培养天数），定期观察并记录菌丝长势。

1.2.3 培养基含水量对菌丝生长的影响

培养基配方：桑枝屑78%、麸皮20%、白糖1%、石灰1%，设置料含水量分别为50%、55%、60%、65%、70%、75%和80%7个处理。料分别装入24 mm×200 mm试管，松紧一致，每个处理5个重复。灭菌、接种后置于30℃温室，直立培养，待菌丝定植料面后再改为卧放。定期观察菌丝生长情况，记录其长势，采用划线法测量菌丝生长速度（菌丝生长速度=菌丝生长长度/培养天数）。

1.2.4 不同碳源和碳源浓度对虎奶菇菌丝生长的影响

以碳源试验基础培养基为对照，在碳源试验基础培养基中分别加20 g/L的果糖、可溶性淀粉、乳糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖、木糖、麦芽糖、甘露糖和玉米粉，制成平板，每个处理5个重复。接种后30℃恒温培养，观察并记录菌丝生长情况，筛选最适碳源。以筛选到的最适碳源制作碳源浓度为10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L和60 g/L 平板，每个处理5个重复。接种后于30℃恒温培养，观察并记录菌丝生长情况。

1.2.5 不同氮源和氮源浓度对虎奶菇菌丝生长的影响

以氮源试验基础培养基为对照，在氮源试验基础培养基中分别加3 g/L的麦芽浸粉、硫酸铵、尿素、蛋白胨、碳酸铵、牛肉膏、硝酸钾、硝酸铵和酵母膏。制成平板，每个处理5个重复。接种后于30℃恒温培养，观察并记录菌丝生长情况，筛选出最适氮源。以筛选到的最适氮源制作氮源浓度为1 g/L、2 g/L、3 g/L、4 g/L、5 g/L和6 g/L平板，每个处理5个重复。接种后于30℃恒温培养，观察并记录菌丝生长情况。

1.2.6 培养料主料菌丝适应性试验

按照表1配方拌料，控制培养料含水量为65%，拌匀后装入15 cm×33 cm聚丙烯袋，每袋装料量为500 g（湿重），用无棉盖体封口，注明编号，121℃灭菌2.5 h。每个配方设3个重复。

将灭菌的料袋放入超净工作台接种，每袋接种量约5 g，接种后于28℃恒温培养，定期观察记录菌丝萌发时间、长势、生长速度等。

表1 虎奶菇菌丝培养料主料适应性试验配方 %%

2 结果与分析

2.1 虎奶菇菌丝培养温度试验结果

由表2和图1可以看出，虎奶菇菌丝在培养温度20～40℃均可生长，35℃时长势最好，菌丝粗壮浓密，菌落洁白均匀，生长速度达到12.05 mm/d。其次为40℃，低温15℃或高温45℃菌丝不生长。培养温度40℃时虎奶菇菌丝生长良好，表明其具有较强的高温耐受性。

表2 温度对虎奶菇菌丝生长的影响

2.2 培养基初始pH试验结果

由表3可知，虎奶菇对pH的适应能力较强，菌丝在培养基初始pH 4.0～9.0均可生长，当pH为6.5时菌丝长势最好，生长速度最快，其次为pH6.0；当培养基初始 pH为4.5、5.0、5.5、7.0、7.5时，菌丝长势和生长速度无显著差异；pH为4.0时菌丝稀疏，生长速度最慢，长势最差。

图1 不同培养温度虎奶菇菌丝生长形态（培养5 d）

表3 培养基初始pH对虎奶菇菌丝生长的影响

2.3 培养基含水量试验结果

由表4可看出，在含水量50%～75%的培养基中菌丝均能够较好地生长。当培养基含水量为75%时，虎奶菇菌丝长速最快，达到3.25 mm/d；培养基含水量65%、70%和80%时菌丝生长速度差异不显著。菌丝在含水量65%的培养基上的长势最好，菌丝粗壮旺盛，洁白浓密。菌丝在含水量50%、55%、60%、75%的培养基上长势差别不大，菌丝白，较浓密。在含水量80%的培养基上长势最差，菌丝较稀疏，不均匀。由此可见，虎奶菇菌丝能生长的培养基含水量的范围较广，但最适培养基含水量为65%。

表4 培养料含水量对虎奶菇菌丝生长的影响

2.4 碳源试验结果

由表5可知，虎奶菇菌丝在10种碳源培养基上均能生长，在葡萄糖为碳源培养基上菌丝生长速度最快，其次为蔗糖、玉米粉、果糖。虎奶菇在乳糖、半乳糖、木糖、甘露糖培养基上长势差，菌丝生长速度不如对照，表明乳糖、半乳糖、木糖、甘露糖对虎奶菇菌丝的生长有一定的抑制作用。

表5 不同碳源对虎奶菇菌丝生长的影响

由表6可以看出，菌丝在含10 g/L葡萄糖培养基中生长最好，生长速度最快可达到9.67 mm/d。虎奶菇菌丝生长速度随着葡萄糖浓度的上升而下降，长势也变差，当葡萄糖浓度为40 g/L、50 g/L和60 g/L时，菌丝长势和生长速度差异不明显。

表6 不同葡萄糖浓度对虎奶菇菌丝生长的影响

2.5 氮源试验结果

由表7可以看出，虎奶菇菌丝在多数氮源培养基上均能生长，以麦芽浸粉为最佳，菌丝长势较强，生长速度快，其次为碳酸铵。以硫酸铵、硝酸铵为氮源时菌丝生长速度慢，长势差，在尿素培养基上菌丝不生长。

表7 不同氮源对虎奶菇菌丝生长的影响

由表8可以看出，虎奶菇菌丝在含4 g/L的麦芽浸粉培养基中生长最好，生长速度达到11.05 mm/d，长势强，培养6 d就可满皿，菌落均匀平整，洁白浓密。在含1 g/L麦芽浸粉培养基中菌丝生长最差。其他四个处理差异不显著。

表8 不同麦芽浸粉浓度对虎奶菇菌丝生长的影响

2.6 虎奶菇菌丝对培养主料适应性

由表9可以看出，虎奶菇菌丝在以纯桑枝为主料的（配方8）培养基上生长最快，生长速度达到5.11 mm/d，在以蔗渣和棉籽壳为主料（配方3）培养基上生长最慢，生长速度为2.90 mm/d。

表9 不同栽培原料对虎奶菇菌丝生长的影响

3 小结与讨论

虎奶菇属于高温型珍稀药食两用真菌，有关虎奶菇的生物学特性与栽培研究已有较多报道，但不同的研究报道之间存在较大差异。如：江枝和等[3]研究认为虎奶菇菌丝生长最适温度为32℃，《中国食药用菌学》记录虎奶菇菌丝40℃不生长[9]，阮瑞国[5]报道培养虎奶菇最适pH为7.5等。

研究结果显示虎奶菇菌丝最适培养温度35℃，40℃培养仍能生长，且长势良好，45℃不生长；最适培养基初始pH 6.5；最适碳源为葡萄糖，最适浓度10 g/L，随着葡萄糖浓度的增加，菌丝生长速度开始下降，长势也变差；最适氮源为麦芽浸粉，最适浓度4 g/L，在尿素为唯一氮源的培养基上不生长。栽培原料的生长适应性试验结果表明，菌丝在以纯桑枝为主料培养基上生长最快，在以蔗渣和棉籽壳为主料的培养基上生长最慢。

虎奶菇属高温菌，南方地区有适宜其生长的气候条件，此外，研究结果显示虎奶菇菌丝对南方地区常见的原料蔗渣、木薯渣、玉桂木屑、稻草、桑枝具有较好的适应性，表明南方地区具有很好栽培虎奶菇的原料基础。