孤独症儿童外周血淋巴细胞亚群的研究

(临沂市精神卫生中心，山东 临沂 276005)

儿童孤独症是一种起病于婴幼儿时期，以社会交往障碍、兴趣狭窄及刻板、行为方式重复刻板为主要临床表现的疾病，是广泛性发育障碍里最常见、最具代表性的一种[1]。近年来，该病的患病率明显增加，多数报道在1‰以上[2]。关于其病因学研究也越来越多，越来越深入，其中免疫学因素与孤独症的关系被广泛研究和讨论。本研究对孤独症儿童的淋巴细胞亚群与健康儿童进行比较，观察两者的异同，旨在探讨淋巴细胞亚群与孤独症的关系。

1 对象和方法

1.1研究对象 病例组：共40例，均为2018年1-11月在本院就诊的孤独症患儿，纳入标准：符合美国《精神病学诊断和统计手册中第5版》(DSM-V)中孤独症的诊断标准，使用儿童孤独症评定量表(Childhood autism rating scale，CARS)协助诊断。排除标准：聋哑；肿瘤或其他严重躯体疾病；Asperger综合征等其他广泛性发育障碍；21-三体综合征等遗传性疾病；单纯语言发育障碍；儿童精神分裂症；其他诊断不明确的精神病性障碍。其中，男童27例，女童13例；年龄2～8岁，平均(4.13±1.74)岁；病程：1～6年，平均(3±1.24)年。对照组：40例，在本院附近的幼儿园、小学中选取性别、年龄、家庭状况与孤独症组儿童相似的健康儿童，排除有精神发育迟滞、注意缺陷多动障碍、抽动障碍、精神分裂症等各种精神类疾病及聋哑等严重躯体疾病的儿童，其中男童27例，女童13例，年龄2～8岁，平均(4.52±1.81)岁。两组儿童的性别比、年龄比较无统计学意义(P>0.05)。两组研究对象在抽血前3个月内均无感染、过敏、外伤等病史。所有被试者的监护人均自愿参与本研究，并签署知情同意书。

1.2方法 采血时间在上午7:00～9:00，使用ETDA抗凝管抽取受试者空腹静脉血3 ml，室温(20 ℃～25 ℃)存放，无溶血、凝血。运用流式细胞术测定淋巴细胞亚群CD3+、CD8+、CD19+、和NK细胞相对计数，以百分比表示。

1.3评估工具 CARS由15项内容组成，每项按严重程度1～4级评分，最高分为60分。总分30以下无孤独症；总分30～35分且高于3分的不到5项，为轻-中度孤独症；总分≥36分且至少5项≥3分，则为重度孤独症。病例组经至少2名高年资精神科医师明确诊断后纳入，并使用CARS对患儿症状严重程度进行分类。

2 结果

2.1两组淋巴细胞亚群的比较 两组CD3+、CD8+、CD19+细胞水平比较差异无统计学意义，病例组NK细胞水平高于对照组，见表1。

2.2症状严重程度与淋巴细胞水平的关系 根据CARS评估结果，病理组轻-中度17例，重度23例，两组的淋巴细胞水平比较均无统计学意义，见表2。

表1 两组淋巴细胞亚群水平的比较

表2 不同疾病程度者的淋巴细胞亚群水平比较

3 讨论

目前，国内外关于儿童孤独症的病因学研究进展迅速，但其确切病因和发病机制尚不清楚。尽管如此，许多研究均已证实孤独症儿童的免疫功能存在异常[3]；有研究显示孤独症与系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等家族性自身免疫性疾病有关[4]；大量研究表明孤独症患儿血液及脑脊液中免疫细胞、自身抗体、炎性因子等发生改变[5]。总之，越来越多的证据表明，免疫系统异常在孤独症的发病机制中发挥了重要作用。由于实验条件、选择指标等不同，目前临床上关于免疫系统与孤独症发病相关性的研究结果不尽相同。有研究表明，神经系统发育受神经细胞和T细胞相互作用调控，T细胞的数量和活性的改变都可能会影响神经系统的正常发育。Ashwood等发现CD3+ T细胞表达HLA-DR增多，CD8+ T细胞表达CD26增多。López-cacho等[6]的研究发现CD8+T细胞数量增多，而本研究中病例组的CD3+ 、CD8+T细胞水平与对照组相比差异不显著，这可能与本研究的样本量偏小有关，且本研究未对淋巴细胞活性进行比较研究，这也是本研究的不足，尚需进一步探讨。

本研究中两组CD19+B淋巴细胞水平统计学差异不明显，这与Heuer[7]等的研究结果一致的，但韩登科[8]等人的研究发现与正常儿童相比，孤独症儿童的CD19+细胞水平显著增高。造成这种差异的原因可能是样本量不同、检测方法有所不同等。

本研究中病例组的NK细胞水平较正常对照组显著增高，这可能是NK细胞活性的降低导致其细胞数量代偿性增加，与本研究结果类似的是Vojdani等人曾对1027例孤独症患者进行了研究，结果显示与健康对照组相比，45%的孤独症儿童存在NK细胞活性降低。NK细胞是一种大颗粒样淋巴细胞，是机体免疫防御过程中的第一防线，其主要作用是抗病毒和肿瘤，有研究显示孤独症儿童肿瘤发病率较正常人高[9]，这也从另一角度证实了孤独症患儿的NK细胞活性显著降低。

本研究中轻-中度组与重度组的淋巴细胞亚群水平差异不明显，说明淋巴细胞亚群水平的高低与孤独症的严重程度关系不密切。当然，受样本量的限制，仍需进一步深入研究。总之，孤独症儿童免疫系统异常及其与临床症状的相关性仍需继续探讨。本研究虽然样本量较小，研究深度和广度也有待进一步加强，但部分结果与国内外研究取得较好的一致性，这为孤独症发病的免疫学因素方面提供了重要参考。