建立直观的洁净区洁净度浮游菌控制标准

文优芬

（广州白云山光华制药股份有限公司 广东 广州 510285）

洁净区是在药品生产企业最为常见的生产厂房设施，一般用于原辅料的取样、产品的生产、产品的微生物限度检验等。2010年版《药品生产质量管理规范》[1]中洁净区的定义为“需要对环境中尘粒及微生物数量进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留。”，第二百二十一条条款中还规定“必要的环境监测操作规程、记录和报告”、“（三）宜采用便于趋势分析的方法保存某些数据（如检验数据、环境监测数据、制药用水的微生物监测数据）；”。因此有必要建立相关的操作规程及控制标准对洁净区环境进行监测，一般称洁净区洁净度监测。

在2015年版中国药典四部《9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》[2]和2010年版《药品生产质量管理规范》指南中，也提到洁净区洁净度监测的项目和周期要求，一般包括悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物检测的全部项目或部分项目检测。

浮游菌的监测执行中华人民共和国国家标准GB/T16293-2010《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》[3]和2015年版中国药典四部《9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》。浮游菌的监测规程及控制标准应包括采样、检测、计算和评定、注意事项等等。

1.采样

一般使用空气浮游菌采样仪和培养皿进行采样，培养皿规格需与采样仪匹配、合适，培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基，按要求配好后备用。洁净区不同洁净度级别的最小采样量法规也有相应规定，见表1，应根据浮游菌检测的洁净区洁净度级别选择相应的采样量，并设置合适的采样仪空气流量。采样操作者应注意消毒采样仪的顶盖、转盘以及罩子的内外面，应检查培养皿的质量，放入和取出过程要注意人员卫生并避免粗放操作，以免影响检测结果。

表1 不同洁净度级别的浮游菌的最小采样量

2.检测

浮游菌的检测是将取样后的培养皿倒置于恒温培养箱中进行培养，在30～35℃培养不少于72小时。培养完后，取出，用计数方法得出各个培养皿的菌落数。注意每批培养基应有对照实验，一般每批可选定3只培养皿作对照培养。

3.计算和评定

3.1 法规规定

中华人民共和国国家标准GB/T16293-2010《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》规定的浮游菌的评定指标为浮游菌平均浓度，而不同洁净度级别有不同的判定标准，见表2，评定标准为每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准（即相应洁净度级别）中的界限。

表2 不同洁净度级别的浮游菌平均浓度评定标准

每个测点的浮游菌平均浓度的计算公式见公式1：

浮游菌平均浓度（cfu/m3）=菌落数/采样数×1000…………公式1。

示例1：某检测点为洁净度D级的洁净区，按表1规定采样量为250L，培养皿检测出的菌落数为3，套用公式1，该检测点浮游菌平均浓度则为：浮游菌平均浓度（cfu/m3）=3/250×1000=12cfu/m3。

该结果按表2评定，结果符合D级洁净度要求。

3.2 存在不足

通过以上的计算和评定过程，可以看出此过程较为复杂，存在一些不足。

（1）不能直接从培养皿检测出的菌落数判断检测结果是否符合评定标准（即表2），不够直观；

（2）对于每个检测点，都需要套用表1、公式1计算，再判断结果是否符合表2，计算工作量大，容易出错；

（3）计算和评定过程较为复杂，不利于人员培训，检测人员难以掌握，出错率增大。

（4）使用浮游菌平均浓度数据进行趋势分析，不够直观，不便于指导日常检测工作。

4.评定方法优化

为了减少计算工作，减少出错率，提高工作效率，本作者思索是否可以建立一个从每个培养皿的菌落数结果直接判断是否符合规定的控制标准呢？而不同洁净度级别的最小采样量（表1）和评定标准（表2）及计算公式（公式1）都已固定，每次采样为一个培养皿，经过思考和探索，可以将这些因素套入公式，进行转换，将浮游菌结果转换为cfu/皿，见示例2，得出一个新的、直观的不同洁净度级别的浮游菌菌落数判断标准，见表3。

示例2：

某检测点为洁净度D级的洁净区，按表1规定采样量为250L，按表2规定浮游菌平均浓度≤200（cfu/m3），套用公式1后如下公式2，计算出每个培养皿可检测出的菌落数限度为≤50cfu/皿。

菌落数/250×1000=浮游菌平均浓度（cfu/m3）≤200（cfu/m3）…………公式2。

表3 不同洁净度级别的浮游菌菌落数判断标准

5.结论

浮游菌控制标准将浮游菌平均浓度转化为每个培养皿可检测出的菌落数限度后，洁净度检测人员可以从每个培养皿的菌落数，直接判断该检测点是否符合相应的洁净度级别，不需要再套入公式计算，直观、便捷。且在年度洁净度趋势分析时，使用浮游菌菌落数数据进行趋势分析，在日常检测时能初步判断菌落数是否偏离趋势，更有利于指导洁净区洁净度监测，也符合2010年版《药品生产质量管理规范》条款“宜采用便于趋势分析的方法保存某些数据”的要求。