半乳糖凝集素3在妊娠期糖尿病孕妇中表达及与胰岛素抵抗关系

杨云萍 刘春玲

湖北省宜昌市夷陵区妇幼保健院（443100）

妊娠期糖尿病（GDM）发病率较高，可导致妊娠期高血压等并发症［1］。GDM病因和发病机制尚不十分清楚，胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌降低被认为是发病重要环节［2］。半乳糖凝集素3（Galectin-3）是β?半乳糖苷结合蛋白，以糖基化终末产物（AGEs）受体发挥作用，与胰岛素抵抗存在一定关系［3－4］，国外有关 Galectin－3与 GDM 的相关性研究较多，研究结果均指向Galectin－3诱导了胰岛素抵抗的产生［5］。但目前国内少见相关研究。鉴于此，本研究拟探讨两者之间的相关性，为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月－2017年12月本院定期产检孕妇，GDM诊断标准参照美国糖尿病学会（ADA）标准［6］。纳入标准：妊娠≥16周；规律产检、资料完整且知情同意本研究。排除妊娠期高血压、心脏病等其他妊娠合并症、不配合本研究、终止妊娠等。依据GDM诊断标准将入组孕妇分为GDM组，非GDM组，根据参考文献［7］将GDM 患者按胰岛素抵抗指数（HOMA－IR）水平分为胰岛素抵抗组（HOMA－IR≥1.66）和非胰岛素抵抗组（HOMA－IR＜1.66）。

1.2 血清激素测定

所有研究对象均于清晨采集空腹静脉血，室温静置30min后，取血清离心取上层液-20℃保存待检。采用葡萄糖氧化酶法测定静脉空腹血糖（FPG）和糖负荷［75g 2h血糖（2hPG）］；放射免疫法测定空腹胰岛素（FINS）和糖负荷后2h胰岛素（PINS），试剂盒为中国原子能科学研究院提供。稳态模型计算HOMA-胰岛素抵抗指数（HOMA－IR）＝（FBG×FINS）／22.5；HOMA-胰岛素分泌指数（HOMA－IS）＝［（20×FINS）／FPG－3.5］。酶联免疫吸附试验检测血清Galectin－3水平，试剂盒购自美国Epitope Diagnostics公司。

1.3 胎盘组织蛋白检测

分娩后30min内取胎盘母体面中央组织1cm3，漂洗冷存待用。提取Galectin－3mRNA紫外分光光度法鉴定RNA纯度和完整性。逆转录系统（Reverse Transcription Kit）将 RNA 逆转录为cDNA，利用实时定量PCR系统进行RT－PCR反应，琼脂糖凝胶电泳，以U6分别作为miRNA的内参作对照，紫外灯下观察结果。2?ΔΔCt法计算Galectin－3mRNA相对表达量，蛋白印迹法检测胎盘组织Galectin－3蛋白表达水平。定量7500PCR仪购自美国ABI公司，逆转录系统购自美国GIBICOL公司。引物设计软件为Primer Premier 5.0，引物合成由金斯瑞生物科技有限公司完成。

1.4 统计学分析

采用SPSS25.0数据分析，珚x±s表示计量资料，组间比较采用独立样本t检验；Pearson相关系数描述Galectin－3mRNA、蛋白表达与血清Galectin－3、HOMA－IR的相关性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清 Galectin－3水平表达

孕妇血清 Galectin－3水平 GDM 组（32.01±6.17ng／ml）高于非 GDM 组（8.01±2.05ng／ml）（t＝28.50，P＝0.000），胰岛素抵抗组（42.17±7.85 ng／ml）高于非胰岛素抵抗组（28.14±5.37ng／ml）（t＝7.683，P＝0.000）。

2.2 胎盘组织 Galectin-3mRNA 表达

孕妇胎盘组织Galectin－3mRNA表达GDM组（0.71±0.67）高于非 GDM 组（0.41±0.25）（t＝3.236，P＝0.002），胰岛素抵抗组（0.97±0.85）高于非胰岛素抵抗组（0.54±0.37）（t＝2.389，P ＝0.020）。

2.3 胎盘组织Galectin－3蛋白表达

孕妇胎盘组织Galectin－3蛋白表达水平GDM（0.81±0.17）高于非 GDM 组（0.41±0.05）（t＝17.44，P＝0.000），胰岛素抵抗组（1.07±0.83）高于非胰岛素抵抗组（0.64±0.27）（t＝2.526，P＝0.015）。

2.4 Galectin－3胎盘与血清表达及 HOMA－IR的相关性

胎盘组织Galectin－3mRNA及蛋白表达与HOMA－IR呈正相关（P＜0.05），与血清 Galectin-3无关（P＞0.05），血清 Galectin－3与 HOMA－IR 呈正相关（P＜0.05），见表1。

表1 各检测指标相关性分析

3 讨论

相对胰岛素绝对缺乏1型糖尿病患者而言，2型糖尿病患者多存在胰岛素相对抵抗。新确诊糖尿病患者胰岛β细胞功能下降达90%，数量下降50%，若及时干预患者可较好控制血糖水平，延缓胰岛β细胞功能衰竭进程，抑制胰岛素抵抗，降低并发症的发生和进展［8］。因此寻找GDM早期诊断指标，对改善围产期妊娠结局有重要意义。

肥胖及慢性炎症与糖尿病胰岛素抵抗密切相关［9－10］，炎症介质可作用于胰岛素靶组织，导致胰岛素抵抗［11－12］。而 Galectin－3是由巨噬细胞等免疫细胞分泌，在免疫、炎症应答、肿瘤发生发展等发展过程中均有重要作用［13］，在肌肉和脂肪细胞等胰岛素靶器官中通过与胰岛素受体结合降低胰岛素活性［14］；还可通过阻断胰岛素信号通路，抑制胰岛素分泌；对巨噬细胞等免疫细胞有趋化作用，诱导巨噬细胞迁徙至胰岛素靶组织，导致更多Galectin－3释放，形成恶性循环，加重胰岛素抵抗［15］。

本研究结果显示，GDM孕妇血清Galectin－3水平明显高于非GDM孕妇，提示Galectin－3在GDM的发生过程中有一定作用。胰岛素抵抗水平是糖尿病胰岛细胞功能的一个重要指标，可量化反应糖尿病患者血糖代谢异常程度，因此研究血浆Galectin－3与GDM胰岛素抵抗的相关性，对于明确GDM的发病机制有一定的借鉴意义。本研究进一步分析GDM患者显示，胰岛素抵抗GDM孕妇外周血Galectin－3、胎盘组织Galectin－3mRNA及蛋白表达均高于非胰岛素抵抗GDM孕妇，提示Galectin－3在GDM胰岛β细胞功能衰竭进程中起到关键作用，同时也说明Galectin－3可能通过抑制胰岛素分泌直接或间接参与GDM的发生和发展，但具体机制尚需进一步研究证实。相关性分析显示，GDM胰岛素抵抗组胎盘组织中Galectin－3mRNA、蛋白表达、血清Galectin－3水平与 HOMA－IR呈正相关，说明GDM患者血清Galectin－3水平、胎盘组织Galectin－3mRNA及蛋白表达随胰岛素抵抗水平升高而升高，随胰岛素分泌能力升高而降低。提示临床可通过干预Galectin－3表达来阻止其对胰岛细胞功能的抑制，逆转胰岛功能衰退可能成为糖尿病治疗的新方向。

综上，本研究认为，GDM患者血清Galectin－3、胎盘组织Galectin－3mRNA及蛋白表达均明显增高，且水平随着GDM患者胰岛素抵抗而升高，提示Galectin－3可作为GDM早期诊断和预后的有效指标。但由于本研究纳入GDM患者样本过少，在GDM的发病机制中的作用仍需更多样本、多中心研究来证实。