根痛平胶囊和根痛平片中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法研究及续断的投料情况分析

钟建青，袁航，殷士宁，尹丽华，傅超，单秀明，张春辉，吴爱英

(青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266071)

根痛平系列制剂处方中续断占比较重，属于臣药。续断来源为川续断科植物川续断的干燥根，具“补肝肾，强筋骨，续折伤”的功能，属于临床常用中药[1]。续断中皂苷类成分含量较高，其中川续断皂苷Ⅵ作为三萜皂苷类的主要活性成分其药理活性已被广泛研究，研究证实其具有抗骨质疏松、保肝降脂、保护神经、保护心肌等药理作用，抗骨质疏松作用尤为显著，与续断药典功效中的“补肝肾、强筋骨、续折伤”相吻合[2-5]。

我院承担了根痛平胶囊与根痛平片两个品种2017年度国家药品评价抽验工作，合计共收到根痛平胶囊244批次，涉及16家生产企业；根痛平片83批次，涉及3家生产企业。我们参照《中国药典》2015年版中续断药材的标准，结合近年来多篇文献研究，采用高效液相色谱(HPLC)测定方法考察了本次国评样品中川续断皂苷Ⅵ的含量[6-8]。由于各生产企业间处方量和添加辅料略有不同，生产工艺也不同，分别执行企业注册标准，所有执行标准均未建立关于续断含量测定的方法，因此本研究建立了HPLC法测定根痛平胶囊/片中川续断皂苷Ⅵ含量的方法，主要通过此项考察摸清原材料的质量及企业投料情况，以期更深入有效的协助市场流通药品的监管。

1 仪器与试剂

Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；BP-211D电子天平(北京赛多利斯)；超声波清洗器(深圳市洁盟清洗设备有限公司)。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)。川续断皂苷Ⅵ(中国食品药品检定研究院；批号：111685-201506)。乙腈为色谱纯(德国默克公司)，其余试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。根痛平胶囊方法学考察选用陕西东泰制药有限公司生产的样品，批号：5L02。根痛平片方法学考察选用承德燕峰药业有限责任公司生产的样品，批号：16914012。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(27∶73)为流动相；检测波长为212 nm。理论板数按川续断皂苷Ⅵ峰计算，应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备 取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含约700 μg的溶液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液适量，加甲醇制成每1 mL中含约140 μg的溶液，作为对照品使用液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液(片剂)。取本品10粒内容物，精密称定，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液(胶囊剂)。

2.4 专属性试验 按处方比例及工艺配制缺续断的阴性样品，按供试品溶液制备方法，制备阴性对照溶液。阴性样品溶液在川续断皂苷Ⅵ色谱峰保留时间相对应的位置上无色谱峰干扰，表明根痛平胶囊(片)中的其他药物组分对川续断皂苷Ⅵ的测定无干扰，见图1。

2.5 线性关系考察 精密量取川续断皂苷Ⅵ对照品储备液适量，加乙醇制成每1 mL含川续断皂苷Ⅵ分别为30、60、90、110、140、210、280 μg的溶液作为对照品。取对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以浓度(μg·mL-1)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明川续断皂苷Ⅵ在30～280 μg·mL-1的范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=2 029.357 0X+3.688 5，R2=0.999 7。

2.6 精密度试验 取140 μg·mL-1的川续断皂苷Ⅵ对照溶液按“2.1”项下的液相色谱条件连续测定6次，由峰面积计算精密度，RSD为0.61%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.7 重复性试验 取根痛平胶囊样品(陕西东泰制药有限公司，批号：5L02)，按供试品溶液制备方法制备，重复测定6次，川续断皂苷Ⅵ的平均含量为1.12 mg/片，RSD为0.67%(n=6)。取根痛平片样品(承德燕峰药业有限责任公司，批号：16914012)，按供试品溶液制备方法制备，重复测定6次，川续断皂苷Ⅵ的平均含量为0.93 mg/片，RSD为1.52%(n=6)。表明此方法重复性良好。

2.8 添加回收率试验 取根痛平胶囊样品(陕西东泰制药有限公司，批号：5L02，川续断皂苷Ⅵ含量为1.12 mg/粒，每粒装0.5 g)0.25 g，精密加入浓度为0.708 3 mg·mL-1的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液1.0 mL，照供试品溶液的制备方法制备6份回收率测试溶液，测定，外标法计算回收率，结果见表1。取根痛平片样品(承德燕峰药业有限责任公司，批号：16914012，川续断皂苷Ⅵ含量为0.93 mg/片，每片重0.3 g)0.25 g，精密加入浓度为0.708 3 mg·mL-1的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液1.0 mL，照供试品溶液的制备方法制备6份回收率测试溶液，测定，外标法计算回收率，结果见表2。

表2 根痛平片添加回收率试验结果

2.9 样品检测结果 本次国评抽到的根痛平胶囊16家生产企业均执行不同的标准，16个现行标准共计4种处方量(处方1～4)，每种处方量下又有多种规格(0.35、0.4、0.5、0.3、0.37 g/粒)。由于不同企业生产工艺和处方量各不相同，为了直观、准确的分析川续断皂苷Ⅵ在不同生产企业中的含量，最终我们根据不同的处方量，分别以mg·g-1为单位拟定川续断皂苷Ⅵ含量参考线度值，以避免规格和处方量叠加后产生过多头续的限度值，不利于整体分析。本次国评抽到的根痛平片3家生产企业执行同一标准，处方量唯一，片剂均为薄膜衣片。以mg·g-1为单位拟定根痛平片中川续断皂苷Ⅵ含量参考线度值，有利于整体分析。

根据各个企业执行标准中根痛平胶囊和根痛平片的处方及生产工艺，样品取样量为1 g时，平均每1 g样品中含续断饮片的量分别为0.27 g(片剂处方，胶囊处方1、胶囊处方2)、0.38 g(胶囊处方3)和0.49 g(胶囊处方4)。《中国药典》2015年版规定，续断饮片“含川续断皂苷Ⅵ不得少于1.5%”， 以1.5%作为续断中川续断皂苷Ⅵ的含量底限，按照50%转移率计算，结果见表3。

表3 根痛平胶囊和根痛平片不同处方参考线度值计算表

拟定上述限度值作为结果分析参考限度值，考察企业续断的投料情况。结果244批次根痛平胶囊中有187批次低于此限度。83批次根痛平片中21批次低于此限度。有2家企业3批次样品未检出川续断皂苷Ⅵ，提示企业未投料或投料用续断质量差。

A.未检出川续断皂苷Ⅵ的样品色谱图 (企业A)；B.未检出川续断皂苷Ⅵ的样品色谱图 (企业A)；C.未检出川续断皂苷Ⅵ的样品色谱图 (企业B)图2 未检出川续断皂苷Ⅵ的根痛平胶囊样品高效液相色谱图

3 讨论

本次研究建立了HPLC法测定根痛平胶囊和根痛平片中川续断皂苷Ⅵ的含量，该方法专属性强、简单、准确、方便、重复性好，能有效用于测定根痛平胶囊和根痛平片中川续断皂苷Ⅵ的含量，为根痛平系列制剂的质量标准提高提供理论依据。

我们拟定了川续断皂苷Ⅵ含量参考限度值，全面系统的考察了本次国家性评价抽检的所有生产企业续断的投料情况，结果有2家企业3批次样品未检出川续断皂苷Ⅵ，提示个别企业存在疑似未投料或投料所用续断饮片质量差的问题。

综上，我们需要尽快开展根痛平系列制剂的标准提高工作，将处方中的重要药味的标志性成分含量测定作为监测项目。日常检验中，标准检验项目较少的品种多留心多探索，才能发现隐藏的药品生产质量问题，堵住监管漏洞。