蚕康宁防治柞蚕空胴病的室内试验效果初报

陈 卓 刘佳蔚 李文睿 刘 限 秦 利 夏润玺

(沈阳农业大学生物科学技术学院蚕学系，辽宁沈阳 110161)

柞蚕空胴病是柞蚕的主要病害之一，在各柞蚕区均有发生，特别是“二化一放”柞蚕区更易发生危害，一般发病率在30%～40%，重者可达70%[1]，甚至造成粒茧不收。

柞蚕空胴病的病原是柞蚕链球菌(StreptococcuspernyiSp. nov)[1]。柞蚕链球菌主要经取食进入柞蚕体内，主要寄生在柞蚕的中肠，破坏围食膜和中肠上皮细胞，引起柞蚕发病[1]。生产上通过选留无病种和卵面消毒，可以有效防止该病经卵面传染；但幼虫期经口食下传染一直没有得到有效控制，致使该病长期危害柞蚕。为此，人们做了大量工作，以求研制出能有效防治该病的药物。目前，在生产中应用的防治药物主要有保蚕宁和蚕得乐等[2]，但其防治效果不尽人意。为更有效地防治柞蚕空胴病，经多年研究，我们研制出了一种新的防治柞蚕空胴病药物，暂定名蚕康宁。本文总结了蚕康宁防治柞蚕空胴病的室内试验结果，以供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 柞蚕品种 沈黄2号[3]，由沈阳农业大学柞蚕研究所提供。

1.1.2 供试病原菌 柞蚕链球菌，由沈阳农业大学生物科学技术学院蚕学系提供，浓度1×107个/mL。

1.1.3 供试药剂 蚕康宁，沈阳农业大学生物科学技术学院蚕学系研制，按预备试验确定的使用浓度用清洁水配制成0.1 mg/mL的溶液；保蚕宁3号[4]，沈阳农业大学提供，按说明书标注的使用浓度用清洁水配制成0.13%的溶液；蚕得乐[5]，辽宁省蚕业科学研究所提供，按说明书标注的使用浓度用清洁水配制成3.33%的溶液。

1.1.4 主要试剂 蔗糖、蛋白胨、氯化钠、牛肉膏和琼脂粉，均为分析纯，宝生物工程(大连)有限公司产品。

1.2 试验方法

1.2.1 柞蚕链球菌固体平面培养基的制作 参考文献[1]的方法，称取蔗糖20 g、蛋白胨20 g、氯化钠5 g、牛肉膏5 g、琼脂粉20 g，先加约800 mL的蒸馏水充分搅拌，然后定容至1 000 mL，用1 mol/L的NaOH溶液调节pH=9.0，然后用高压蒸汽121 ℃灭菌20 min。待灭菌后培养基温度降至约60 ℃时，在超净工作台，将培养基分装到直径9 mm的培养皿中，每个培养皿25 mL培养基。待培养基凝固制成固体平面培养基后，置4 ℃冰箱冷藏备用。

1.2.2 抑菌试验 在无菌条件下，将1×107个/mL的柞蚕链球菌悬液用涂布器均匀涂布于柞蚕链球菌固体平面培养基上，每个培养皿200 μL。待菌液吸收后，取直径10 mm的小圆滤纸片，分别加50 μL预备试验确定使用浓度或说明书标注使用浓度(见1.1.3项)的蚕康宁、保蚕宁3号、蚕得乐药液后，平贴于培养基上，每个培养皿贴放分别加有蚕康宁、保蚕宁3号、蚕得乐3种药剂的滤纸片各1片，3片滤纸片均匀排布，重复3次。于28 ℃恒温培养24 h后测量抑菌环的大小，比较3种药剂的抑菌效果。

1.2.3 防治试验 按照常规饲育方法野外饲育柞蚕，3龄起蚕后分区，分别进行先施药后添菌(防病)和先添菌后施药(治病)2种防治试验，每个处理设3个重复区，每个重复区30头柞蚕。处理后置饲育袋中室内饲育，测定比较3种药剂的防治效果。

叶面添食柞蚕链球菌方法为将浓度为1×107个/mL的柞蚕链球菌悬液均匀涂于柞叶上，适当阴干后饲喂柞蚕，每小区所用柞叶量相等，并在6 h内食尽。叶面添食药剂方法为将标准使用浓度的药剂均匀喷洒于柞叶上，喷至叶面充分湿润而不滴，阴干后饲喂柞蚕，每小区用药体积和柞叶量尽量一致，并在6 h内食尽。

(1)先施药后添菌试验。先给3龄起柞蚕分别添食叶面喷洒蚕康宁、保蚕宁3号、蚕得乐3种药剂的柞叶6 h，以喷洒等量清水的柞叶作对照。然后分别用正常柞叶饲喂24 h，再分别添食叶面涂布柞蚕链球菌的柞叶6 h，之后饲喂正常柞叶，10 d后调查发病情况。

(2)先添菌后施药试验。先给3龄起柞蚕分别添食叶面涂布柞蚕链球菌的柞叶6 h，然后用正常柞叶饲喂24 h，再分别添食叶面喷洒蚕康宁、保蚕宁3号、蚕得乐3种药剂的柞叶6 h，以叶面喷洒等量清水的柞叶做对照，之后饲喂正常柞叶，10 d后调查发病情况。

各处理区处理后置饲育袋中室内饲育，饲喂正常柞叶10 d后，统计各区发病蚕头数，计算出各药剂处理区相对对照区的防治效果(保护率)。防治效果(%)=(对照区发病率-药剂处理区发病率)/对照区发病率×100。参照文献[6]的方法，对数据进行方差分析，比较差异显著性。

1.2.4 毒性试验 取蚕康宁标准使用浓度的5倍(0.5 mg/mL)、10倍(1.0 mg/mL)、20倍(2.0 mg/mL)的药液，从2龄第3天起连续进行叶面添食，以清水作对照，观察柞蚕是否有中毒现象，1周后调查柞蚕的体质量。

2 结果与分析

2.1 抑菌效果

用蚕康宁等3种药剂进行抑菌试验，结果如表1所示。蚕康宁的抑菌环最大，其平均直径为47 mm，约是保蚕宁3号(25 mm)和蚕得乐(24 mm)的2倍。保蚕宁3号和蚕得乐的抑菌环大小相近，保蚕宁3号的略大。可见，蚕康宁对柞蚕链球菌的抑制作用最强，明显优于保蚕宁3号和蚕得乐。

表1 蚕康宁等3种药剂的抑菌效果mm

药剂名称抑菌环直径重复1重复2重复3平均值蚕康宁46484747保蚕宁3号26242525蚕得乐24232524

2.2 防治效果

以蚕康宁等3种药剂对柞蚕空胴病进行防治试验，比较3种药剂的防治效果，结果如表2所示。对表2中的数据进行方差分析，如表3所示。药剂间F=276.96>F0.01=6.93，不同药剂间的防治效果均达极显著水平。施药先后间F=5.09>F0.05=4.57，先药后菌与先菌后药2种处理方法间的防治效果均达显著水平。药剂和施药先后间互作F=0.19

表2 蚕康宁等3种药剂的防治效果%

药剂名称先药后菌(“防病”)先菌后药(“治病”)重复1重复2重复3重复1重复2重复3蚕康宁76.6773.3373.3373.3366.6770.00保蚕宁3号43.3340.0040.0036.6733.3336.67蚕得乐33.3330.0036.6733.3330.0030.00

对3种药的防治效果采用新复极差法(SSR法)进行多重比较。查“Duncan’s新复极差测验SSR0.05和SSR0.01值表”，得到测验极差的平均数个数(P)为2和3时对应的α为0.05及0.01时的新复极差(SSR)值，并计算出对应最小显著极差(LSR)值，如表4所示。多重比较结果如表5所示，蚕康宁与保蚕宁3号、蚕得乐的防治效果间存在极显著差异。

表3 蚕康宁等3种药剂防治效果的方差分析

变异来源自由度离均差平方和均方F值F0.05F0.01药剂间25 453.652 726.83276.963.886.93施药先后间150.1150.115.094.579.33药剂和施药先后间互作23.701.850.193.886.93试验误差12118.159.85总变异1175 625.62

表4 蚕康宁等3种药剂防治效果不同极差平均数的最小显著极差(LSR)值

极差平均数(P)新复极差(SSR)值最小显著极差(LSR)值SSR0.05SSR0.01LSR0.05LSR0.0123.084.325.577.8233.234.555.858.24

表5 蚕康宁等3种药剂防治效果平均数的多重比较

药剂名称平均值差异显著性0.050.01蚕康宁72.22aA保蚕宁3号39.44bB蚕得乐32.22bB

保蚕宁3号与蚕得乐间差异不显著。说明蚕康宁的防治效果极显著优于保蚕宁3号和蚕得乐。

对3种药剂先药后菌和先菌后药的防治效果进行t检验，求得t=0.22>t0.05=2.12，P<0.05，添药先后之间差异显著，先添药的防治效果显著优于先添菌后添药。

2.3 毒性试验

蚕康宁以标准使用浓度的5倍(0.5 mg/mL)、10倍(1.0 mg/mL)和20倍(2.0 mg/mL)的药液给柞蚕连续添食1周，从表6可以看出，与对照相比未见明显差异，仅20倍标准使用浓度添食区，在第7 天发现极个别柞蚕行动略迟缓。可见，该药在标准使用浓度10倍以下对柞蚕安全。

表6 蚕康宁对柞蚕的毒性

药剂浓度添药天数1 d3 d5 d7 d7 d后柞蚕体质量/g蚕康宁5倍(0.5 mg/mL)液----1.05蚕康宁10倍(1.0 mg/mL)液----1.06蚕康宁20倍(2.0 mg/mL)液---极个别行动略迟缓1.05清水1.05

“-”表示与对照无差异。

3 结论

蚕康宁对柞蚕链球菌具有明显的抑制作用，抑菌环明显大于保蚕宁3号和蚕得乐，对柞蚕空胴病的防治效果明显优于现行防治柞蚕空胴病的药物。试验结果表明，先施药后添菌的防治效果明显优于先添菌后施药，即该药的预防效果好于治疗效果。蚕康宁对柞蚕的毒性试验表明，在使用浓度范围内该药对柞蚕安全。我们在柞园的试验结果也表明在3龄、4龄起蚕各喷药1次，即可有效防治柞蚕空胴病的发生，其效果优于现行防治柞蚕空胴病的药剂保蚕宁3号和蚕得乐，而且其对柞蚕是安全的。