关于卫生纸中细菌菌落总数测量不确定度评定的分析

贾 亮

（山西省产品质量监督检验研究院，山西 太原 030012）

1 引言

根据国家标准GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》，微生物指标一共有四项，其中大肠菌群、金黄色葡萄球和溶血性链球菌三项指标要求为“不得检出”；而细菌菌落总数（CFU/g）指标有具体规定，卫生纸≤600CFU/g，卫生纸原纸≤500CFU/g。细菌菌落总数的检验方法不同于食品、化妆品类的通用标准，目前有关细菌菌落总数测量不确定度评定的分析有关近百个期刊文章中，有超过85%的文章都是与食品相关的，有关卫生纸产品的文章还是空白。由于卫生纸产品细菌菌落总数检验方法在GB 20810-2006中的附录A中有具体的要求，因此，其细菌菌落总数的不确定度就需要单独考虑，由此文中针对这一问题进行了专门研究。

2 测量参数概述

主要仪器：电子天平（220g）、量筒（250mL）、移液器(1mL)、恒温培养箱。

参数：细菌菌落总数。

3 原理及方法

依据GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》中附录A.3.1细菌菌落总数的检测进行卫生纸中的细菌菌落总数的检验。在超静工作台上用无菌方法开启4个小包装，从中称量样品10g，剪碎后加入到200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。待上述样液自然沉降后取上清液做菌落计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂20mL，倒入平皿中，充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36℃培养温箱内培养48h。然后计算平皿上的细菌菌落数目[1]。

5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数A，稀释度为，卫生纸中的细菌菌落总数X按下式计算：

4 结果与讨论

4.1 测量不确定度的来源

依据上述卫生纸中细菌菌落总数的检测原理及测量模型，结合检测经验，分析卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度来源主要有：

（1）由卫生纸中细菌菌落总数测量的重复性引入的不确定度。

（2）由天平称量时引入的不确定度。

（3）由量筒量取生理盐水时引入的不确定度。

（4）由移液器移取样液时引入的不确定度。

以上不确定度来源，第一种来源可以用A类不确定度评定，后三种来源可用B类不确定度评定。

4.2 测量不确定度评定

4.2.1 A类不确定度评定

卫生纸在检测细菌菌落总数时，每个试样需要检测5份，计算其平均值后报出细菌菌落总数。本次报告中，由同一人员对15个样品进行重复性检测。用菌落总数的平均值直接计算标准偏差，因其数据的发散性较大，计算出的样本标准差会很大，不符合正态分布规律，所以对检验结果取其对数，然后计算出样本检验结果对数值的均值和重复性标准偏差，其数据处理过程见表1。

检验结果对数值的重复性标准偏差为：

检验结果对数值平均值的重复性标准偏差为：

表1 卫生纸中细菌菌落总数检测结果

4.2.2 B类不确定度评定

样品初始液制备过程时，使用220g的电子天平称取10g的样品，加入到用250mL量筒量取的200mL灭菌生理盐水中。根据JJG 1036-2008《电子天平》和JJG196-2006《常用玻璃量器》，220g电子天平最大允许误差为0.0001g， 250mL量筒的容量允许差为1.0mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为 0.0001/=0.00058g、1.0/=0.58mL。初始液向平皿转移过程中，使用1mL移液器量取1mL初始液至平皿中，根据JJG 646-2006《移液器》其容量允许差分别为0.015mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为0.015/=0.0087mL。

稀释过程中相对标准不确定度：

uB=[（0.00058/10）2+（0.58/200）2+ 0.00872]1/2=0.0100

4.3 合成不确定度

合成相对标准不确定度：ucr=［0.01512+0.01002 ］1/2=0.10。

合成标准不确定度：uC=2.74×0.10=0.27。

4.4 测量不确定度报告

5 结论

影响卫生纸中细菌菌落总数测量不确定度的因素较多，文中主要对卫生纸中细菌菌落总数测量不确定度的4个主要来源引入的不确定度进行了分析处理[2]。对A类和B类不确定度进行了评定，其中A类不确定度的标准偏差为0.0151；B类不确定度的标准偏差为0.0100；由此计算出合成不确定度为0.27。在做这个实验之前笔者查阅了近百篇相关论文，所做的这一结果基本为可接受范围，如果按标准正确操作，基本能够保证检验结果的正确性。通过这一实验也进一步完善了卫生纸的细菌菌落总数检验方法，大大提高了检验数据的准确性。