奥卡西平对儿童病毒性脑炎继发癫痫患者的炎性因子、免疫功能及氧化应激的影响

夏顺刚 卢 红

(淄博市妇幼保健院儿科,淄博255029)

癫痫是神经元的异常放电导致神经功能短暂失调的慢性疾病，具有反复发作等特点。癫痫中有一部分是因为中枢神经系统感染引发。儿童病毒性脑炎则是中枢神经系统感染常见的疾病，儿童中枢神经系统感染后的免疫炎症反应在儿童癫痫发生和进展过程中起重要作用。临床及动物实验研究也证实了机体免疫功能紊乱是癫痫患者常见的症状，且许多学者认为机体的免疫系统参与了癫痫的发病过程[1-4]。因此，免疫治疗癫痫可能也是有效治疗癫痫的途径。目前，治疗癫痫的主要手段仍然是药物治疗。奥卡西平是一种新型抗癫痫药物，对于局灶性发作癫痫具有疗效好、副作用小、药物保留率高、耐药性低等特点[5]。本研究旨在了解奥卡西平对儿童病毒性脑炎继发癫痫患者治疗效果、免疫功能、炎性因子和氧化应激功能的影响。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1临床资料 选取于2014年 4 月至2017年10月我院的新诊断癫痫儿童患者59例作为实验组，其中男27例，女32例，年龄2.6～15岁，平均(6.88±7.11)岁。其中全身性发作28例，局部性发作31例。根据国际抗癫痫联盟的2014诊断标准进行筛选。本次研究由我院医学伦理委员会批准。另取同期收集的健康儿童35例作为对照。

1.1.2入选标准和排除标准 入选标准：①首次诊断为癫痫，无抗癫痫药物服用史；②无明确器质性病变；③有过病毒性脑炎病史。排除标准：①有进展性神经系统疾病或精神疾病患者；②奥卡西平过敏者；③心肝肾功能不全或器官衰竭；④合并全身感染或其他疾病。

1.2方法

1.2.1治疗方案 给予奥卡西平口服起始浓度为5～10 mg/kg体重，1周后每天剂量增加5 mg/kg体重，剂量维持在20～30 mg/kg体重，持续给药8个月；期间不得给予其他抗癫痫药物。

1.2.2观察指标及检测方法 ①治疗前6周癫痫发作的次数和治疗后半年月发作次数比较。分为完全控制、显效、有效、无效及恶化[6]。②在治疗前后抽取患者及对照人群血液，空腹肘静脉血3 ml，2 ml血离心后取上清，置于-20℃保存待检。ELISA检测IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α表达，immunoway ELISA试剂盒购自北京致力生科科技有限公司。BD 全自动多色分析仪分析CD3+、CD4+及CD8+等T细胞亚群，试剂由BD配套并通过北京致力生科科技有限公司订购。1 ml血进行机体活性氧(Reactive oxygen species，ROS)、丙二醛(Malondi-aldehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)检测，试剂盒购自南京检测生物技术研究所。

2 结果

2.1治疗效果 经奥卡西平治疗后，随访观察6个月，发现患者病情完全控制的有18例(全身性发作6例，局限性发作12例)，占30.51%；显效的有16例(全身性发作9例，局限性发作7例)，占27.11%；有效的有15例(全身性发作6例，局限性发作9例)，占25.42%；无效为10例(全身性发作7例，局限性发作3例)，占16.95%；没有发现经奥卡西平治疗后病情继续恶化的患者。

2.2治疗前后病毒性脑炎继发癫痫患者血清炎性因子的变化情况 实验组患者血清中的炎性因子IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α在治疗前后都高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后患者的IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α水平均显著低于其治疗前，并且差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.3治疗前后病毒性脑炎继发癫痫患者T淋巴细胞亚群的变化情况 患者治疗前后的外周血CD3+、CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群与健康组人群比较发现：无论治疗前或治疗后患者的CD3+、CD4+T细胞数量均低于健康组人群，并且治疗前患者外周血的CD3+、CD4+T细胞数量均低于治疗后；CD8+T细胞数量则在患者治疗前后的外周血中均高于健康组，同时发现治疗后的CD8+T细胞数量低于治疗前(见图1)，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.4治疗前后病毒性脑炎继发癫痫患者氧化应激指标的变化情况 治疗前和治疗后患者的氧化应激指标ROS、MDA及SOD与健康组人群比较发现：无论治疗前或治疗后患者的ROS、MDA均高于健康组人群，并且治疗前患者的ROS、MDA均高于治疗后；SOD则在患者治疗前后低于健康组，同时发现治疗后的SOD高于治疗前，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表1 治疗前后患者与健康人群炎性因子的比较(pg/ml)

Tab.1 Comparison of inflammatory factors in patients and controls before and after treatment(pg/ml)

GroupsTimeIL-1βIL-8IL-6TNF-αControl group(n=35)6.75±0.324.08±0.405.57±0.537.45±0.91Exprimental group(n=59)Before treatment26.73±4.031)26.09±2.351)30.66±3.641)42.05±5.781)After treatment11.22±2.881)2)11.04±2.211)2)15.69±1.951)2)21.34±2.751)2)

Note：Compared to the control group,1)P<0.05;compared to before treatment,2)P<0.05.

表2 治疗前后患者外周血T淋巴细胞亚群与健康人群的比较(%)

Tab.2 Comparison of peripheral blood T lymphocyte subsets in patients before and after treatment and controls(%)

GroupsTimeCD3+T cellCD4+T cellCD8+T cellControl group(n=35)68.75±4.3547.11±2.3920.12±1.09Experimental group(n=59)Before treatment53.21±3.711)28.44±2.141)33.12±3.361)After treatment62.11±2.891)2)39.12±2.871)2)25.53±2.881)2)

Note：Compared to the control group,1)P<0.05;compared to before treatment,2)P<0.05.

表3 治疗前后患者氧化应激指标与健康人群的比较(%)

Tab.3 Comparison of oxidative stress indexes in patients before and after treatment and controls(%)

GroupsTimeROSMDA(μmol/ml)SOD(U/ml)Control group(n=35)4 536.32±298.325.62±1.95161.27±19.89Experimental group(n=59)Before treatment10 210.58±400.901)20.12±2.531)66.74±15.121)After treatment6 855.41±354.121)2)11.11±3.361)2)96.12±17.511)2)

Note：Compared to the control group，1)P<0.05；compared to before treatment，2)P<0.05.

图1 治疗前后T淋巴细胞亚群流式检测结果Fig.1 Results of Flow test for T lymphocyte subsets before and after treatment

3 讨论

癫痫是一种中枢神经系统感染后常发的疾病，其发病机制极为复杂。越来越多的研究认为免疫功能紊乱是其发病机制之一[7]。儿童病毒性脑炎是常见的中枢神经系统感染。 中枢神经系统病毒感染后干扰了神经免疫系统的正常作用，促使脑实质、脑膜的炎症改变，并导致神经元或神经胶质细胞凋亡、坏死，最后引发局部中枢神经组织的变性。这既有病毒本身对神经细胞的破坏又有免疫介导的炎症损害参与其中，这些损害后遗症容易导致癫痫的发生[8]。另外，炎症的发生能促使机体处于氧化应激状态，氧化应激又会引发炎症反应。这种闭环式的促进作用能够加剧损伤。有研究显示脂质过氧化及自由基反应在癫痫发生与发展的过程中起到了重要作用[9，10]。综上所述，细胞因子、氧化应激等均参与了癫痫的病理过程。因此，了解神经免疫功能及氧化应激在儿童病毒性脑炎继发癫痫中的作用，为治疗和预防此类疾病奠定基础。

奥卡西平是一种抗癫痫的新型药物，对部分性发作类型治疗效果明显。它是卡马西平的酮基衍生物，具有高抗惊活性，能较好地抑制强制性痉挛，起效快，及时阻断神经元异常放电，稳定镇静。奥卡西平对儿童毒性小，对肝脏损害弱，不会影响儿童的生长发育。奥卡西平单药治疗可取得与卡马西平、丙戊酸钠相当的临床疗效[11]。奥卡西平对儿童病毒性脑炎继发癫痫患者的免疫系统及氧化应激反应临床研究相对较少，本研究旨在探讨奥卡西平在儿童病毒性脑炎继发癫痫患者的治疗作用及对其免疫功能和氧化应激等生化指标的影响。

本研究表明在奥卡西平治疗后，总有效率高达83.05%，说明奥卡西平治疗儿童病毒性脑炎癫痫可消除或缓解患者的临床症状，降低发作频率，有效控制癫痫复发。

已有的研究证实儿童癫痫发作可激活神经细胞并刺激神经胶质细胞释放大量炎症介质，包括IL-1β、IL-6、TNF-α。儿童癫痫患者的海马中检测到IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性指标，而在正常对照组的标本中未发现[12-15]。还有研究发现儿童癫痫发作时,IL-1β、TNF-α可诱导IL-8的表达，引起免疫细胞在组织内浸润、积聚和释放相关的生物活性物质进而导致组织的炎症反应。本研究结果证实了儿童病毒性脑炎继发癫痫患者机体中的炎性因子表达、免疫功能异常现象，检测发现儿童癫痫患者IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α表达增高，利用奥卡西平治疗儿童病毒性脑炎癫痫患者能有效降低机体中的这些炎症因子的水平。免疫功能改变可以从细胞免疫改变和体液免疫两方面来阐述，T淋巴细胞不仅是细胞免疫的承担者也对体液免疫有较强的调节作用，而 CD3+、CD4+、CD8+T细胞则是反映T淋巴细胞免疫功能的重要指标。在我们的研究中发现CD3+、CD4+T细胞在儿童病毒性脑炎癫痫患者数量低于健康儿童，经奥卡西平治疗后患者的CD3+、CD4+T细胞数量高于治疗前；而CD8+T细胞在患者血液中数量高于健康者，治疗后CD8+T细胞数量比治疗前有所降低。这些结果说明奥卡西平不仅治疗病毒性脑炎癫痫患者的发病，也有效降低了癫痫病引发的炎症和改善系统免疫功能。

炎症反应增强会导致氧化应激的发生，导致机体ROS异常增多。研究证实ROS在癫痫病理过程中发挥重要作用，癫痫发作时ROS 含量显著增加、SOD明显降低[16，17]，脂质氧化产物MDA增高。本研究发现儿童病毒性脑炎继发癫痫患者的ROS、MDA水平高于健康人群，而SOD活力低于健康儿童；经过奥卡西平治疗后儿童癫痫患者的ROS、MDA含量低于治疗前，而SOD高于治疗前。

综上所述，奥卡西平不仅能从症状上治疗儿童癫痫，也能有效降低儿童癫痫引发的炎症和免疫功能紊乱及降低氧化应激水平，从另一个角度有效保护神经系统并发挥治疗和减轻癫痫症状的作用。