皖南地区脑卒中人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性特点分析

栾 迪，丁言运，王雅平，许慧芳，赵守财

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 1.神经内科；2．药学部，安徽 芜湖 241001)

脑卒中包括出血性卒中和缺血性卒中，是中国第一大死亡原因[1]。5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因定位于常染色体1p36.3，编码分子质量为77 ku的MTHFR作为限速酶参与甲基循环，当rs1801133(C677T)变异型存在时，编码的MTHFR具有热不稳定性，影响甲基循环从而导致高同型半胱氨酸血症，而高同型半胱氨酸血症是脑卒中的一个独立风险因素[2-5]。皖南地区脑卒中人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性特点分析尚未见报道。

1 资料与方法

1.1 数据和分组 从弋矶山医院药剂科获取2016年5月～2018年3月所有行脑卒中风险基因检测患者的基本信息和检测结果，排除门诊患者，然后阅读剩余患者的住院病历，排除非皖南地区和非脑卒中患者，将患者分为两组：缺血性脑卒中组和出血性脑卒中组。

1.2 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件对数据进行统计分析，群体代表性检测应用Hardy-Weinberg遗传平衡检验。检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 纳入研究样本的基本特征 本项研究共计纳入552例样本，年龄为(65.15±13.34)岁；男性358例，女性194例，其中合并高血压病337例，2型糖尿病79例，心脏病88例。缺血性脑卒中组514例，年龄为(65.43±13.2)岁，男性332例，女性182例，其中合并高血压病309例，2型糖尿病76例，心脏病85例；出血性脑卒中组38例，年龄(61.39±14.78)岁，男性26例，女性12例，其中合并高血压病28例，2型糖尿病3例，心脏病3例。

2.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验 两组样本基因型均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律见表1。

表1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

组别rs1801133(C677T)基因型野生型杂合型纯合型χ2P缺血性脑卒中实际值1652481010.122> 0.05缺血性脑卒中理论值162.49253.0298.49出血性脑卒中实际值171740.000> 0.05出血性脑卒中理论值17.1116.784.11

2.3 皖南地区脑卒中人群rs1801133(C677T)基因型分布 皖南地区脑卒中患者人群rs1801133(C677T)基因型频率如表2所示。

表2 皖南地区脑卒中人群rs1801133(C677T)基因型分布

组别例数rs1801133(C677T)基因型[n(%)]野生型杂合型纯合型出血性脑卒中3817(44.74)17(44.74)4(10.52)缺血性脑卒中514165(32.10)248(48.25)101(19.65)合计552182(32.97)265(48.01)105(19.02)

3 讨论

脑卒中病因复杂，危险因素包括血管性、内分泌性、心源性、代谢性、血液性和不良生活方式等可改变的危险因素，以及老年、男性、出生时低体质量、种族和家族史等不可改变的危险因素，脑卒中作为多基因遗传病，MTHFR是致病基因之一[6-7]。MTHFR是叶酸代谢通路的关键酶，其将体内同型半胱氨酸转化为蛋氨酸从而使血液中同型半胱氨酸保持在较低水平[2]。rs1801133(C677T)是MTHFR相关基因多态性位点之一，其杂合型和纯合型变异型表达的亚甲基四氢叶酸还原酶活性仅分别为野生型的65%和30%，从而导致机体出现高同型半胱氨酸血症[3]。rs1801133(C677T)基因多态性是高同型半胱氨酸血症的强预测因子，高同型半胱氨酸血症损伤血管内皮功能、增加脑内氧自由基含量、促进血小板聚集以及降低一氧化氮的生物利用度，是脑卒中发生的重要风险因素之一，rs1801133(C677T)基因多态性与脑卒中发生可能存在关联[8]。

与脑卒中相关的基因异常在不同遗传背景的个体中可能并不相同[9]，rs1801133(C677T)变异频率在不同地域和种族之间亦存在较大差异，T等位基因在欧洲、南美洲和东亚人中出现频率较高，而在非洲人中出现频率较低[10-11]；欧洲地区T等位基因频率由北向南渐进增高，而中国则是由南向北渐进增高[12-13]。本研究结果表明皖南地区脑卒中人群rs1801133(C677T)变异型频率和T等位基因频率结果为出血性脑卒中组低于缺血性脑卒中组，提示不同类型脑卒中患者发病因素中，rs1801133(C677T)变异型和T等位基因所占权重可能有所差异。

大多数外国族群rs1801133(C677T)变异型与缺血性脑卒中发生率之间具有相关性[14]；许多文献荟萃分析[15-16]亦得出rs1801133(C677T)变异型增加缺血性脑卒中发生率；一项纳入12 390例缺血性脑卒中患者和16 274例对照的荟萃分析研究显示rs1801133(C677T)T突变增加至少30%缺血性脑卒中发生率[17]。英国人rs1801133(C677T)变异型仅与腔隙性脑梗死具有相关性，与大动脉性和心源性缺血性脑卒中无相关性[18]；在中国人群中，有研究表明rs1801133(C677T)变异型在健康人群和脑卒中患者中存在显著差异[19-21]，rs1801133(C677T)变异型是缺血性脑卒中危险因素，但亦有不同意见[21]。皖南地区人群rs1801133(C677T)变异型与缺血性脑卒中发生率是否具有相关性，尚未见报道。

rs1801133(C677T)变异导致的高同型半胱氨酸血症损伤脑血管内皮功能，可能是出血性脑卒中发生的风险因素之一[8]，瑞典人群的研究显示，突变纯合型发生出血性脑卒中的风险是野生型的3.6倍。Hu等[22]研究发现成都地区汉族人群rs1801133(C677T)变异型与出血性卒中发生率之间无相关性，Hu等又纳入九项中国各地人群研究总计1030例脑出血患者和1474例对照进行荟萃分析，得出结论为rs1801133(C677T)变异型增加中国人出血性卒中发生率[22]。皖南地区人群rs1801133(C677T)变异型与出血性脑卒中发生率是否具有相关性，尚未见报道。

rs1801133(C677T)基因多态性与脑卒中发生是否相关，学术界尚未有定论，如新加坡、马来西亚、突尼斯和波兰等国家人群的研究表明rs1801133(C677T)T等位基因增加脑卒中发生风险[23-24]，而土耳其、赞比亚和巴西等国家人群的研究却表明二者之间无相关性[25]，即便是对同一国家人群的研究，其结果也可能不相一致[19-21]。导致这些研究结果不一致的原因尚不明确，可能与研究纳入样本量的大小、不同种族遗传背景的不同、研究对象摄入叶酸或维生素B12量的多少以及社会经济因素的差异有关。

本项研究纳入的脑卒中患者，男性多于女性，中位年龄65.15岁，符合其他脑卒中流行病学研究结果，能代表脑卒中人群。罹患脑卒中高风险人群行MTHFR基因检测后，对rs1801133(C677T)变异型尤其是TT表型的人群执行更为严格的一级预防，如加强戒烟戒酒方面知识的宣教，更为规律稳定地控制血压、血糖和血脂，以及应用维生素B12、甲钴胺和叶酸以弥补因rs1801133(C677T)变异表型导致的MTHFR生物活性降低，可能会降低这部分人群罹患脑卒中的概率，但尚需要大量前瞻性研究来证实。

本研究是一项回顾性研究，研究对象为脑卒中人群，且仅研究了rs1801133(C677T)变异型和T等位基因频率，是本研究的不足之处。拟进一步深入研究皖南地区人群rs1801133(C677T)基因型频率以及T等位基因频率，进而研究皖南地区人群rs1801133(C677T)变异型或T等位基因与脑卒中发生率是否具有相关性。总之，皖南地区rs1801133(C677T)等位基因与脑卒中发生之间的关系，还需要随机对照、前瞻性、大样本的深入研究。