双波长激光联合曲安奈德注射对鸡冠血管的作用

李彦锋，魏芳，周自广，马晓焕，勾爱丽，姚亚琼，陈文娇（郑州市第一人民医院，河南郑州450004）

血管瘤是血管内皮细胞异常增殖所致，多见于婴幼儿期，目前发病原因尚不清楚[1］，血管瘤可发生于体表任何部位，瘤体通常在1岁内快速增长[2］，如果治疗不及时，可致严重的功能障碍或容貌破坏，从而影响患儿身心健康[3-4］。目前临床上治疗血管瘤的方法很多，但均有一定的局限型，本研究以雄性莱亨鸡鸡冠代替血管瘤的动物模型，动态观察鸡冠经曲安奈德注射液注射、双波长激光照射及两者联合应用后血管组织的病理改变，探讨3种方法对血管瘤的影响及机制，为血管瘤的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与设备 美国Candela公司生产的Cynergy双波长激光[即585 nm脉冲染料激光及1 064 nm钇铝石榴石晶体（Nd：YAG）激光］治疗仪，曲安奈德注射液（浙江仙琚制药股份有限公司，规格：50 mg/支，产品批号：20170609），Olympus光学显微镜CX31（日本Olympus公司）。

1.2 实验动物及分组 6个月龄雄性莱亨鸡30只，体质量1.5～2.0 kg，由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司实验中心提供。将动物随机分为A、B、C共3组，每组10只，鸡冠色泽红润，颜色均匀，鸡冠厚度一般为6～10 mm，笔者以未处理侧鸡冠作为自身对照。A组：曲安奈德注射实验组，用2%利多卡因注射液+等量0.9%氯化钠注射液配置至曲安奈德浓度为1 g/L，抽取药液，局部常规消毒，以5号头皮针紧贴鸡冠边缘水平刺入，回抽无血或少量血液后将药物缓慢注入，作用面积呈直径1 cm的圆形区域，药量达到表面颜色稍变白即可，每次注入药量约0.5 mL，注射后按压3 min。B组：双波长激光实验组，常规消毒后，取脉冲染料激光波长585 nm，取脉宽6ms、功率6J/cm2，Nd：YAG激光波长1064nm，取脉宽15 ms、功率25 J/cm2，光斑直径 3 mm，光斑重叠率＜10%，作用面积同A组，时间3～5 sec，使鸡冠表面呈紫红色即可。C组：联合应用实验组，先给予曲安奈德注射，间隔30 min后，给予双波长激光照射，步骤及方法同前。

1.3 观察指标

1.3.1 一般情况 各组观察治疗第1、3、7、14天实验动物一般情况及鸡冠大体变化。

1.3.2 HE染色 3组不同方法实验后，分别在第3、7、14天切取各组鸡冠组织块，10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，片厚3～4 μm，取部分切片HE染色，行组织病理学观察。实验结束后，选取各组鸡冠组织块，每张切片随机取5个中倍视野（10×10），计算毛细血管平均数，根据下面公式，得出毛细血管减少率。

毛细血管减少率=（对照侧毛细血管平均数实验侧毛细血管平均数/对照侧毛细血管平均数）×100%

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，全部数据用均数±标准差（±s）表示，采用完全随机设计资料单向方差分析及配对t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 实验动物状况良好，观察期内无死亡。A组鸡冠实验后第1天组织轻度水肿，出现灰白色斑，第3天、第7天、第14天变化不明显；B组鸡冠实验后第1天组织水肿，出现灰白斑，个别出现水疱，第3天表面组织轻度坏死结痂，第7天痂皮逐渐脱落，第14天创面愈合；C组实验后第1天组织高度水肿，颜色苍白，局部肿胀，个别出现水疱，第3天表面组织坏死结痂，第7天，痂皮脱落，第14天颜色变淡，质地变硬、变厚，创面基本愈合。

2.2 HE染色 A组第3天鸡冠真皮组织间以水肿为主，毛细血管减少不明显，第7天鸡冠真皮组织间水肿轻度减轻，毛细血管略减少，第14天鸡冠真皮组织间水肿明显减轻，毛细血管减少；B组第3天鸡冠组织水肿，表面坏死，炎性渗出物，大量炎细胞浸润，毛细血管减少，第7天鸡冠组织水肿减轻，炎性渗出物减少，炎细胞浸润，毛细血管减少，第14天鸡冠组织水肿明显减轻，胶原纤维轻度增生，毛细血管明显减少；C组第3天鸡冠组织表面坏死，炎性渗出物，高度水肿，大量炎细胞浸润，内皮细胞肿胀，毛细血管明显减少，第7天鸡冠组织水肿轻度减轻，仍有炎性渗出物，炎细胞减少，毛细血管明显减少，第14天鸡冠组织大量纤维组织增生，毛细血管减少效果明显优于其余2组。见图1。

图1 各组鸡冠组织学观察

2.3 毛细血管减少率 A、B、C组的毛细血管减少率分别为（68.03±1.80）%、（70.01±2.21）%、（89.63±1.93）%。A、B组之间比较差异无统计学意义（t=1.39P＞0.05），C组与A组、C组与B组之间比较差异均有统计学意义（t=34.31，22.09；均P＜0.05）。

3 讨论

鸡冠组织学表现与血管瘤相似，鸡和人的血红蛋白光吸收特性基本相同[5］。早在1992年我国学者顾瑛等[6］进行了相关研究，认为鸡冠及肉垂可作为毛细血管瘤的动物模型，由此以鸡冠为毛细血管瘤的动物模型是可行的。血管瘤在快速增长期可能出现溃疡、出血、感染等并发症，因此主张对血管瘤行早期干预治疗[7］。传统治疗血管瘤的方法包括液氮冷冻、局部硬化剂注射、放射性核素贴敷、浅层X线照射、口服激素、手术治疗等，这些方法不良反应较大，治疗后容易出现色素异常，多次治疗后更易出现瘢痕，所以在临床上的使用有一定的局限性。

临床中瘤体内注射糖皮质激素治疗血管瘤的方法已有多年[8］，曲安奈德做为中效糖皮质激素，能促进血管内皮细胞凋亡，从而抑制瘤体的增殖，并使血管瘤消退[9］。为避免系统使用糖皮质激素对机体造成的不良反应，临床上常给予局部瘤体内注射治疗血管瘤[10］。本研究中仅给予曲安奈德注射液可使鸡冠毛细血管减少，毛细血管减少率为（68.03±1.80）%，说明该疗法有治疗意义，但该疗法的缺点是易致皮肤萎缩，对于较大的血管瘤，由于治疗次数多，疗程长，易引起系统不良反应，如库欣综合征等。

根据氧合血红蛋白的吸收峰值，临床上常用585 nm脉冲染料激光治疗血管瘤，但照射深度＜1.5mm，所以对于较厚的血管瘤疗效较差，而1064nm Nd：YAG激光穿透力强，深度可达4～6 mm，但特异性相对差，对正常组织易造成损伤。Cynegy双波长激光器应用了multiplex技术，可以将585 nm脉冲染料和1 064 nm Nd：YAG两种激光按顺序相继发射，585 nm脉冲染料激光将氧合血红蛋白转变成为高铁血红蛋白，使得靶组织对Nd：YAG激光的吸收率增加了3～5倍，使1 064 nm的激光可以在低能量密度下达到疗效，从而减少不良反应的发生，增加安全性，减少瘢痕产生，提高疗效[11］。实验结果显示双波长激光组可以使毛细血管减少，毛细血管减少率为（70.01±2.21）%，与A组之间比较差异无统计学意义（t=1.39，P＞0.05），同样有治疗意义，但由于双波长激光穿透深度有限，对于位于皮肤深部的血管瘤疗效欠佳。笔者采用二者联合应用的方法，以期得到治疗血管瘤更好的效果，由本实验得出，通过组织学观察及计算，C组毛细血管减少率为（89.63±1.93）%，毛血血管减少率明显高于其余2组，C组与A组、C组与B组之间比较差异均有统计学意义（t=34.31，22.09；均P＜0.05），说明联合应用的方法对血管瘤的疗效明显高于单一疗法。由此可见联合疗法治疗血管瘤，可明显提高疗效，临床应用时，推测可以减少曲安奈德的用量及脉冲激光治疗次数，从而减少不良反应的发生。

本实验从基础理论研究，对双波长激光和曲安奈德注射液治疗血管瘤的机制作了进一步阐述，为临床提供理论依据，值得临床进一步探索。