藤茶中二氢杨梅素胶囊剂的制备工艺研究

杨 杰，陈仕学，姚元勇，张孟琴，邢明明，卢忠英

(铜仁学院 材料与化学工程学院，贵州 铜仁 554300)

藤茶系葡萄科蛇葡萄属的一种藤本植物，又称甜藤茶、茅岩霉茶[1]。近些年，通过许多专家学者对藤茶的化学成分研究，表明蛇葡萄植物内含有大量的黄酮物质，其中的二氢杨梅素是藤茶中主要的一种黄酮类化合物[2]，具有预防酒精肝、降低肝癌的发病率等作用[3]，临床应用潜力较大。目前文献报道中，对二氢杨梅素的含量测定、理化性质、生物活性、药理作用、提取纯化方法、化学修饰等方面的研究较多[4]，但是对二氢杨梅素药物剂型的研究较少，目前有对二氢杨梅素片剂、二氢杨梅素胃内浮片的研究，没有对二氢杨梅素胶囊剂的研究。二氢杨梅素胶囊剂具有药物的生物利用度较高、提高药物稳定性等优点，本文采用正交实验对处方进行筛选，以累积浓度为指标，采用紫外分光光度法考察二氢杨梅素的累积浓度，制备二氢杨梅素胶囊剂，得到二氢杨梅素胶囊剂的最优处方。

1 实验试剂、仪器

本实验所用的主要实验试剂如表1。

表1 实验试剂、规格及产地

表1(续)

本实验所用的主要实验仪器如表2。

表2 实验仪器、型号及生产商

2 实验方法

2.1 二氢杨梅素的提取纯化及标准曲线的制备

2.1.1 二氢杨梅素的提取纯化

材料预处理：取30 g藤茶，干燥、粉碎后用90 mL石油醚浸泡3 h，抽滤之后用蒸馏水洗去藤茶中的石油醚，烘干之后提取。

提取：取藤茶粗粉，加入乙醇(95%)300 mL，水浴加热1 h(60℃),抽滤、滤渣重复提取3次，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩旋干得到藤茶粗品。加入300 mL蒸馏水并水浴加热至80℃，冷却、静置过夜。抽滤、45℃恒温烘干[5-6]。

纯化：利用藤茶乙醇提取物(浸膏)中主要成分与次要成分在石油醚、正己烷、乙酸乙酯、乙醇及水分散系中的分配系数不同，制备出具有高纯度的二氢杨梅素(>95%，乳白色粉末)，该方法制备的纯化制剂，可联合水重结晶1次，获得具有光谱纯级别的二氢杨梅素标准品(纯度>98%，纯白色晶体)，整体工艺简单，制得的成品纯度高。

2.1.2 标准曲线的制备

精密称取二氢杨梅素10.00 mg，至10 mL容量瓶加甲醇稀释至刻度、摇匀，得到1.00 mg/mL的对照品溶液[7]，分别吸取上述对照品溶液0.00、0.05、0.10、0.15、0.20 mL分别指10 mL容量瓶中，加3 mL的AlCl3(5%)，甲醇定容，314 nm处测吸光度，以二氢杨梅素浓度c为横坐标，吸光度值A纵坐标制作标准曲线。

2.2 单因素实验

2.2.1 胶囊囊材的选择

选用海藻多糖胶囊壳、木薯淀粉胶囊壳、明胶胶囊壳三种分别作为囊材[8]，二氢杨梅素2.5 g、羧甲基纤维素钠0.5 g、乳糖7 g、适量蒸馏水，采用研配法将物料混合均匀过80目筛备用，把胶囊体和胶囊冒分别倒在排列板上，震荡摇晃，使胶囊体和胶囊冒按要求排列整齐，冒板放在一旁备用，拿下排列板，将药粉倒在体板上，用括粉板将药粉均匀的刮进胶囊体中，一直刮满胶囊体，将中间板扣在冒板上，然后把它放在体板上，用力向下压到底，清除不符合要求的胶囊[9]。以人工胃液为溶出介质，用崩解时限测试仪测崩解时限。

2.2.2 胶囊填充剂的选择

选用乳糖、糊精、淀粉三种分别作为填充剂[10]，二氢杨梅素2.5 g、羧甲基纤维素钠0.4 g，适量蒸馏水，按2.2.1制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊。以人工胃液为溶出介质[11]，检测其累积浓度，累积浓度计算公式=(Ax/As×Cs×V×稀释倍数/取样量) ×标示量×100。

2.2.3 填充剂用量的选择

选用糊精作为填充剂，二氢杨梅素2.5 g、羧甲基纤维素钠0.4 g，适量蒸馏水，糊精的含量分别为7、7.5、8、8.5、9 g，按2.2.1制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊。以人工胃液为溶出介质[12]，检测不同含量糊精的累积浓度。

2.2.4 胶囊粘合剂的选择

选用明胶、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素三种分别作为黏合剂[8]，二氢杨梅素2.5 g、糊精7 g过80目筛备用，按2.2.1制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊。检测羧甲基纤维素钠的累积浓度。

2.2.5 粘合剂用量的选择

选用羧甲基纤维素钠黏合剂[9]，二氢杨梅素2.5 g、糊精7 g、羧甲基纤维素钠的含量分别为0.3、0.35、0.4、0.45、0.5 g。过80目筛备用，按2.2.1制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊，检测不同含量羧甲基纤维素钠的累积浓度[11]。

2.2.6 二氢杨梅素最佳用量的选择

选用明胶胶囊壳、糊精7 g、羧甲基纤维素钠0.4 g、二氢杨梅素的量分别为2、2.5、3、3.5、4 g过80目筛备用[12]，按2.2.1制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊，检测二氢杨梅素的累积浓度。

2.2.7 正交实验

以糊精用量(7、8、9 g)、羧甲基纤维素钠用量(0.3、0.4、0.5 g)、二氢杨梅素用量(2、2.5、3 g)为考察因素， 采用正交表 L9(33)设计实验，以累积浓度为考察指标，确定最佳处方。

表3 因素水平表

2.2.8 验证试验

以二氢杨梅素2.5 g，羧甲基纤维素钠0.4 g，糊精8g，按2.2制备胶囊剂的制备方法制备胶囊，清除不符合要求的胶囊。按2.2.2检测方法检测累积浓度，重复检测5次。

3 结果与分析

3.1 单因素实验

3.1.1 标准曲线制作

按照2.1.1的方法制备二氢杨梅素标准曲线为A=0.2975x+0.0008，R2=0.9995。

图1 二氢杨梅素标准曲线

3.1.2 胶囊囊材的选择

根据2.2.1的操作，对胶囊囊材进行选择，结果见表4。

表4 不同胶囊囊材

由表4可知，根据《中国药典》2015版第四部崩解时限检查法(胶囊剂)规定：除另有规定外，取供试品6粒，按片剂的装置与方法进行检查。硬胶囊应在30 min内全部溶解[13]。因此，选用明胶胶囊壳作为最佳胶囊囊材。

3.1.3 胶囊填充剂的选择

图2 胶囊填充剂的选择

根据2.2.2的操作，对胶囊填充剂进行选择，结果见图2。

由图2可知，相同条件下糊精的累积浓度在60 min时的累积浓度远大于淀粉和乳糖的累积浓度，且药物的累积浓度越大，药物释放的程度就大，人体吸收药物的量也大，治疗效果越好[14]。因此，选择糊精作为最佳填充剂。

3.1.4 胶囊填充剂用量的选择

根据2.2.3的操作，对胶囊填充剂用量进行选择，结果见图3。

图3 糊精的最佳用量选择

由图3可知，相同条件下糊精的用量为8 g时累积浓度远大于其他用量的累积浓度，用量多了浪费原料，少了得不到预期治疗效果，因为不同糊精的量与药粉之间的药理作用不同，治疗效果不同。因此，糊精的最佳用量为8 g。

3.1.5 胶囊粘合剂的选择

根据2.2.4的操作，对胶囊粘合剂进行选择，结果见图4。

图4 胶囊粘合剂的选择

由图4可知，羧甲基纤维素钠累积浓度大于其他明胶和羟丙基纤维素的累积浓度，药物的累积浓度与粘合剂的类型有关，不同粘合剂与药粉之间的作用不同，药物的溶出程度不同，药物的累积浓度不同，人体吸收药物的量不同，以至于治疗效果不同。因此，选择羧甲基纤维素钠为粘合剂。

3.1.6 胶囊粘合剂用量的选择

根据2.2.5的操作，对胶囊粘合剂用量进行选择，结果见图5。

图5 胶囊粘合剂用量的选择

由图5可知，羧甲基纤维素钠的用量为0.4 g时，累积浓度远大于其他用量的累积浓度，不同羧甲基纤维素钠的量与药粉之间的作用不同，用量多了浪费原料，少了得不到预期治疗效果，因为不同二氢杨梅素的量与药粉之间的药理作用不同，治疗效果不同。因此，羧甲基纤维素钠的最佳用量为0.4 g。

3.1.7 二氢杨梅素的最佳用量选择

根据2.2.6的操作，对胶囊粘合剂用量进行选择，结果见图6。

图6 二氢杨梅素的最佳用量选择

由图6可知，当二氢杨梅素的用量在2.5 g是的累积浓度最大,二氢杨梅素的用量多了浪费原料，少了达不到预期治疗效果，因为不同二氢杨梅素的量与药粉之间的药理作用不同，治疗效果不同。因此，二氢杨梅素的最佳用量为2.5 g。

3.2 正交实验

表4 正交实验结果

表5 方差分析表

由表4和表5分析可知，极差(R)越大，对二氢杨梅素胶囊剂的累积浓度影响就越大越主要，二氢杨梅素用量A的极差为2.003，糊精用量的极差为0.812，羧甲基纤维素钠的用量的极差为5.981。所以，三种因素对二氢杨梅素胶囊剂的积累浓度影响显著性大小为C>A>B，即整个实验过程中羧甲基纤维素

钠的用量对二氢杨梅素胶囊剂的累积浓度影响最为显著，二氢杨梅素用量次之，糊精用量几乎没有影。综合上述分析，得到最佳方案为A2B1C3。即当二氢杨梅素用量为2.5 g，糊精用量为7 g，羧甲基纤维素钠用量为0.5 g时为最佳方案。

3.3 验证试验

表6 验证试验

相同条件下的不同胶囊的累积浓度不同，原因可能有：①胶囊之间有重量差异；②正交实验使用的胶囊与验证实验使用的胶囊储存环境温度不同；③试验操作误差。

4 结论

二氢杨梅素资源丰富，来源广泛，具有很好的应用前景。本文对二氢杨梅素胶囊剂进行了制备。胶囊剂能提升药物的生物利用度、可延缓药物的释放和定位释药、能掩盖药物不良嗅味或提高药物稳定性、可弥补其他固体剂型的不足等优点[15]。实验中以藤茶为原料，以丙酮提取纯化得到二氢杨梅素(95%)，研配法制备二氢杨梅素胶囊剂，以人工胃液模拟胃的内部环境对二氢杨梅素胶囊的处方进行研究，以累积浓度为指标，采用紫外分光光度法对二氢杨梅素胶囊剂的主药用量、填充剂类型及其用量、粘合剂类型及其用量进行考察[5]，因为药物在体内的释放浓度与粘合剂、填充剂的类型及用量有关，不同辅料与药粉之间的作用不同，药物释放的程度不同[16]，人体吸收药物的量不同，以至于治疗效果不同，以崩解时限为标准对囊材进行选择，因为不同囊材与药物的药理作用不同[17]，制备二氢杨梅素胶囊剂，得到糊精作为填充剂、羧甲基纤维素钠作为粘合剂，选择出来最佳的处方为:二氢杨梅素纯化提取物2.5 g、糊精的量(填充剂)7 g、羧甲基纤维素钠(粘合剂)0.5 g时为最佳处方，得到的最大累积浓度为21.950，提升了二氢杨梅素胶囊剂的溶出度，提高了二氢杨梅素的其生物利用度，提升了其治疗效果[18]。