库车县规模化场牛球虫感染情况及种类鉴定

张宽宽 ，齐 萌 ，2，赵爱云 ，2，邢金明 ，黄忠武 ，王 甜 ，2，徐春艳 ，2

（1.塔里木大学动物科学学院，新疆 阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，阿拉尔 843300；3.库车县兽医站，新疆 库车 842000）

牛球虫病是由艾美耳属（Eimeriaspp.）的多种球虫引起的常见肠道疾病，呈世界性分布［1］。目前，世界范围内已鉴定的牛艾美耳球虫有21种，公认的有15种，我国报道的有13种，其中，牛艾美耳球虫（Eimeria bovis）和邱氏艾美耳球虫（E.zuernii）致病性较强，而其他球虫相对致病性较弱［2-3］。球虫主要危害犊牛，临床上以腹泻为主要症状，可导致其体重减轻，生长发育受阻，还可引起犊牛免疫受损，导致易共患其他疾病［4］；成年牛通常作为携带者，无临床症状，是犊牛感染球虫的感染源［5］。牛球虫病感染普遍，在饲养密度高的环境下容易感染。为了解新疆库车县牛球虫流行情况，分别对该县1个规模化奶牛场和1个规模化肉牛场进行球虫感染情况调查和种类鉴定，以期为该县牛球虫病的防治提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

于2018年5月分别对新疆库车县1个规模化奶牛场（240头）和1个规模化肉牛场（400头）共计98头牛，用一次性塑料手套经直肠采集或在排便后立即采集新鲜粪便样本，每份20～30 g，分别装入洁净采样袋中，记录信息，带回实验室，置4℃冰箱待检。其中奶牛粪便样本37份，肉牛粪便样本61份。

1.2 卵囊的检查和感染强度测定

取粪便样本5～10 g，采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查球虫卵囊；经饱和蔗糖溶液漂浮法鉴定为球虫卵囊阳性的样本，采用麦克马斯特计数法［6］测定每克粪便中的球虫卵囊数（OPG）。

1.3 球虫卵囊形态学观察

收集镜检球虫卵囊呈阳性的粪便样本每份10～15 g，置干净的塑料桶内加适当自来水，用玻璃棒充分搅拌均匀后，加自来水经40目和80目不锈钢筛子依次过滤至250 mL离心管内。混悬液以3 000 r/min离心5 min，弃上清，反复3次，使沉淀物均在离心管内。在沉淀物中加入150 mL饱和蔗糖溶液，用玻璃棒充分搅拌均匀，以3 000 r/min离心3 min，取洁净烧杯加入400 mL自来水，用自制吊环蘸取含有球虫卵囊的表面液膜至烧杯中充分稀释饱和蔗糖溶液；反复离心和蘸取表面液膜5～8次。将烧杯中的混悬液倒至4个50 mL离心管中，3 000 r/min离心5 min，弃上清，反复3次，直至沉淀物均在离心管内。再加入35 mL自来水至离心管内，搅拌均匀后，3 000 r/min离心5 min，弃上清，以充分洗去沉淀物中的蔗糖溶液。2.5%重铬酸钾溶液冲洗4个离心管内含球虫卵囊的沉淀物至4个锥形瓶内，置水浴恒温振荡器中，调至适当转速，28℃条件下培养，至85%以上卵囊完全孢子化，置4℃冰箱保存。球虫卵囊孢子化时，因锥形瓶内重铬酸钾溶液蒸发，期间添加28℃自来水，以保持重铬酸钾溶液浓度。

取孢子化后的卵囊液制片后，显微镜下观察400个孢子化完全的卵囊的形态结构。根据卵囊、孢子囊和子孢子的大小和形态，有无内外残体等特征，参照文献［3-4，7］进行种类鉴定。

1.4 统计学分析

采用χ2检验比较不同养殖场和不同年龄段牛球虫感染率的差异，P＜0.05时具有统计学差异。

2 结果与分析

2.1 牛球虫感染情况

98份新鲜粪便样本中，40份呈球虫卵囊阳性，总感染率40.82%。其中37份奶牛粪便样本中，20份呈球虫卵囊阳性，感染率54.05%；61份肉牛粪便样本中，20份呈球虫卵囊阳性，球虫感染率32.79%；不同养殖场牛球虫感染率无统计学差异（P＞0.05），见表1。

不同年龄段牛均有球虫感染，小于6月龄牛球虫感染率最高，为78.57%（11/14）；7～12月龄和1岁以上牛球虫感染率分别为52.17%（12/23）和27.87%（17/61）。不同年龄段牛球虫感染率统计学差异极显著（P＜0.01）。奶牛和肉牛的球虫感染率均随年龄增长而呈递减趋势，见表1。

2.2 感染强度测定

对40份球虫阳性粪便样本中的卵囊进行计数，平均OPG值为964.62个，最大OPG值为15 600.00个。奶牛粪便样本中，球虫卵囊平均OPG值为773.50个，最大OPG值为2 600.00个，以7～12月龄牛球虫卵囊OPG值最高，为1 566.67个；肉牛粪便样本中，球虫卵囊平均OPG值为1 117.50个，最大OPG值为15 600.00个，以小于6月龄牛球虫卵囊OPG值最高，为5633.33个。见表1。

表1库车县不同规模化场牛球虫感染情况

2.3 球虫种类鉴定

通过对400个孢子化球虫卵囊进行种类鉴定，共鉴定出8种艾美耳球虫，分别是椭圆艾美耳球虫（E.ellipsoidalli，114/400）、牛艾美耳球虫（Eimeria bovis，95/400）、柱状艾美耳球虫（E.cylindrica，73/400）、邱氏艾美耳球虫（E.zuernii，58/400）、亚球形艾美耳球虫（E.subspherica，25/400）、阿拉巴艾美耳球虫（E.alabamensis，13/400）、奥博艾美耳球虫（E.auburnensis，12/400）和加拿大艾美耳球虫（E.canadensis，10/400），以椭圆艾美耳球虫、牛艾美耳球虫、柱状艾美尔球虫和邱氏艾美耳球虫为主要感染种类。

3 讨论

张龙现等［7］报道，郑州8个奶牛场223头牛球虫总感染率29.60%，犊牛、青年牛和成年牛感染率分别为63.04%、40.00%和 9.82%；蒋业慧等［8］报道，石河子 6 个奶牛场482头牛球虫总感染率21.33%，以5～6月龄犊牛感染率最高，为 32.91%，0～3月龄、1～2岁、2～3岁和3～5岁牛球虫感染率分别为12.31%、26.74%、2.82%和6.30%；本次调查发现，库车县2个牛场牛球虫总感染率40.82%，以小于6月龄牛球虫感染率最高，为78.57%，球虫感染率均随年龄增长而呈递减趋势，与上述报道相一致。而倪晓婷等［2］报道，宁夏3个奶牛场426头1月龄至1岁牛球虫总感染率27.46%，以7～12月龄奶牛感染率最高，为52.43%，1～3月龄和4～6月龄牛感染率分别为21.67%和17.99%；本次调查与倪晓婷等［2］调查结果存在差异，可能与地理位置、气候条件、采样季节和饲养管理等因素有关。

不同年龄段牛感染球虫后，感染强度存在差异。本次调查发现，球虫卵囊平均OPG值为940.00个，感染强度最大OPG值为15 600.00个，随年龄增长，OPG值呈递减趋势，与倪晓婷等［2］、张龙现等［7］、蒋业慧等［8］和赵其平等［9］调查结果相一致。球虫病多发于犊牛和青年牛，成年牛通常感染率和感染强度较低，但可作为犊牛感染的传染源。一方面犊牛免疫力较低，容易引起发病，随着年龄增长免疫力逐渐加强，球虫感染率和感染强度逐渐降低；另一方面，犊牛感染球虫后，可能产生特异性免疫力，一定程度上可抵抗球虫的再次感染。

倪晓婷等［2］调查发现，宁夏地区奶牛感染的球虫以柱状艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫和牛艾美耳球虫为优势感染种类；赵其平等［9］调查发现，上海地区奶牛感染的球虫以牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫为优势感染种类；马玉等［10］调查发现，新疆北疆地区奶牛感染的球虫以邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美尔球虫和牛艾美耳球虫为优势感染种类。本次调查发现，库车县牛感染的球虫以椭圆艾美耳球虫、牛艾美耳球虫、柱状艾美尔球虫和邱氏艾美耳球虫为优势感染种类，与上述报道相一致，表明我国不同地区奶牛球虫感染的主要种类不存在明显的地理隔离特征。

牛球虫病通常不表现临床症状，流行和发病与年龄、温度、季节、卵囊摄入量、饲养管理、卫生条件和动物健康状态等多因素有相关性。集约化养殖一定程度上增加了牛球虫病发病的风险，应加强犊牛饲养管理和牛场的环境卫生管理。