APRIL及PGR检测指标在胃炎、胃癌中的诊断价值分析

潘 超， 冯永恒， 朱 宇， 倪绍忠

南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)普外科，江苏 南京 210006

胃炎患者的患病率难以统计，很多慢性胃炎患者可能无临床症状，许多因素均可以引起胃炎，包括幽门螺杆菌(H.pylori)感染、药物、胆汁反流、免疫因素等[1]。慢性胃部炎症反复发作，常伴有胃黏膜炎症及胃腺体萎缩，也常伴有肠上皮化生，慢性萎缩性胃炎已经考虑是一种癌前疾病[2]，血清胃蛋白酶原(PG)是胃蛋白酶的前体，分为PGⅠ和PGⅡ两种，目前许多研究考虑将PG作为胃癌及癌前疾病初筛的检测指标，PG能反映不同部位黏膜的功能及形态[3-6]。人血清增殖诱导配体(APRIL)是TNF家族的新成员，在多种肿瘤组织中高表达，它可以促进肿瘤细胞的增殖，防止肿瘤细胞凋亡[7-8]。本研究旨在观察APRIL及胃蛋白酶原的比值(PGⅠ/PGⅡ,PGR)对胃炎、胃癌的预测作用，研究APRIL在正常对照者、胃炎患者及胃癌患者的表达差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料本研究对象的选择为2014年1月至2016年12月南京市第一医院就诊并进行胃镜检查的患者，选取胃镜结果为正常、非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌患者各80例(术后所有患者均经病理组织学诊断确认)。入组病例在行胃镜检查前均详细询问病史、既往有胃部疾病病史、胃部手术病史和近1年存在胃部用药病史的患者均予以剔除，试验通过医院伦理委员会审批，所有入组患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 ELISA实验：抽取胃镜结果为正常、非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌患者的清晨空腹静脉血4 ml，以3 500 r/min离心6 min直至出现血清，收集血清置于-20 ℃的低温冰箱中。按照ELISA的检测说明书进行操作，检测4组研究对象血清中PGⅠ、PGⅡ、APRIL及H.pylori抗体的含量，并计PGR。

1.2.2 诊断价值分析：制作APRIL、PGR的受试者工作特征曲线图(receiver operating characteristic curve，ROC)，计算APRIL及PGR预测胃炎、胃癌的截断值，灵敏度(%)=真阳性例数/(真阳性+假阴性)例数×100%。特异度(%)=真阴性例数/(真阴性+假阳性)例数×100%。

1.2.3 组织标本的APRIL含量的测定：4组研究对象均在内镜下选取病灶处胃黏膜组织4～6块(正常对照者选取胃窦和幽门区域组织)，组织标本经液氮速冻后置于-70 ℃低温冰箱备用。按照说明书使用Trizol法提取组织总RNA，使用逆转录试剂盒(Takara)转录成cDNA，使用SYBR PCR试剂盒(Takara)在7500 RT-PCR系统上进行检测。使用引物如下，APRIL，正义：5′-ATTAACGCCACCTCCAAG-3′，反义：5′-CAGCAGATAAACTCCAGCAT-3′；β-actin，正义：5′-AGAGCCTCGCCTTTGCCGATCC-3′，反义：5′-CTGGGCCTCGTCGCCCACATA-3′。检测不同疾病状态下人胃黏膜组织中APRIL mRNA的表达情况。

2 结果

2.1 正常对照者、胃炎、胃癌患者的资料及血清中PGⅠ、PGⅡ、APRIL的检测值4组研究对象的年龄及性别差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。正常对照组、非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组、胃癌组PGⅠ水平逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)；正常对照组、非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组、胃癌组PGR也逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)；APRIL及H.pylori抗体的ELISA检测结果显示，正常对照组、非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组、胃癌组逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)；PGⅡ的检测水平在4组比较，差异无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

表1 正常对照者、胃炎、胃癌患者的资料及血清中PGⅠ、PGⅡ及APRIL的检测值Tab 1 Data of normal controls, gastritis and gastric cancer patients and the detection values of PG Ⅰ, PG Ⅱ and APRIL in serum

2.2 APRIL、PGR作为预测胃炎、胃癌的ROC曲线根据计算的结果，APRIL检测胃炎、胃癌的截断值为21.605 ng/ml，灵敏度为97.1%，特异度为96.3%(见图1)。PGR检测胃炎、胃癌的截断值为7，灵敏度为100%，特异度为92.9%(见图2)。

2.3 组织标本的APRIL mRNA表达水平的测定从4组样本中取材进行PCR检测APRIL mRNA的表达水平，其中胃癌组的表达水平显著高于非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组及正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(见图3)。

3 讨论

胃部疾病是临床最为常见的疾病之一，目前门诊越来越多的患者选择胃镜检查来了解胃部的情况，血清PG的检测可以间接反映胃部的情况，PG是胃蛋白酶的前体，包括PGⅠ和PGⅡ两个亚群，胃的黏膜腺体萎缩时PGⅠ有所下降，PGⅡ与胃底黏膜的状态有关，PGR的变化反映了胃黏膜腺体萎缩的情况[9]。在本次试验中，正常对照者、非萎缩性胃炎患者、萎缩性胃炎患者与胃癌患者的PGⅠ、PGR检测值存在差异，差异有统计学意义(P<0.05)，正常对照者的PG Ⅰ、PGR检测值是高于疾病状态下的检测水平。APRIL的检测值则相反，胃癌患者中APRIL的ELISA检测值最高，而正常对照者最低，4组间差异有统计学意义，预示着APRIL在胃部疾病的病情演变过程中也可能是动态变化的，有可能胃部疾病越严重，APRIL的ELISA的检测值就越高。

图1 APRIL作为预测胃炎、胃癌的ROC曲线Fig 1 The ROC curve of APRIL as the index for predicting gastritis and gastric cancer

图2 PGR作为预测胃炎、胃癌的ROC曲线Fig 2 The ROC curve of PGR as the index for predicting gastritis and gastric cancer

注：与胃癌组比较，*P<0.05。图3 组织标本的APRIL mRNA表达水平Fig 3 The expression level of APRIL mRNA in tissue samples

血液学检查比胃镜检查更为便捷、经济，且胃镜检查存在明显的不适反应。如果血液学检查能够较为准确、灵敏地初筛出胃部的疾病，那么将大大节省医疗资源，实验中根据APRIL及PGR的检测结果制作出了预测胃炎、胃癌的ROC曲线图，并且也计算出了截断值，两个预测指标的灵敏度及特异度均显示较高，当然，本实验的纳入统计人数有限，也存在明显的局限。

APRIL是TNF受体家族中的重要一员，广泛表达于淋巴细胞中，对于B细胞的存活、增殖、发育及分化存在影响，同时也能够调节T细胞的炎症反应、免疫应答等[10-11]。APRIL可以在多种器官的肿瘤组织中异常表达[12-13]，且与肿瘤组织的发生、发展密切相关[14]，既往研究显示，APRIL过表达的胃癌细胞生长更为迅速，而抑制APRIL表达后，肿瘤细胞的生长明显迟滞[7]。有研究显示，NF-κB信号通路与APRIL诱导的胃癌细胞的顺铂化疗抵抗有关[15]，胃癌患者APRIL mRNA的表达相比于正常对照者及胃炎患者明显增高，预示APRIL和胃癌之间存在紧密的联系，但目前APRIL与胃癌之间联系的信号通路尚不清楚。

ELISA检测同样表现出H.pylori抗体的检测与APRIL的检测值从正常对照组到胃癌组均逐步上升，两者可能存在相关性，需进一步的研究证实。

综上所述，对于胃部疾病的早期诊断可以使用ELISA检测PGⅠ、PGR、APRIL的方法，对于APRIL水平显著升高的患者，应警惕胃癌发生的可能。