妊娠早期MTHFR C677T基因多态性与同型半胱氨酸的相关分析

白 微 唐少华 蔡文品

1.温州医科大学（325000）2.浙江省温州市中医院

妊娠早期母体状况对胎儿发育影响重大，其中母体同型半胱氨酸（HCY）与复发性流产、子痫前期、胎儿畸形、神经管缺陷等密切相关。5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶 （MTHFR）是HCY代谢通路的关键酶，参与HCY转变为蛋氨酸的过程，从而减低血液中HCY的水平。MTHFR基因的多态性将导致其编码的酶活性的缺失或降低，是导致体内HCY水平升高的重要因素。该基因位点C677T碱基突变非常常见，在人群中有3种基因型（CC，CT，TT）并已被证实与HCY水平相关。本研究通过检测早期妊娠妇女的MTHFR基因型及血HCY浓度，了解本地区MTHFR基因多态性分布情况，探讨其与HCY的关系，为临床早期妊娠风险评估提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年6月—2016年7月来浙江省温州市中医院行孕早期检查的妊娠妇女1052例，年龄（30.7±5.6）岁，均为汉族。无高血压、糖尿病、肾脏疾病等基础疾病。本研究获温州市中医院伦理委员会批准，所有妇女均签署知情同意书。

1.2 检测

1.2.1 基因多态性 空腹采集孕妇外周静脉血2ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。提取全血的全基因DNA，借助荧光PCR技术，利用探针可与DNA模板特异性结合的特点，通过荧光的不同分辨样本的基因型。试剂盒购自深圳奥萨医疗有限公司。

1.2.2 HCY 空腹采集外周静脉血3ml，待凝固后离心，留取血清。采用循环酶法，以罗氏全自动生化分析仪进行检测。

1.3 统计方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。对基因型在人群中的分布行Hardy－Weinberg平衡检验，基因型的分布频率用百分数表示，本地区与其他地区的频率比较采用卡方检验并两两比较；HCY的浓度用（珚x±s）表示，比较采用方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTHFR C677T 基因型检出

分析1052例样本，检出CC型443例，占42.1% ；CT型469例，占44.6%；TT型140例，占13.3%；等位基因C、T的检出率分别为64.4%、35.6%。对该数据进行Hard－Weinberg平衡分析，MTHFR C677T在该人群中的分布处于H－W平衡状态（χ2＝0.41，P＝0.814），样本具有本区域群体代表性。

2.2 MTHFR C677T 基因型分布特点

经卡方检验两两比较，本地区基因型频率与杭州、上海、镇江、郑州、临沂、琼海等地区比较差异有统计学意义，与湘潭、松滋等地区比较差异无统计学意义。见表1。

表1 各地区基因型频数及比较［例（%）］

2.3 基因型与血HCY浓度的比较

经方差分析，CC、CT、TT基因型HCY浓度分别为（5.8 ±1.5 ）μmol／L、（5.7 ±1.2）μmol／L、（6.4±2.7）μmol／L ，有统计学差异（P＜0.05）；两两比较，CC型和CT型与TT型有统计学差异（P＜0.05）。

3 讨论

MTHFR C677T位点位于第一号染色体MTHFR基因第5个外显子上，C677T基因的CT杂合型突变可使酶的活性下降35%，TT纯合型突变更可使酶的活性下降70%［9］。基因变异引起HCY增高，刺激血管壁引起动脉血管损伤，导致炎症和管壁的斑块形成。Henk等［10］研究指出发生C677T纯合突变的母亲其出生神经管畸形（NTDs）胎儿的危险性可提高60%，MTHFR基因多态性与神经管畸形、唐氏综合征、先天性心脏病、唇腭裂等出生缺陷都有显著相关性。妊娠期妇女血液可呈高凝状态，高HCY可损伤血管内皮细胞的结构和功能，增加胎盘血栓形成的风险，使胎儿供血不足，甚而导致流产、妊娠高血压综合征、胎儿生长受限、早产等。Kosmas等［11］应用 meta分析了23篇关于MTHFR基因C677T突变与妊娠高血压疾病的研究文献（包括3169例妊娠期高血压疾病患者和3044名对照组孕妇），发现携带T等位基因的孕妇发生妊娠高血压疾病的风险增加1.2倍。钟慧军等［12］研究发现，中国宁夏地区汉族人群带有TT基因型个体发生重复流产的危险度明显增高，是CC基因型个体的8.4倍。杨文方等［13］研究发现TT基因型个体发生早期流产的危险度显著增高，是CC基因型个体的3.6倍，CT基因型个体发生早期流产的危险度是CC基因型个体的3.3倍。

本文资料MTHFR C677T基因3种基因型CC型、CT型、TT与国内大部分地区的基因型频率有统计学差异，与镇江、郑州两市差异较大，而与湘潭、松滋地区较相似，MTHFR C677T具有本地区特征性，TT基因型频率在各地区处于中等水平。目前温州地区孕妇孕早期统一于社区医院建册，社区医院应加大宣传力度，建议孕早期有风险的妇女进行MTHFR基因筛查。本研究发现，温州地区MTHFR C677T基因型与血HCY浓度的关联性分析，TT基因型个体的血HCY浓度高于CC基因型和CT基因型，CC基因型和CT基因型差异不大。因此，建议临床将MTHFR基因作为孕早期筛查项目，对TT基因型孕妇从妊娠早期开始就要密切关注血HCY浓度及其他各指标的变化，以评估孕妇血液状态及胎儿生长发育，指导早期妊娠时叶酸服用。本研究不足之处在于只针对妊娠早期进行研究，后期应扩大研究范围，对妊娠各孕周进行研究比较。