急性心肌梗死恢复期患者肠道微生物菌群变化研究

王 超,刘亚忠,孙亚伟

0 引言

急性心肌梗死是心血管内科常见疾病之一。已有研究表明，约有70%的急性心肌梗死患者存在不同程度的肠道屏障功能受损，若不治疗，可能会诱发肠道菌群移位，从而导致内毒血症的发生、发展。肠道菌群是人体内强大微生态系统的重要组成部分，在营养、代谢及疾病方面发挥至关重要的作用[1-2]。本研究选取2017年5月至2018年5月我院收治的急性心肌梗死恢复期的43例患者作为研究组，同时选取43名健康人作为对照，观察急性心肌梗死患者恢复期肠道微生物菌群变化情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年5月至2018年5月我院收治的急性心肌梗死恢复期患者43例(研究组)，男21例，女22例，年龄36～78岁，年龄(52.3±2.4)岁，体重76.2～86.6 kg，体重(78.6±1.8)kg。前壁梗死18例，后壁梗死9例，下壁梗死16例；心力衰竭17例，心律失常19例，心源性休克7例；复发17例，首发26例。采用植物乳杆菌 F22 菌液进行治疗，所有患者均无其他方面疾病。健康组43例，男23例，女20例，年龄36～79岁，平均(53.2±2.6)岁，体重77.1～87.9 kg，平均(78.1±1.7)kg。两组一般资料具有可比性，并知情同意，同时经过医院伦理委员会批准。

病例纳入标准[3]：①患者均处于急性心肌梗死恢复期；②神志清晰、可正常沟通交流、有一定文化的患者；③患者无精神异常。病例排除标准：①患者同时患有其他方面的严重疾病；②沟通存在障碍，依从性差；③患者有明显的精神疾患。

1.2 方法 于采样前一天晚上7点后禁食、禁水，晨起进行空腹血样采集，采2 ml肘部静脉血液，并进行血清分离。

每位患者留取50 g新鲜清洁的粪便，将冰箱温度设置在-80 ℃，把粪便样本放置其中保存，并进行统一检测。试剂盒采用美国生产的Stool DNA kit试剂盒，提取粪便样本中的DNA，操作步骤参照试剂盒说明书进行；对粪便菌群DHA的肠道菌群进行扩增时，以16SrRNA基因V3区呈现的特异性序列为靶标，以518R：5′-ATTACCGCGGCTGG-3′作为引物序列，CG-338F：5′-CGCCCGGGGCG-CGCCCCGGGCGGGGC-GGGGGCACGGGGGGCCT-ACGGGAGGCAGCAG-3′在此基因中GC夹为“CGC-CCGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGG-GGGG”。Dream Taq Green PCR Master Mix 25 μl为PCR的扩增反应体系统，(10 pmol/μl)1 μl为上游引物，(10 pmol/μl)1 μl为下游引物，DNA模板为3 μl，将其去离子水(Nuclease-free)进行补足，使其总体积达到50 μl，进行5 min的预变性，温度为94 ℃；30 s变性，温度持续保持在94 ℃，采用30 s的退火处理，温度降至54 ℃，进行30 s的延伸处理，温度为72 ℃，持续30个循环。

延伸处理5 min，温度为72 ℃，最后15 min温度降至为4 ℃，该程序为PCR扩增的反应程序。

对PCR产物进行检测，待PCR反应完成后，用含溴化乙锭1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳。使其产物进行扩增，电泳电压设定为80 V，时间为20 min，采用UVI全自动凝胶成像系统对电泳后的扩增结果进行检测，目的条带长度约为250 bp。

变性梯度凝胶电泳时，聚丙烯酰胺凝胶含量为8%，平行电泳变性梯度在25%～55%之间，其中包含40%(v/v)的去离子甲酰胺及7 mol/L尿素，以上为100%变性梯度。采用微量进液器给以5 μl点样。进行电泳时先进行预电泳，使用1×TAE缓冲液，电压为200 V，温度设定在60 ℃下进行，时间持续10 min以上，然后将固定电压调成150 V，温度依然保持在60 ℃下进行电泳，时间为4.5 h。随后采用EB进行10 min的染色，然后放置去离子水中进行5 min的漂洗。最后成像时采用UVI全自动凝胶系统成像，相似分析时利用QuantityOne软件进行[4-5]。

对研究组进行急性心肌梗死针对性治疗，并于治疗后72 h的病情缓解期内再次检测患者肠道菌群数量变化。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0软件，计数资料比较采用卡方检验，符合正态分布的计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组肠道微生物菌群比较 研究组乳酸菌、双歧杆菌、总厌氧菌数量均少于对照组(P<0.05)，而肠杆菌、肠球菌、总需氧菌数量多于对照组(P<0.05)，见表1。

2.2 研究组治疗前后肠道微生物菌群比较 治疗72 h后，研究组乳酸菌、双歧杆菌、总厌氧菌数量增加(P<0.05)，肠杆菌、肠球菌和总需氧菌数量减少(P<0.05)，见表3。

3 讨论

急性心肌梗死的主要危险因素包括三高人群、吸烟及家族遗传。目前研究认为，炎症也有可能引发心肌梗死。冠状动脉出现动脉粥样硬化，而来自G-菌细胞壁的脂多糖有促进动脉粥样硬化的效果。有研究认为，脂多糖的增多与肠道菌群失调有着密切联系，由于肠道微生物菌群失调促使脂多糖增加，导致了慢性炎症性内毒素血症的发生[6-7]。有报道，患者出现冠状动脉粥样硬化时，其肠道菌群也会发生变化[8]。本文探究了急性心肌梗死恢复期患者肠道微生物菌群变化情况。

表1 两组肠道微生物菌群比较(lgCFU/g)

表2 研究组治疗前后肠道微生物菌群比较(lgCFU/g)

本研究结果显示，研究组乳酸菌、双歧杆菌、总厌氧菌数量均少于健康对照组，而肠杆菌、肠球菌、总需氧菌数量多于对照组，表明研究组急性心肌梗死患者有明显的肠道菌群紊乱，与以往研究结果相近[9]。同时，亦有研究结果显示，肠道微生物菌群的失调会促使心肌梗死的发生[10]。若患者有炎症性肠炎，则出现冠心病的风险较高，因此，肠黏膜功能受损会促进心肌梗死的发生[11]。由于肠屏障功能出现损伤会加重肠黏膜的通透性，循环系统容易受到肠道细菌及其产物的入侵，从而使患者出现冠状动脉粥样硬化[12-13]。有动物实验表明，使用过多含脂肪或胆固醇的食物，会使其肠上皮细胞酶在数小时内发生急性炎症反应[14]。究其原因，可能为肠道微生物菌群失调，同时，益生菌减少时，食物中的胆碱会通过肠道内细菌消化后产生三甲胺，而三甲胺经过肝脏的代谢会产生三甲胺-N-氧化物。该氧化物不但会使冠状动脉发生粥样硬化，也会使心脑血管的相关疾病发生率显著增加[15]。

本研究显示，治疗72 h后，研究组患者肠道微生物菌群有了显著改善，表明在对急性心肌梗死患者治疗的同时，也可改善了患者肠道微生物菌群的分布。急性心肌梗死可造成肠道微生物失调，而肠道微生物失调在一定程度上又可加重急性心肌梗死的严重程度。因此，在急性心肌梗死患者的治疗过程中，应注意调节其肠道菌群。目前，对肠道微生物菌群在机体代谢以及与机体发生作用的机制尚不明确。本文由于病例所限，没有进行更加深入的研究，后续会加大样本量进行相关研究。

综上所述，急性心肌梗死患者出现了明显的肠道微生物菌群紊乱，经过治疗后，急性心肌梗死恢复期患者肠道菌群紊乱得到明显改善。因此，在进行急性心肌梗死治疗时，应注意对患者肠道菌群的纠正，以防止脓毒血症、感染、休克等并发症的发生发展。