消渴痹通胶囊含量测定

李晓兵，何 蕊，位 鸿，刘 鹤，成光宇，王秀阁*

（1.长春中医药大学附属医院中西医结合实验中心，长春 130021；

2.长春中医药大学药学院，长春 130117）

中药消渴痹通胶囊是由黄芪、桑枝、鸡血藤、豨莶草、全蝎等7 味中药组成的医院制剂，临床用于治疗糖尿病周围神经病变已有15年，具有益气活血，化瘀通络功效，既往研究证实能够改善 DPN 患者的临床症状。为控制该药品的质量，本文对其主要有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定研究，同时进行含量测定方法学验证，以便更加全面的控制样品质量，为临床用药提供一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备 SK8200HP 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），XMTD-8222 恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），BT125D 型十万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），高效液相色谱仪Waters 2695 液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：岛津Inertsil ODS-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2 材料与试药 3 批中试样品（批号为20171101、20171102、20171103），毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批号：111920-201606，供含量测定用，规格：20 mg，购于中国食品药品检定研究院），乙腈为色谱纯，水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件与系统适用性试验 1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm，5 μm）；2）流动相：乙腈-0.2%甲酸水，梯度洗脱；3）检测波长：260 nm；4）流速：1 mL/min。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量峰计算应不低于3 000。

时 间/min 乙腈 0.2%甲酸水 0 ～20 20-40 80-60 20 ～30 40 60

1.3.2 供试品溶液制备方法[1-2]取本品粉末 ( 过四号筛）约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流4 h，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

1.3.3 对照品溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，精密称定为5.05 mg，置10 mL 量瓶中，加甲醇定容到10 mL 容量瓶中，再精密吸取1 mL，加甲醇定容到10 mL 量瓶中，摇匀，得浓度为50.5 μg /mL 的溶液，再精密吸取5 mL，加甲醇定容到10 mL 量瓶中，摇匀，即得。（每1 mL 含毛蕊异黄酮葡萄糖苷25.25 μg/mL）。

2 结果与分析

2.1 专属性考察[3]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱型号：Inertsil ODS-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-0.2%甲酸水为流动相，梯度洗脱；检测波长为260 nm。

分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 mL，注入液相色谱仪，色谱图见图1。

图1 专属性考察（从上到下，毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、供试品、阴性）

可见在此条件下，毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰与其它峰分离较好，阴性对照液在相应位置无干扰。

2.2 线性关系考察 分别精密吸取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液2.0、4.0、8.0、10.0、15.0、20.0 mL，注入液相色谱仪测定，以进样量（mg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程：Y= 2 882 543.970X+38 794.520，r= 0.999 5，毛蕊异黄酮葡萄糖苷线性范围为0.050 5 ～0.505 0 mg，试验结果见表1、图2。

表1 线性关系考察

图2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线

2.3 稳定性试验 精密吸取对照品溶液和同一批供试品溶液各10 mL，分别在0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h进样，依法测定，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积积分值为指标，测定其稳定性，结果见表2。

表2 稳定性试验

结果：RSD 分别为0.82%和2.95%，稳定性良好，24 h 内测定结果可靠。

2.4 精密度试验 精密吸取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液10 mL，注入液相色谱仪，连续进样6 次，依法测定，记录峰面积积分值，计算，考察精密度，结果见表3。

表3 精密度试验

精密度考察结果显示：对照品溶液连续测定结果的RSD 为0.28%，表明仪器、方法的精密度良好。

2.5 重现性试验 精密称取同一批样品共6 份，按供试品溶液项下制备，依法独立测定，计算样品含量，以考察本法的重现性，结果见表4。

表4 重现性试验

以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为含量测定指标，考察本法的重现性，结果RSD为1.84%，平均含量为0.141 0 mg/g，表明该方法重现性良好。

2.6 准确度试验 精密称取已知含量同一批样品，取约1 g，共6 份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品0.161 6 mg，精密加甲醇至50 mL，密塞，称定重量，加热回流4 h，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表5。

表5 回收率试验结果

结果表明，平均回收率为99.16%，RSD 为2.15%，表明本法准确性较好，方法可行。

2.7 含量测定 取3 批中试样品，依法制备供试品溶液，每批2 份，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 mL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批中试样品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量，结果见表6。

2.8 含量限度的确定 根据本品3 批样品含量测定结果，含量测定数据平均为0.148 5 mg/g，含量限度按测定结果平均值的80%计算，结果为0.118 8 mg/g，本品规格为每个胶囊装0.32 g，故暂定：本品每个胶囊含黄芪以毛蕊异黄酮葡萄糖苷（C22H22O10）计，不得少于0.038 0 mg。

表6 3 批中试含量测定结果 mg/g

3 讨论

消渴痹通胶囊是由7 味中药组成的复方制剂，组成成分复杂，干扰多。在质量控制方面，尝试了多种样品提取及纯化方法，优化色谱条件，最后选定了本文中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定作为定量指标，本研究通过方法学验证，证明该方法有较好的线性、精密度和回收率，采用高效液相色谱法进行含量测定，能有效消除组分中其他类物质干扰，分离度较好，具有很好的准确性，可作为本品的质量控制方法。