焦苍术中药炮制规范项目的测定研究*

程 华谢 冬李 健毕建洪洪志坚

(合肥师范学院 化学与化学工程学院，安徽 合肥 230061)

0 引言

随着屠呦呦的研究成果获得诺贝尔奖之后，中药吸引着大量研究者的注意，在世界舞台上扮演着越来越重要的作用.为充分发挥中药饮片的药效，保证药品生产加工阶段的质量，我国需要对中药行业的认知和质量标准规范进行完善，加强对中药饮片炮制规范的研究，使得中药产业实现跨越式发展.而苍术是我国传统中药材，具有燥湿健脾，祛风散寒，明目等功效，本文将对焦苍术中药炮制品的质量标准进行研究，以期为大力发展苍术的炮制产品提供数据支撑.

苍术为多年生的草本植物，根茎单生或者簇生，茎枝具有疏被蛛丝状毛，根状茎呈平卧或者斜升状，根茎粗长或者通常呈现疙瘩状，一般生多数等粗等长或者近似等长的不定根.[1]苍术通常生长在稀疏柞桦林和灌木林带山坡草地，灌丛及林间草丛当中，为稀见伴生植物.按照生长地理位置的不同可分类为茅苍术，北苍术和关苍术.常分布于黑龙江，辽宁，内蒙古，河北，山西，吉林，江苏，湖北省房县等地.其中江苏是茅苍术的主要产区，被称为主要的地道苍术产区，通常供应全国.[2-4]

苍术具有燥湿健脾，祛风湿的功效，它主治脘腹胀满，湿阻中焦，夜盲，泄泻，水肿，脚气痿蹙，风寒感冒，风湿痹痛，眼目昏涩等病症.其主要具有调整胃肠运动的作用，同时由于它能够抑制胃酸的分泌和增强胃黏膜保护作用，从而达到抗溃疡的目的.苍术也可以调节血糖(一般降低血糖)，它还具有抑菌和保肝的作用，同时具有较强的抗缺氧能力.苍术在大剂量使用时会抑制中枢神经系统，具有镇静的作用.[5-9]

苍术在炮制前，需要对其进行一般的处理.首先取其原药材，除去杂质，并且用水浸泡，洗净，润透，然后切厚片，干燥.最后筛去碎屑，进行炮制.目前市场上主要的几种苍术中药炮制品是按以下方法制成的：[10-12](1)制苍术：取苍术片，用米泔水浸泡数小时，取出，置于炒制容器内，用文火加热，炒干，筛去碎屑.(2)麸炒苍术：首先将锅烧热，向其中撒入麦麸，用中火加热.待冒烟时投入苍术片，不断翻炒，当炒至深黄色时，取出，筛去麦麸，放凉.苍术片每100 kg用麦麸10 kg.(3)焦苍术：取苍术片，放于炒制容器内，用中火加热，炒至褐色时，喷淋少量清水，再用文火炒干，取出放凉，筛去碎屑即可.

但参阅目前中国药典数据，虽然对相关药材如苍术有明确的质量标准数据，但是对其炮制品并没有确切的质量规范数据，在公开文献中也很少有这方面的资料.为此，本研究选取了不同产地不同批次的焦苍术中药炮制品，对其中药炮制规范项目进行测定研究，探讨其性状及质量标准数据如有效成分苍术素、水分、总灰分含量，望为进一步制定焦苍术中药饮片炮制标准提供参考数据资料.

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

样品：本研究收集的苍术采收地来源于江苏，湖北等地，采用了10批样品，代号分别为：a-湖北，b-黑龙江，c-辽宁，d-内蒙古，e-吉林，f-山西，g-河北，YP-JCZ-001-江苏，YP-JCZ-002-江苏，YP-JCZ-003-江苏.选取苍术(茅苍术)作为对照药材，来源于中国食品药品检定研究院，批号为120932-201407.选取苍术素为对照品，来源于中国食品药品检定研究院，批号为111924-201404.

试剂：纯化水、无水乙醇AR、浓盐酸AR、甲苯AR、丙酮AR、甲醇(色谱级)、石油醚(60℃～90℃)AR、甘油AR、硫酸AR、水合氯醛AR等.

1.2 主要仪器

高效液相色谱仪(型号：LC-20A，日本岛津公司);分析天平(型号：AL204，杭州康纳科技有限公司);六两装高速中药粉碎机(型号：LG-06A，瑞安市百信药机械厂);电热鼓风干燥箱(型号：GZX-9240MBE，上海博迅实业有限公司);显微镜(型号：BA-310，北京中仪光科科技发展有限公司);超声波清洗器(型号：700VDE，合肥金尼克机械制造有限公司);薄层电动点样器(型号：HAD8-DYQ-I，北京恒奥德仪器有限公司);循环水式真空泵(型号：SHZ-DⅢ型，河南省予华仪器有限公司);回旋式振荡器(型号：HY-5，江苏金城国胜实验仪器厂);马弗炉(型号：SX-4-10，天津泰斯特仪器有限公司)等.

1.3 实验方法

1.3.1 显微鉴别[13]

取焦苍术样品置于六两装高速中药粉碎机中粉碎，然后取粉末过3号筛，挑取少量粉末置于载玻片上，滴加两滴水合氯醛溶液(取水合氯醛50 g，加蒸馏水15 ml与甘油10 ml使溶解)和稀甘油试液(取甘油33 ml，加蒸馏水10 ml，再加樟脑少许或液化苯酚1滴)，不可加热，盖上载玻片，吸出气泡.显微镜下检视样品内部结构.

1.3.2 薄层色谱鉴别

2015版药典将苍术素作为苍术定性鉴别的指标成分，因此在薄层色谱定性鉴别中选取苍术素作为对照品.[14]

供试品溶液的制备：用电子分析天平称取本品粉末0.8 g，倒入贴好标签的锥形瓶，用10 ml移液管移取甲醇l0 ml，用超声清洗器超声处理15分钟，过滤，取过滤液作为供试品溶液.同法制对照药材溶液.

对照品溶液的制备：取苍术素对照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg对照品溶液.

将电动点样器平稳放在工作台上，插上电源，打开开关，预热，当上升温度缩回，再设定到所定温度，输入供试品溶液6μl、对照药材溶液6μl、对照品溶液2μl和打点数12等一系列参数在电脑程序上，然后用甲醇润洗微量注射器2次，而后吸取供试品溶液10次、照药材溶液1次、对照品溶液1次，每次吸都得用甲醇润洗，并排除气泡，针头擦拭干净，然后将微量注射器放在点样针尖，然后点击运行按钮，打点.而后将硅胶G板分别在以石油醚(60℃～90℃)-丙酮体积配比为9∶2展开剂的展缸里竖直展开，大约跑版跑到板最上端1 cm处，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，并加热至显色明晰.

1.3.3 水分测定(甲苯法[15])

甲苯法：取供试品适量(相当于含水量1～4 ml)，精密称定，置蒸馏烧瓶中，加甲苯200 ml，必要时加入干燥、洁净的沸石数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满收集管的狭细部分.将烧瓶置电热套中缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴.待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在收集管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离(可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察).检读水量，并计算供试品中的含水量(%).每批样品分别测试两次，取其平均值.

1.3.4 总灰分测定

将焦苍术粉碎，使能通过2号筛，混合均匀后，取供试品2～3 g，放置于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.0001 g)，缓缓炽热，注意避免燃烧.实验操作时，首先将样品放进马弗炉里于150℃炭化2小时，待炭化完全，再升高温度到600℃计时灼烧5小时，实验中发现样品出现灰化不完全现象，通过往坩埚里加入适量热水，在电炉上蒸干后再放入马弗炉里在600℃条件下灼烧5小时，逐渐升高至600℃，使其完全灰化并至恒重.根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(%).如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铁溶液2 ml，使残渣湿润，然后置于电炉上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化.每批样品分别测试两次，取其平均值.

1.3.5 有效成分苍术素的含量测定

1.3.5.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂

仪器设备：岛津LC-20A液相色谱仪

色谱柱：岛津InertSustain C18柱5 um(250 mm*4.6 mm)

检测波长：340 nnm;流速：1 ml/min;

柱温：35℃

流动相：甲醇-水(79∶21)

1.3.5.2 样品前处理与有效成分测定[16]

对照品溶液的制备：取苍术素的对照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg的溶液.

供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2 g，置锥形瓶中，移取甲醇50 ml，塞紧，称重，用超声清洗器超声处理1小时，放冷，再称重，用甲醇补重，摇匀，过滤，取续滤液，即得.

测定时分别移取对照品溶液、试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得.

1.3.5.3 线性关系考察

精密称取苍术素对照品4.01 mg，用甲醇溶解，而后稀释到200 ml，摇匀，即得母液.精密吸取1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪测定.

1.3.5.4 稳定性实验

精密吸取对照品溶液10μl，依照各自色谱条件，分别在0、15及19小时进样一次.

1.3.5.5 重复性实验

取苍术素对照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成苍术素对照品溶液(0.0254 mg/ml)，取该对照品6份，每份进样10μl.

2 结果与讨论

2.1 性状描述

关于焦苍术性状的描述，其颜色范围基本属于黄褐色，再结合10批焦苍术样品实物性状，将本品性状描述为“黄褐色的饮片”.将本品摊开，嗅其气味，本品香气较淡，味辛、苦，故性状描述为“香气较淡，味辛、苦”.将其打粉，粉末呈黄棕色.图1是焦苍术的样品及其粉末图.

图1 焦苍术样品及其粉末Fig.1 The sample and its powder of coked rhizoma atractylodis

2.2 样品鉴别

2.2.1 显微鉴别

本品粉末呈黄棕色.其内部结构中纤维大多成束，呈长梭形，木质化，细胞壁厚.石细胞较多，有长方形、多角形，细胞壁厚.菊糖常见，呈纹理喷射状.导管多见(见图2).

图2 焦苍术粉末显微图Fig.2 The microscopic images of coked rhizoma atractylodis

2.2.2 薄层色谱

取10批焦苍术样品，按照前述薄层色谱鉴别方法进行实验，鉴别结果如下图3所示.日光下检视，发现供试品色谱与苍术对照药材，苍术素对照品色谱在G板的相同位置显示相同颜色的斑点，见图3.说明10批供试品中都含有苍术中的特征成分苍术素，鉴定供试品是焦苍术样品.

图3 日光下焦苍术薄层色谱图Fig.3 The thin-layer chromatography image of coked rhizoma atractylodis under sunlight

2.3 水分测定

分别取焦苍术粉末，按照前述甲苯法对10批样品进行水分测定，见表1.结果平均值为10.382% ，最大值为16.025%，最小值为5.505%.鉴于本品属于苍术的炮制品，受炮制过程影响，本品比原药材水分含量大;其次可看出不同批次产品，由于全国各地土壤湿度、气候等条件不同，导致由于生长环境不同带来的水分含量数据有较大差异.总体来说焦苍术炮制品水分含量的规定限度应不得过17.0%.

表1 10批焦苍术样品水分测定数据Tab.1 The results of moisture of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.4 总灰分测定

分别取焦苍术粉末，按照前述总灰分测定方法对10批样品进行总灰分测定进行实验，结果见表2.其结果平均值为8.316%，最大值为13.115%，最小值为4.370%;可看出不同产地不同批次产品，由于其生长环境不同，总灰分含量也有较大差异.总体来说焦苍术炮制品总灰分含量的规定限度应不得超过14.0%.

表2 10批焦苍术样品总灰分测定数据Tab.2 The results of total ash of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5 有效成分苍术素的含量测定

苍术主要含挥发油，约占5%～9%，倍半萜类和聚乙烯炔成分是苍术中最主要的两大类活性成分，前者主要的指标性成分为β-桉叶醇，后者则为苍术素.[16]2015版药典已将苍术素作为苍术定性鉴别的指标成分，故在焦苍术炮制品中依然选择苍术中主要成分苍术素作为含量测定指标，可以较好地控制本品的内在品质.

2.5.1 有效成分含量限度的确定

按照前述高效液相色谱操作条件，对10批样品苍术素的含量进行测定，结果见表4.由于生长环境及可能炮制过程处理上的差异，致使不同样品有效成分含量有较大差别.根据10批样品测定数据，结果平均值为0.364%，最大值为0.582%，最小值为0.083%，根据测定结果建议本品苍术素含量限度暂定为：本品按干燥品计算，含苍术素计，不得少于0.08%.

表3 10批焦苍术样品有效成分含量测定数据Tab.3 The results of effective component of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5.2 线性关系考察

精密称取苍术素对照品4.01 mg稀释至200 ml，加甲醇使溶解稀释至刻度，摇匀即成母液.精密吸取上述对照品溶液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl注入液相色谱仪，按前述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值取l g为底的对数值为纵坐标，对照品进样量取l g为底的对数值为横坐标，绘制标准曲线，苍术素回归方程y=1.0063x+7.064，R2=0.9998，测量结果详见表4及图4，表明苍术素在0.02005～0.50125μg之间呈良好线性.

表4 线性关系测定结果Tab.4 The results of linear relation

图4 线性关系图Fig.4 The image of linear relation

2.5.3 稳定性实验

精密吸取对照品溶液10μl，按照各自色谱条件，分别在0、15及19小时进样一次，结果如表5所示，表明对照品溶液中各成分在19小时内稳定性良好.

表5 稳定性实验结果Tab.5 The results of stability

2.5.4 重复性实验

取苍术素对照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成苍术素对照品溶液(0.0254 mg/ml)，取该对照品6份，每份进样10μl，峰面积及统计结果见表6.实验结果表明该方法重现性较好.

表6 重复性实验Tab.6 The results of repeatability

3 结语

本研究工作结合了中国药典的研究方法，使用显微鉴别和薄层色谱分析法对焦苍术做定性鉴别.同时对不同产地、不同批次的10批焦苍术样品进行水分、总灰分、苍术素有效成分含量进行测定.结果显示，由于生长环境及可能炮制过程处理上的差异，致使不同样品质量数据有较大差别.为统筹兼顾全国市场上的焦苍术品质特征，规定焦苍术炮制品水分含量应不得超过17.0%，总灰分含量应不得超过14.0%，苍术素含量按干燥品计算含量应不得少于0.08%.希望这些研究结果能为进一步制定焦苍术中药饮片炮制标准做参考.